RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

徐莉 陈运旺 廖赵妹 林强 陈乙云

海南医学院第二附属医院儿科一区（海口 570311）

肾母细胞瘤在临床上是较常见的儿童实体性肿瘤病症之一，患病率在小儿全部肿瘤疾病中占9%，且有较高的病死率，严重影响患儿的生命安全［1-3］。临床主要选用化疗或放疗等方案治疗小儿肾母细胞瘤。因肾母细胞瘤的生物机制较多变，且目前肾母细胞瘤病理机制尚未清晰，因此找寻具有特异性的肿瘤标志物极为重要［4］。学者在胃癌、肺癌、神经母细胞瘤、乳腺癌等多类的实体肿瘤内监测出RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 呈现异常表达，而TOPOⅡα、CXCR4 以及RGS4 蛋白在小儿肾母细胞瘤产生、进展中的意义报道较少［5-6］。基于此，本研究分析了经测定RGS4 蛋白、CXCR4 及TOPOⅡα 在小儿肾母细胞瘤组织中的表达，探究在小儿肾母细胞瘤中上述指标的病理特征及与预后生存的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年1 月至2020 年1 月于海南医学院第二附属医院进行手术治疗的肾母细胞瘤40 例患儿为研究对象，并在术后留取距离癌组织边缘＞4 cm 的癌旁组织40 例作对照。临床资料具有可比性（P＞0.05），且此次研究均在患儿家属同意下完成。研究经我院伦理委员会批准［批准号：（2016）伦审第（42）号］。

预后效果判断标准：（1）预后良好，肾母细胞瘤＜5 cm，5 年生存率≥84%；（2）预后不良，肾母细胞瘤≥5 cm，且伴有其他先天性发育不良。

纳入标准：所有小儿肾母细胞瘤均符合《儿童肾母细胞瘤诊疗专家共识》［7］中的相关诊断要求；均经影像学、病理特征、实验室指标等明确病症；术前未接受放疗、化疗等诊治的患儿。

排除标准：存在心肺功能异常、慢性感染性病症、恶性肿瘤等病症的患儿；伴有精神类病症和心理病症的患儿。

1.2 免疫组织化学法检测RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 表达 采用免疫组化法对RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 进行检测，步骤如下：脱蜡，脱蜡前在室温中将组织放约2 h，或60 ℃恒温下烘烤10 ～15 min，后用二甲苯浸泡、冲洗。用5% 甲醇培养15 min，加缓冲液内直到煮沸，自然冷却至室温。抗原修复，加封闭血清液，室温放30 min，清除多余血清，加二氨基联苯胺（DAB）试剂，37 ℃培养箱中孵育40 min。加显色剂，光镜下显色，光镜下观察免疫组化染色情况。

按染色状况及细胞高表达的百分比分析CXCR4、RGS4 蛋白、TOPOⅡα 表达水平：（1）无色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；（2）未出现高表达细胞为0 分，细胞高表达比例＜10%为1 分，比例处于10% ～15%为2 分，比例＞50%为3分。总评分：上述两项得分相乘，≤3 分为低表达，≥4 分为高表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0 统计软件进行分析处理。应用Kolmogorov-Smirnov 检验数据是否符合正态分布，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差描述，组间比较采用独立样本t检验。Kaplan-Meier 法绘制肾母细胞瘤患儿生存曲线，生存比较采用Log-rank 检验，应用多元线性逐步回归分析影响小儿肾母细胞瘤预后的危险因素，检验水准α= 0.05，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 在肾母细胞瘤组织、癌旁组织的表达 如表1、图1 所示，相较于癌旁组织，肾母细胞瘤组织中TOPOⅡα、CXCR4的高表达率升高，RGS4 蛋白高表达率下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 在肾母细胞瘤组织、癌旁组织的表达Tab.1 Expression of RGS4 protein，CXCR4，and TOPOⅡα in nephroblastoma tissue and paracancerous tissue 例（%）

