Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67在三阴性乳腺癌患者中的表达变化*

赵长燕,张明慧,贺红梅,周 杰

1.秦皇岛市妇幼保健院病理科,河北秦皇岛 066000;2.高县人民医院内科,四川宜宾 645150

三阴性乳腺癌是乳腺癌中较为特殊的类型,其预后相对较差,是临床诊治与研究的重点。针对三阴性乳腺癌相关指标表达情况的研究与掌握有助于疾病的早期诊断和有效诊治[1-2]。紧密连接蛋白-4(Claudin-4)、叉头框蛋白C1(Foxc1)、p53、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)及细胞增殖核抗原(Ki-67)等是在恶性肿瘤研究中较多的指标[3-5],但关于其与乳腺癌患者临床病理参数的关系研究较少。因此,本研究探讨三阴性乳腺癌患者Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67的表达变化,为三阴性乳腺癌的临床诊治提供参考依据,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月至2022年1月就诊于秦皇岛市妇幼保健院的90例三阴性乳腺癌患者作为观察组,以及同期的90例非三阴性乳腺癌患者作为对照组。排除标准:(1)入组前已接受放化疗、免疫治疗等者;(2)非原发性乳腺癌者;(3)合并其他恶性肿瘤者;(4)合并代谢性疾病者;(5)合并肝、肾功能障碍者;(6)免疫功能缺陷者;(7)临床资料不完整者。观察组年龄29～66岁,平均(53.16±7.71)岁,病灶最大径为1.2～7.0 cm,平均(3.56±0.76)cm。对照组年龄30～66岁,平均(53.13±7.90)岁,病灶最大径1.3～6.9 cm,平均(3.53±0.73)cm。两组患者年龄与病灶最大径比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经秦皇岛市妇幼保健院医学伦理学委员会批准。所有患者和家属同意参与本研究并签署书面文件。

1.2方法 采集两组病灶组织标本,将其常规进行甲醛固定及石蜡包埋等处理,进行免疫组化检测,切片厚度4 μm连续切片,以免疫组织化学法进行染色,将石蜡切片、脱蜡、水化,消除内源性过氧化物酶,再依次进行冲洗、抗原修复和暴露,室温孵育10 min,在每张切片上分别滴加100 μL一抗工作液(北京中杉金桥生物技术有限公司);4 ℃孵育过夜,磷酸盐缓冲液(PBS)清洗3次,每次3 min,滴加二抗(100 μL酶标记羊抗鼠/兔IgG聚合物,北京中杉金桥生物技术有限公司),室温孵育后,PBS清洗3次,每次3 min。采用DAB显色,苏木素进行复染。由2名经验丰富的病理医师阅片,按照染色强度及阳性细胞百分比进行结果的判断。统计及比较两组组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67的阳性率,以及观察组不同年龄、肿瘤分期、组织学分级及淋巴结转移情况患者的阳性率。

1.3阳性评价标准 染色评分:以无染色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;阳性细胞评分:以无阳性细胞为0分,<25%为1分,25%～50%为2分,>50%为3分。以上述两项评分的乘积作为判定结果,<4分为阴性,≥4分为阳性。

2 结 果

2.1两组Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率比较 观察组组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率比较[n(%)]

2.2观察组不同病理特征患者组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率比较 观察组不同年龄及疾病分期患者组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),不同组织学分级及淋巴结转移情况者的上述指标阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 观察组不同病理特征患者Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率比较[n(%)]

2.3Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67与临床病理参数的关系 相关性分析显示,组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67与组织学分级及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 组织Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67与临床病理参数的关系分析

3 讨 论

三阴性乳腺癌是乳腺癌中预后相对较差的类型,其具有较为特殊的生物学行为,远处转移的风险相对较高,晚期患者的5年生存率较低,是临床重视程度极高的一类疾病[6-7]。而临床中与三阴性乳腺癌相关的诊治研究中,与疾病发生发展相关的组织指标的表达变化研究相对较多,且涉及的研究指标较多。Claudin-4作为紧密连接蛋白家族的主要成员之一,在消化系统及泌尿系统肿瘤中的表达变化对细胞内的多条信号转导通路等有较大影响[8],但是关于其对三阴性乳腺癌的影响的研究较少。Foxc1是与细胞迁移、分化等密切相关的指标,既往有研究显示,其在多类恶性肿瘤患者中呈现过表达状态[9]。p53、EGFR、CK5/6及Ki-67等是在乳腺癌中研究相对较多的指标,其在肿瘤细胞周期变化及DNA修复能力等方面均有较强作用,同时也与肿瘤新生血管生成及肿瘤细胞增殖等密切相关[10-14]。

本研究结果显示,三阴性乳腺癌患者组织Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率显著高于非三阴性乳腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05),说明上述指标对于区别三阴性与非三阴性乳腺癌有一定价值,这可能与三阴性乳腺癌的转移侵袭能力等相对更高有关;本研究结果还显示,不同年龄及肿瘤分期的三阴性乳腺癌患者的上述指标阳性率差异无统计学意义(P>0.05),而不同组织学分级及淋巴结转移情况的三阴性乳腺癌患者的上述指标阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。本研究中,相关性分析显示,组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67与组织学分级及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),提示组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67在对三阴性乳腺癌的组织学分级及淋巴结转移情况也有一定的检测意义。分析原因可能为:三阴性乳腺癌的侵袭程度较高,转移风险较大,而与肿瘤侵袭转移相关的各类指标也表达水平相对较高[15-17];Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67等作为与疾病相关血管生成、细胞增殖及DNA修复等多方面相关的指标,其表达水平高往往提示疾病的侵袭性强,疾病进展与转移的风险高[18-20]。周敏[10]研究显示,阴性乳腺癌病灶组织Ki-67、p53及EGFR表达水平均显著升高,与本研究结果基本一致,而周敏的研究还显示,化疗后患者Ki-67、p53及EGFR表达水平呈不同程度的降低,尤其是治疗效果较好者,上述指标表达水平降低幅度更大。徐甜甜等[18]研究也显示,p53、 Ki67、CK5/6与三阴性乳腺癌肿瘤分期、分级及转移的关系,也与本研究结果相近。

综上所述,三阴性乳腺癌患者组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67呈高表达,且与组织学分级及淋巴结转移情况密切相关,对三阴性乳腺癌的诊断价值相对较高。