三重四极杆液质联用仪同时测定酱腌菜中纽甜、三氯蔗糖的方法研究

姜 薇，高增兴，王珊珊，高金芳，张贵秋，马英红

（潍坊市产品质量检验所，山东潍坊 261031）

随着社会经济的不断发展，人们的物质生活水平持续提高，对高品质生活越来越重视，健康、能量低的食物越来越受到人们的青睐。蔗糖是一种增加甜味的物质，长期摄入容易引起龋齿、肥胖症、高血压、高血脂、高血糖等病症，为在不影响人们的健康前提下解决口感问题，研发出了甜味剂，纽甜和三氯蔗糖应运而生。纽甜，白色结晶粉末状，是一种非营养类增甜剂，甜度约为蔗糖的8 000 ～10 000 倍，因稳定性良好而被广泛应用于食品中[1-2]。基于此性质，酱腌菜等食品中经常检出纽甜，但纽甜进入人体后会迅速代谢，在机体内存留时间短，其代谢产物主要是脱脂化纽甜，这种物质会随着尿液或粪便等代谢物排出体内，不会对人体造成伤害，与糖精钠、甜菊糖苷、甜蜜素等增甜剂相比，有较为明显的优势。三氯蔗糖颜色与状态和纽甜相似，甜度是纽甜的3/40，优点是低热值、无臭、甜味品质及热稳定性好，受光、热、pH 值变化的影响较小，甜味特性接近蔗糖，无后苦味，是一种不会导致龋齿的强力甜味剂[3]。食用后不会引起血糖波动，对糖尿病患者比较友好[4-5]。

纽甜采用《食品安全国家标准 食品中纽甜的测定》（GB 5009.247—2016）中的方法进行检测，三氯蔗糖采用《食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》（GB 22255—2014）中的方法进行检测，两者前处理方法不同，上机检测使用的设备不同，这大大降低了工作效率。使用同一前处理方法、同一设备上机检测可大大提高工作效率。本方法采用HLB 固相萃取柱，使用同一前处理方法，使用三重四极杆液质联用仪同时上机检测，将检测结果与原方法测定结果进行比对，分析结果的准确度。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

烤咸疙瘩（潍坊特产）；三乙胺，分析纯，天津科密欧有限公司；甲酸，色谱纯，天津科密欧有限公司；乙腈，色谱纯，美国Thermo Fisher 有限公司；纽甜标准品，纯度99%，北京坛墨质检有限公司，CAS 号为165450-17-9；三氯蔗糖标准品，纯度99%，北京坛墨质检有限公司，CAS 号为56038-13-2；HLB 固相萃取柱，200 mg/6 mL，纳谱分析技术有限公司。

1.2 仪器与设备

三重四极杆液质联用仪（配四元泵），美国Thermo Fisher 有 限 公 司； 超 纯 水 机，Think-lab Corporation； 电 子 天 平， 万 分 之 一，METTLER TOLEDO（上海）仪器有限公司；离心机，山东百欧医疗科技有限公司；氮吹仪，天津奥特赛恩斯仪器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 标准工作液的配制

纽甜储备液（10 mg·mL-1）：称取1 g 纽甜标准品，加水定容至100 mL。三氯蔗糖储备液（10 mg·mL-1）：称取1 g 三氯蔗糖标准品，加水定容至100 mL。纽甜标准溶液（100 μg·mL-1）：准确吸取1 mL 纽甜储备液，加水定容至100 mL。三氯蔗糖标准溶液（1 000 μg·mL-1）：准确吸取1 mL 三氯蔗糖储备液，加水定容至10 mL。混合标准工作液：分别吸取适量10 mg·mL-1纽甜、三氯蔗糖储备液，用水将其配制成浓度为0.2 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、15.0 μg·mL-1和20.0 μg·mL-1的系列混合标准溶液。

1.3.2 前处理

分别吸取0.40 mL 甲酸和1.25 mL 三乙胺，加水定容至500 mL，pH 值约为4.5，得提取液。

准确称取10 g（精确到0.000 1 g）烤咸疙瘩，将其置于50 mL 具塞塑料离心管中，分别加入100 μg·mL-1标准溶液20 μL（纽甜定量限）、1 000 μg·mL-1标准溶液25 μL（三氯蔗糖检出限），振荡混匀，加入30 mL提取液，超声15 min，定容至50 mL。5 000 r·min-1离心10 min，取上清液10 mL，过HLB 固相萃取柱，以5 mL 甲醇洗脱，将洗脱液置于氮吹仪（40 ℃水浴氮吹）中浓缩，以初始流动相定容至2 mL，过滤膜（0.22 μm），待上机分析。同时做空白试验。1.3.3 色谱条件的选择

