鼻咽癌患者中EB病毒抗体研究概述

吴文娟，王新明，许东勤，郑凯，丁瑞贤

（郑州安图生物工程股份有限公司，河南 郑州 450016 ）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）作为一种鼻咽黏膜处的恶性肿瘤，在全球范围内均会发生，但是70%的鼻咽癌患者出现在中国，因此，又称“中国癌”。在中国，鼻咽癌主要发生在广东、广西、福建等中南部沿海地区，且男性阳性率高于女性，鼻咽癌患者主要为中年人，少数为年轻人［1］。在北非、加拿大等地，NPC 的发病率也很高［2］。根据世界卫生组织（WHO）制定的分类（2003 年版）标准，NPC 包括以下几类：角化型鳞状细胞癌（a 类）、非角化型鳞状细胞癌（b类）和基底细胞样鳞状细胞癌［3］。我国中南部地区主要为非角化的鼻咽癌，并与EB 病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染有很大关系。引发NPC 的原因有遗传易感性、饮食原因和EBV 感染等。1980 年，第一次发现EBV 感染与NPC 之间的联系，在鼻咽癌患者的血清中发现了高滴度的EBV 抗体，其中包括EB 病毒衣壳抗原（viral capsid antigen,VCA）抗体和早期抗原（early antigen,EA）抗体，后来，采用原位杂交证实了NPC 细胞中的EBV 基因组［4］。鼻咽癌恶性率高，早期可发生颈部淋巴结转移。许多患者在出现明显症状后，已经处于晚期阶段，因此鼻咽癌的早诊早治非常重要。

EBV 属于人类疱疹病毒 4 型（human herpesvirus 4,HHV-4），是第一个被发现的人类肿瘤病毒，EBV 为双链DNA 病毒，基因全长172 kb［5］。序列分析研究发现，EB 病毒DNA 有84 个开发阅读框，在病毒复制周期中大约编码110 个基因，主要表达EA、VCA、核心抗原（nucleus antigen,NA）等60 多种蛋白［6-10］。机体会针对这些抗原产生特异性抗体，EBV 原发感染首先出现的是VCA-IgM抗体，大约3～15 d VCA-IgG 抗体出现，恢复期会产生NA-IgG 抗体；急性感染期EA-IgG 抗体产生，如果VCA-IgA 和EA-IgA 抗体阳性表明EBV 抗原的持续刺激，主要用于EBV 相关疾病的诊断，比如鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、慢性活动性EBV 感染等［11-14］。关于鼻咽癌专家共识和指南中提到的EBV 抗体笔者进行了总结，如表1 所示。专家共识和指南中均指出EBV 抗体可用于鼻咽癌的诊断或者监测，但是至于鼻咽癌患者不同临床分期以及治疗过程中的EBV 抗体出现顺序以及阳性率情况目前还没有明确的研究，这就导致EBV 抗体在监测鼻咽癌临床分期和治疗后监测应用中缺乏一定的理论依据。

表1 鼻咽癌指南或专家共识关于EBV 抗体的推荐意见

基于以上鼻咽癌专家共识和指南，并结合专家学者的研究成果，选择EBV VCA-IgA、VCAIgM、EA-IgA、EA-IgG、NA1-IgA 5 种抗体进行鼻咽癌患者中EBV 抗体的研究。选择郑州安图生物工程股份有限公司在研的EB 病毒早期抗原IgA 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒早期抗原IgG 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒核抗原IgA 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒衣壳抗原IgA 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒衣壳抗原IgM 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法），通过临床样本检测分析鼻咽癌患者中各抗体阳性率情况，为后期EBV 抗体检测在鼻咽癌临床中的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本 本临床试验选择临床确诊为鼻咽癌患者的血清或血浆样本2 068 份进行检测，样本来自广东省（鼻咽癌高发区）不同地区。

