结核性浆膜炎患者应用T 细胞斑点试验、腺苷脱氨酶检测的诊断价值

闫 坤，任立军，刘 薇，杨媛媛，张 欣

（1.包钢集团第三职工医院感染疾病科；2.包钢集团第三职工医院急诊科，内蒙古 包头 014010）

结核性浆膜炎起病隐匿，多与肝硬化、肺炎等因素所致的浆膜腔积液混淆，痰结合分歧杆菌培养为诊断结核性浆膜炎的金标准，但该诊断方式的培养周期相对较长[1]。腺苷脱氨酶（ADA）是参与嘌呤核苷代谢的一种酶，在淋巴细胞内含量最多，其活性增强则表示机体局部细胞出现免疫活化，发生结核性浆膜炎时因细胞受刺激浆膜腔积液中淋巴细胞明显增多，但在其他导致免疫功能障碍的疾病中也可出现升高现象[2]。结核感染T 细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是将酶联免疫斑点技术作为检测原理，主要检测结核杆菌特异性抗原早期分泌抗原靶6 和培养滤过蛋白刺激T 淋巴细胞产生的γ-干扰素，有着简便快捷、检测效率高等优势[3]。基于此，本研究将针对结核性浆膜炎患者应用T-SPOT.TB 检测、ADA 检测的诊断价值进行探讨与分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2020 年10 月至2022 年10 月包钢集团第三职工医院所收治的160 例浆膜腔积液患者，进行前瞻性研究，根据痰结核分歧杆菌培养检查结果分为非结核性浆膜炎组（87 例）和结核性浆膜炎组（73 例）。非结核性浆膜炎组患者年龄26~70 岁，平均（41.35±3.20）岁；男性48 例，女性39 例。结核性浆膜炎组患者年龄25~70 岁，平均（41.37±3.22）岁；男性49 例，女性24 例。对比两组患者一般资料，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。纳入标准：符合《浆膜积液细胞图谱新解及病例分析》[4]中浆膜腔积液的诊断标准；影像学检查结果显示浆膜腔有明显积液者；结核性浆膜炎组患者同时经实验室诊断为胸腔积液结核杆菌培养阳性，有发热、盗汗、胸痛等相应临床表现；非结核浆膜炎组患者已确诊为其他疾病，随访1~3 个月无结核病表现等。排除标准：近3 个月有胸部手术、创伤史者；病因诊断不明确者；接受过抗结核治疗者等。本研究已经院内医学伦理委员会批准，且患者均自愿签署知情同意书。

1.2 检测方法

1.2.1 痰结核分歧杆菌培养 采集两组患者痰液样本约4 mL，放入适合结核杆菌生长的培养基中进行培养，将培养基呈倾斜状态放置，形成斜面，若无菌落生长则为阴性，菌落生长于斜面则为阳性。

1.2.2 T-SPOT.TB 检测 ①外周血T-SPOT.TB 检测：采集患者空腹外周血大约3 mL，并将其置于抗凝管中，在6 h 内送检，利用RPMI 1640 培养液、Ficoll 淋巴细胞分离液，以密度梯度离心法提取血液中的单个核细胞，分离完成后通过AIM-V 培养液将单个核细胞浓度调整至2.5×105个/mL。在T-SPOT.TB 试剂盒微孔板上各孔分别注入50 μL AIM-V 培养液（阴性对照）、50 μL 植物血凝素（阳性对照）、50 μL 结核分歧杆菌特异抗原ESAT-6（A孔）、50 μL 抗原CEP-10（B 孔），然后各微孔分别统一注入100 μL 标准溶液（浓度为2.5×105个/mL 的单个核细胞工作液），然后将微孔板放置于37 ℃、5% CO2培养箱，16~20 h 后取出，采用磷酸盐缓冲溶液洗板，重复4 次后，各微孔中加入由碱性磷酸酶标记的二抗（γ-干扰素抗体），于2~8 ℃的条件下孵育60 min，再次进行4 次洗板，注入底物显色溶液并以正常室温避光孵育7 min，采用去离子水重复冲洗直至反应终止，于室温下干燥2~3 h 后，利用酶联免疫斑点分析仪[ 复星诊断科技（长沙）有限公司，型号：ES-15]计数斑点形成细胞数（SFC），一个斑点代表1 个效应T 细胞。②浆膜腔T-SPOT.TB 检测：抽取两组患者约50 mL 浆膜腔积液放置于肝素抗凝管中，其余操作同外周血T-SPOT.TB 检测。③阳性判断标准：使用斑点计数法判断，阴性对照斑点数为0~5 个，若测试孔A 或B 斑点数减去阴性对照孔斑点数≥ 6 个，或阴性对照斑点数≥ 6 个，测试孔A 或B 斑点数≥ 2 倍阴性对照孔斑点数则为阳性[5]。

表1 两组患者外周血、浆膜腔积液SFC及浆膜腔积液ADA 水平比较(±s)

表1 两组患者外周血、浆膜腔积液SFC及浆膜腔积液ADA 水平比较(±s)