色谱柱：NanoChromCore C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱温：30 ℃；流速：0.25 mL·min-1；进样量：5 μL；流动相：A 为0.01%甲酸溶液，B 为乙腈，具体洗脱梯度见表1。

表1 流动相洗脱梯度

1.3.4 质谱条件的选择

扫描方式：多级反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）；离子源：ESI，负离子模式；喷雾电压：3 000 ℃；离子传输管温度：325 ℃；蒸汽温度：350 ℃；鞘气：35 arb；辅助气：10 arb。具体化合物离子信息见表2。

表2 化合物母离子、子离子及碰撞能量

2 结果与分析

2.1 检测设备的选择

三氯蔗糖在国家标准方法中无紫外光区特征吸收峰，故采用示差检测器测定，但示差检测器选择性差，容易出现假阳性。纽甜在国家标准方法中使用紫外检测器或二极管阵列检测器，定性相对不准确。本文采用三重四极杆液质联用仪检测，以提高检测结果的准确性，避免假阳性。如图1 所示，纽甜和三氯蔗糖峰位处平稳清晰，峰型对称且目标峰处没有杂峰干扰，特异性和专一性良好。

图1 空白样品中添加20.0 μg·mL-1 纽甜和三氯蔗糖的色谱图

2.2 流动相的选择

纽甜在国家标准方法中使用离子对试剂缓冲液作为流动相，试剂配制较复杂。本方法采用0.01%甲酸溶液和乙腈作为流动相，简化了试剂的配制过程，提高工作效率，如图1 所示，纽甜和三氯蔗糖峰位处无杂峰出现。

2.3 定量限和检出限的确定

按照食品安全国家标准中的计算公式，纽甜定量限为0.2 mg·kg-1，三氯蔗糖检出限为2.5 mg·kg-1。在空白样品中按照纽甜定量限、三氯蔗糖检出限浓度加标，按1.3.2 前处理、按1.3.3 色谱条件、1.3.4质谱条件上机检测。结果表明，纽甜和三氯蔗糖信噪比均大于10，符合要求。

2.4 精密度试验

取3 个不同浓度的混合标准工作溶液，分别连续测定6 次，测试方法精密度，保留时间和峰面积的重复性结果见表3。结果显示，纽甜不同浓度标准工作溶液保留时间和峰面积的相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）分别为0.168%～0.173%、0.158%～0.165%，三氯蔗糖不同浓度标准工作溶液保留时间和峰面积的RSD 分别为0.879%～0.915%、0.875%～0.901%，均小于5%，精密度良好。

表3 不同浓度混合标准工作溶液精密度试验结果 单位：%

2.5 回收率测定

取烤咸疙瘩空白样品按1.3.2 进行前处理，按1.3.3 色谱条件、1.3.4 质谱条件上机检测，该样品纽甜和三氯蔗糖检测结果均为未检出。纽甜和三氯蔗糖分别在3 个水平下做加标回收试验，结果见表4，纽甜回收率为94.05%～111.33%，三氯蔗糖回收率为90.13%～111.99%。纽甜、三氯蔗糖回收率均在80%～120%，符合要求。

表4 回收率结果 单位：%

3 结论

以0.01%甲酸溶液和乙腈作为流动相，建立三重四极杆液质联用仪同时检测纽甜和三氯蔗糖的方法。结果表明，峰位处平稳清晰，无杂峰出现；纽甜定量限为0.2 mg·kg-1、三氯蔗糖检出限为2.5 mg·kg-1，信噪比均大于10；纽甜、三氯蔗糖3 个不同浓度标准溶液的保留时间和峰面积RSD 均小于5%，精密度良好；对空白样品做纽甜、三氯蔗糖3个水平加标回收试验，回收率均在80%～120%，符合要求。综上所述，该方法简便、快捷，灵敏度高、精密度好、回收率符合要求。专用化学品,2005(15):15-17.

[2] 周家华,崔英德,曾颢.食品添加剂[M].北京:化学工业出版社,2008.

[3] 姜维强.三氯蔗糖在食品中的运用[J].化工设计通讯,2017,43(3):151.

[4] 陈晓霞,游景水,杨祖伟,等．高效液相色谱法测定保健食品中三氯蔗糖的含量[J].食品安全质量检测学报,2015,6(5):1883-1888.

[5] 张莉.高效液相色谱法测定饮料中三氯蔗糖的含量[J].中国卫生检验杂志,2007(10):1784-1786.