1.1.2 样本的采集与保存 样品采集、处理后在室温下存放不能超过48 h；若48 h 内未进行试验，应将样品置于2℃～8℃冷藏，分离后的样品可在2℃～8℃保存7 d；如需长时间储存或运输，应先提取血清或血浆，置于-20℃保存12 个月，避免反复冻融。冷冻保存的样品恢复至室温，轻轻摇匀，离心除去不溶性物质。

1.1.3 试剂 郑州安图生物工程股份有限公司在研的EB 病毒早期抗原IgA 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒早期抗原IgG 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒核抗原IgA抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒衣壳抗原IgA 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）、EB 病毒衣壳抗原IgM 抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）。欧蒙医学诊断（中国）有限公司的抗EB 病毒衣壳抗原抗体IgM 检测试剂盒（酶联免疫吸附法）Anti-EBV-CA ELISA（IgM）、抗EB 病毒早期抗原IgA 抗体检测试剂盒（酶联免疫吸附法）Anti-EBV-EA-D ELISA（IgA）；郑州安图生物工程股份有限公司在产的EB 病毒早期抗原IgG 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）、EB 病毒壳抗原IgA 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）、EB 病毒核抗原IgA 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）。

1.1.4 主要仪器 安图AutoLumo A2000 Plus 化学发光检测仪、安图LUMO 化学发光免疫分析仪。

1.2 方法

采用盲法分别用郑州安图生物工程股份有限公司在研的EBV5 项试剂及已上市试剂对收集的2 068 份鼻咽癌患者样本进行平行检测。然后通过SPSS 软件统计各项目与上市产品的符合率以及单项目、多项目阳性率情况。

采用交叉四格表的方法计算考核试剂与对比试剂检测结果的阳性符合率、阴性符合率和总符合率及其95%置信区间，并进行Kappa 一致性分析，见表2。

表2 交叉四格表法计算考核试剂与对比试剂的符合率

阳性符合率=a/(a+c)×100%

阴性符合率=d/(b+d)×100%

总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)×100%

采用交叉四格表的方法计算考核试剂血清或血浆检测结果的阳性符合率、阴性符合率和总符合率及其95% 置信区间，并进行Kappa 一致性分析。

2 结果

2.1 EBV 抗体检测试剂盒符合率结果统计

检测VCA-IgA 抗体，安图磁微粒与已上市安图酶免结果阳性符合率为99.90%（1 034/1 035），阴性符合率为99.90%（1 032/1 033），总符合率为99.90%。因此，安图磁微粒与已上市安图酶免在结果判定上有良好的一致性（Kappa=1）。见表3。

表3 VCA-IgA 抗体检测试剂盒比对结果（例）

检测VCA-IgM 抗体，安图磁微粒与已上市欧蒙酶免结果阳性符合率为100%（1/1），阴性符合率为100%（2 067/2 067），总符合率为100%。因此，安图磁微粒与已上市欧蒙酶免在结果判定上有良好的一致性（Kappa=1）。见表4。

表4 VCA-IgM 抗体检测试剂盒比对结果（例）

检测EA-IgA 抗体，安图磁微粒与已上市欧蒙酶免结果阳性符合率为99.85%（679/680），阴性符合率为99.42%（1 380/1 388），总符合率为99.56%，因此，安图磁微粒与已上市欧蒙酶免在结果判定上有良好的一致性（Kappa=1）。见表5。

表5 EA-IgA 抗体检测试剂盒比对结果（例）

检测EA-IgG 抗体，安图磁微粒与已上市安图酶免结果阳性符合率为100%（1 486/1 486），阴性符合率为99.66%（580/582），总符合率为99.90%，因此，安图磁微粒与已上市安图酶免在结果判定上有良好的一致性（Kappa=1）。见表6。

表6 EA-IgG 抗体检测试剂盒比对结果（例）

检测NA1-IgA 抗体，安图磁微粒与已上市安图酶免结果阳性符合率为100%（1 030/1 030），阴性符合率为99.61%（1 034/1 038），总符合率为99.81%，因此，安图磁微粒与已上市安图酶免在结果判定上有良好的一致性（Kappa=1）。见表7。