2.2 RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 表达与肾母细胞瘤患儿临床病理特征的关系分析 如表2 所示，RGS4 蛋白与淋巴结转移、病理种类、复发转移、TNM 分期呈负相关；CXCR4、TOPOⅡα 与病理种类、淋巴结转移、TNM 分期、复发转移呈正相关（P＜0.05）。

表2 RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 表达与肾母细胞瘤患儿临床病理特征的关系分析Tab.2 Relationship between expression of RGS4 protein，CXCR4，TOPOⅡα and clinicopathologic features in pediatric wilms tumor例（%）

2.3 肾母细胞瘤患儿3年生存率 随访3年，有2例失访，38 例肾母细胞瘤患儿3 年的总生存率为68.42%（26/38）。RGS4 蛋白高表达者总生存率较高，CXCR4、TOPOⅡα 高表达的患儿总生存率较低（图2）。

图2 小儿肾母细胞瘤的生存曲线Fig.2 Survival curve of pediatric wilms' tumor

3 讨论

肾母细胞瘤属于小儿肾癌内较常见的一类疾病，据研究表明，在小儿恶性肾肿瘤中肾母细胞瘤的患病率约占6%［8-9］。恶性肿瘤疾病的产生、浸润转移及发展是由各种转录因子、趋化因子及介导信号等途径实现，因而找寻诊断肾母细胞瘤的产生、发展有关的肿瘤标志物为目前的研究热点［10-11］。

RGS 属于GTP 酶激活蛋白的一种，能促进GTP 的水解，且RGS 可对转导G 蛋白信号进行负性调控，以对G 蛋白信号的介导水平调节及平衡不同的G 蛋白信号传导通路之间的关系，可在介导信号通路的偶联能力调节过程中参与［12-13］。本研究发现，癌旁组织中RGS4 蛋白的高表达率明显高于肾母细胞瘤组织，且RGS4 蛋白高表达率可与临床病理特征相关，与其他学者研究较相似［14-15］。RGS4 蛋白与多种类型的肿瘤疾病的发生、发展有紧密联系，且RGS4 可经失活的G 蛋白抑制G 蛋白的受体偶联传导信号通路，进而抑制肿瘤细胞的侵袭与转移，故而推测RGS4 蛋白在肾母细胞瘤内属于抑癌因子［16］。表明RGS4 蛋白表达可能在肾母细胞瘤的产生、转移及发展期间发挥重要意义。

CXCR4 属于CXCL12 中主要的受体之一，CXCL12 还能与CXCR4 的N 端结合，在肿瘤对免疫反应介导、侵润侵袭转移、肿瘤血管新生提高等病理过程中发挥重要的作用。有国外研究［17］发现，在肾癌、乳癌及前列腺癌等疾病产生中CXCR4 异常表达发挥了关键作用。TOPOⅡα 可有效传导DNA的断裂且生成新的DNA-蛋白酶的复合物，在DNA的转录、复制及翻译中均与参与。肿瘤细胞增殖的调控中，其编码的TOPOⅡα 属于ATP 依赖的对于细胞发挥重要作用的合成酶及水解酶。作用于染色体浓缩维持、分离染色体等主要的生理过程，且在增殖活性异常提升的肿瘤细胞内TOPOⅡα 水平明显上升［18］。本研究显示，CXCR4 高表达是影响肾母细胞瘤患儿预后生存的主要风险因素。相较于癌旁组织中CXCR4 表达，在肾母细胞瘤组织中CXCR4、TOPOⅡα 表达较高，还与淋巴结转移、TNM 分期、临床病理特征等相关，与其他学者研究结果较为一致［19-20］。表明CXCR4 在患儿生存预后评估中有着重要的作用。

综上所述，通过检测肾母细胞瘤组织中的RGS4 蛋白、CXCR4、TOPOⅡα 表达变化，可发现RGS4 蛋白、TOPOⅡα、CXCR4 与TNM 分期、复发转移、病理类型、淋巴结转移及预后疗效有紧密的关联。

【Author contributions】XU Li performed the experiments and wrote the article.CHEN Yunwang，LIAO Zhaomei，LIN Qiang and CHEN Yiyun performed the experiments.All authors read and approved the final manuscript as submitted.