注：与外周血T-SPOT.TB 检测比，*P＜0.05。SFC：斑点形成细胞数；T-SPOT.TB：结核感染T 细胞斑点试验；ADA：腺苷脱氨酶。

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1.2.3 ADA 检测 抽取两组患者约5 mL 浆膜腔积液，离心（5 000 r/min，10 min）后，取上清液，通过生化分析仪（浙江普施康生物科技有限公司，型号：MS200）检测ADA，若ADA＞30 U/L 则为阳性[6]。

1.3 观察指标①统计两组患者外周血、浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测的SFC，以及浆膜腔积液ADA 水平。②比较3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的检测结果比较。③比较3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的诊断效能。

1.4 统计学方法采用SPSS 20.0 统计学软件分析本研究所有数据，计量资料均使用S-W 法检验证实服从正态分布，以(±s)表示，采用t检验；计数资料以[ 例(%)]表示，两组间比较采用χ2检验，3 组间比较采用χ2趋势检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者外周血、浆膜腔积液SFC 及浆膜腔积液ADA 水平比较结核性浆膜炎组外周血、浆膜腔积液SFC 及浆膜腔积液ADA 水平均显著高于非结核性浆膜炎组；且浆膜炎积液SFC 较外周血更高，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

2.2 3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的检测结果比较外周血T-SPOT.TB、浆膜腔积液T-SPOT.TB、浆膜腔积液ADA 检测诊断结核性浆膜炎的阳性率分别为56.25%（90/160）、60.62%（97/160）、53.75%（86/160），3 种检测方法的阳性率及两者间两两比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2 3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的检测结果比较(例)

2.3 3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的诊断效能比较浆膜腔积液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的灵敏度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于ADA 检测，且浆膜腔积液T-SPOT.TB 诊断显著高于外周血T-SPOT.TB，浆膜腔积液T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的特异度显著高于ADA 检测，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的诊断效能比较

3 讨论

结核性浆膜炎属于一类较为常见的肺外结核类型，目前临床上多采用痰培养检查诊断该疾病，虽然灵敏度高，但送检不及时、留取方式错误等均会影响痰标本检测的阳性率，导致阳性率较低，且检测周期较长，可能贻误治疗[7]。

SPOT.TB 可记录机体中每个活化的结核特异效应T 细胞，并通过对结核特异效应T 细胞的检测判断患者体内是否出现结核杆菌感染，且敏感度相对较高[8]。ADA 是一类可参与嘌呤核苷代谢的酶类物质，其可催化腺嘌呤核苷降解为次黄嘌呤核苷，而后经核苷磷酸化酶催化成次黄嘌呤。ADA 主要存在于淋巴细胞中，其水平与淋巴细胞的激活和分化有关，当患者发生结核性浆膜炎时，由于机体受到结核分歧杆菌的刺激，淋巴细胞可有不同程度的分化、激活，浆膜腔积液中淋巴细胞明显增多，导致ADA 含量也显著增多，从而可诊断为结核感染[9]。

虽然T-SPOT.TB 检测可通过结合效应T 细胞来诊断患者是否出现结核感染，但当患者外周血中淋巴细胞减少时，仍有不确定结果或假阴性等情况出现，其诊断效能可随之降低。浆膜炎积液T-SPOT.TB 检测是从患者局部病灶直接获取结核特异效应T 淋巴细胞，由于结核性浆膜炎患者结核杆菌可诱导机体淋巴细胞聚集于局部的炎症反应，各类积液中淋巴细胞数量增多，远远多于外周血，因此浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测价值更高，可避免由于患者处于潜伏期或病情好转时期而出现漏诊、误诊[10]。由于浆膜腔积液患者本身已处于疾病状态，其体内可能存在多种致病菌，且T-SPOT.TB 检测虽对结核分歧杆菌存在较高的敏感性，但仍可检出患者体内的非结核分歧杆菌，存在一定的阳性误差。ADA 基本在淋巴细胞和淋巴组织中表达，但当患有淋巴瘤、感染性疾病等疾病时，浆膜腔积液中ADA 水平也会升高，因此诊断结核性浆膜炎的效能较差。本研究中，结核性胸膜炎浆膜炎组外周血、浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测出的SFC 及ADA 均显著高于非结核性胸膜炎浆膜炎组，浆膜炎积液T-SPOT.TB 检测出的SFC 均较外周血T-SPOT.TB 检测更高，同时浆膜腔积液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的诊断效能均显著高于ADA 检测，且浆膜腔积液T-SPOT.TB 诊断显著高于外周血T-SPOT.TB，浆膜腔积液T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的特异度显著高于ADA 检测，表示外周血、浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测及浆膜腔积液ADA 水平可诊断结核性浆膜炎，且浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测的诊断价值较高。

综上，外周血、浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测及浆膜腔积液ADA 水平可诊断结核性浆膜炎，但T-SPOT.TB 检测的诊断价值高于浆膜腔积液ADA 检测，且浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测的诊断价值最高，可对结核性浆膜炎患者的病情诊断及预后评估起到一定的参考价值。