表7 NA1-IgA 抗体检测试剂盒比对结果（例）

试验结果表明，在鼻咽癌患者中，71.95%的患者EA-IgG 抗体阳性，50.00% 的患者VCA-IgA抗体阳性，50.00% 的患者NA-IgA 抗体阳性，33.22%的患者EA-IgG 抗体阳性，但2 068 份患者样本中，仅1 名鼻咽癌患者VCA-IgM 抗体阳性，阳性率仅为0.05%。说明在不同鼻咽癌患者中，抗体的阳性率表现不一致，这可能与鼻咽癌患者的临床周期以及自身抗体免疫系统有关。见表8。

表8 EBV 抗体阳性率结果统计 ［n=2 068,n(%)］

试验结果表明，在鼻咽癌患者中，4 种EBV抗体（EA-IgA、EA-IgG、NA1-IgA、VCA-IgA）均是阳性的患者占比25.15%，占比量最高，其次是EA-IgG 单抗体阳性患者，占比为13.39%，3 种EBV 抗体阳性的患者，占比为17.07%。见表9。

表9 EBV 抗体阳性率结果统计（n=2 068）

3 讨论

潜伏性EBV 感染的切换和建立是一个进入NPC 发病机制的重要步骤。在潜伏感染期间，病毒基因的表达概况是细胞环境依赖性的。至少有三种类型的EBV 潜伏感染模式被公认，涉及不同疾病和感染细胞类型。那么不同基因的表达也就意味着，在不同的感染时期及感染模式下表达的病毒蛋白不一致，那么，在不同疾病不同周期需要检测不同的EBV 抗体。由于鼻咽癌发生的部位在鼻咽部，它位于鼻腔的后方，是不容易被发现的部位。鼻咽癌早期并没有显著的症状，且早期出现的头疼、鼻塞等症状，不容易引起患者的重视，就很容易错过最佳的治疗时期。因此，对于鼻咽癌患者来说，提高生存率的关键在于早期诊断、早期治疗。EBV 血清学诊断无疑是鼻咽癌早期筛查、诊断的一个高效途径。目前常用于鼻咽癌的EBV 抗体标志物有：VCA-IgA、EA-IgA、EAIgG、NA1-IgA、VCA-IgM 等。

从上述研究结果可知，在鼻咽癌患者中，EBV 抗体VCA-IgA、EA-IgA、EA-IgG、NA1-IgA、VCA-IgM 的阳性率分别为50.00%、33.22%、71.95%、50.00%、0.05%，VCA-IgM 抗体阳性率较低，与鼻咽癌之间的相关性较小，主要是因为鼻咽癌广泛用于急性感染的诊断，但其抗体在体内消失较快，因此临床诊断必须结合其他指标，提高检测结果的准确性。除此之外，笔者可知研究中的另外4 个EBV 抗体与鼻咽癌的相关性较高。邓日辉等［19］（2022 年）也针对这4 个EBV 标志物与鼻咽癌的关系进行了研究，评价了EB 病毒4 种抗体联合检测在鼻咽癌筛查中的临床价值，通过收集205 例已确诊为鼻咽癌患者研究表明，EBV抗体VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、NA1-IgA 阳性检出率分别为70.73%、41.46%、44.39%、58.05%。黄玲［20］（2020 年）研究表明EA-IgA、VCA-IgA 和Rta-IgG 抗体单独诊断鼻咽癌的灵敏度分别为57.20%、47.35%、75.38%，Rta-IgG（Rta蛋白为EA 蛋白的一种）阳性率达75.38%这与笔者的研究结果71.32%基本保持一致。

综上所述，EBV 抗体VCA-IgA、EA-IgA、EAIgG、NA1-IgA 与鼻咽癌患者均有一定的相关性，联合检测做到了EBV 抗体全覆盖，筛查更全面，弥补了单一指标检测的不足。鼻咽癌筛查时，可采用4 种抗体并联检测来提高鼻咽癌筛查的灵敏度，降低漏诊率；采用串联检测来提高特异性，为鼻咽癌的筛查提供更高可靠性。