新疆昌吉市某规模化牧场牛病毒性腹泻病、牛传染性鼻气管炎的调查及分析

2023-09-01 13:46:36胡朝辉王晨豫勾耀鹏齐亚银
今日畜牧兽医 2023年7期
关键词:牛群牧场犊牛

张 欢,胡朝辉,王晨豫,勾耀鹏,王 亮,齐亚银★

(1.石河子大学动物科技学院 832003;2.新疆泰昆集团有限责任公司 831100;3.新疆天润乳业股份有限公司 830000)

牛呼吸道疾病(Bovine respiratory disease,BRD)是由多种病毒或细菌引起的牛肺炎、运输热、支气管炎等为主要症状的疾病。常发生于新引进牛群及秋冬季节的牛群,疾病的严重程度与牛自身免疫力、应激强度、饲养管理等有关,临床表现为高热、食欲下降、精神沉郁、呼吸困难、咳嗽、流涎等[1]。很少有呼吸道问题是由单一病原引起的,引起BRD 的原因有很多种,病毒、细菌和应激因子三方面融合在一起往往会导致牛只发病[2]。牛病毒性腹泻病(Bovine Viral Diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染牛引起的以发热、腹泻、消化道黏膜糜烂、产奶量下降、流产和死胎等为主要临床症状的一类急性、接触性传染病[3]。牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)引起的以鼻炎、支气管炎等上呼吸道疾病以及母牛流产、胎儿畸形、生殖道感染为主要临床特征的一种热性、接触性传染病[4]。而BVD 和IBR 是BRD 的主要病原。这些病毒会引起牛持续的免疫力抑制,破坏牛呼吸道黏膜的防御系统,影响呼吸道的第一道防线抵御病原菌的功能。感染病毒之后会破坏呼吸道表层绒毛系统,使得巴氏杆菌、曼氏杆菌包括支原体内的常在菌有机会顺利地通过呼吸道进入到肺脏、支气管引发肺炎,进而导致肺组织损伤,俗称 “烂肺病”。有数据显示,当牛送入屠宰场屠宰时,会发现烂肺和肺脏损伤的牛比牧场所记录的发病肺炎的牛多了一倍,也就意味着在育肥过程中,有一半的BRD 发病牛并没有发现,呈隐性发病或者兽医并未及时发现[5,6]。

本实验对某个规模化牧场牛群进行BVD 和IBR 的感染情况进行调查,本实验采集血液样本共计194 份,患有呼吸道症状犊牛鼻拭子10 份,通过血清学检测的方法结合实验室PCR 的方法进行调查。根据试验结果给该牧场提供BVD、IBR 科学的防控依据。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2022 年5 月对新疆昌吉地区某规模化牧场牛群采集血液样本共计194 份,使用5 mL 采血器进行采集并进行标号,将采集好的采血器装入试管架略微倾斜置于37℃环境中静置析出血清。将血清分装在1.5 mL 的EP 管中编号-20℃保存备用。采集临床症状表现为流黏脓性鼻液、咳嗽的犊牛鼻拭子10 份。放于长离心管中,置于液氮中保存。

1.2 主要试剂

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA 试剂盒购自宝日医生物技术(北京)有限公司,BVD、IBR 抗体检测测试卡购自北京标驰泽惠生物科技股份有限公司;PrimeScript ™ RT Master Mix购自TaKaRa 公司。

2 方法

2.1 血清学调查

将分装好的样品按照标驰泽惠BVD、IBR 血清抗体测试卡说明书进行步骤进行。取70 μL 加入测试卡中,等待20 min 后,将测试卡插入读卡机中读取数值。

2.2 分子生物学调查

2.2.1 病毒DNA/RNA 提取

将鼻拭子样品从超低温冰箱-80℃取出,置4℃冰箱中融化。按照TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA 试剂盒说明书提取。

2.2.2 引物设计

参考参照文献[7,8]设计引物。见表1,表2。

表1 BVDV 5'-UTR 基因引物序列

表2 IBRVgD 基因的引物序列

按照参考文献中反应体系进行,反应结束后使用反应产物进行琼脂糖凝胶实验。

3 结果与分析

3.1 血清学检测结果

结果见表3。

表3 BVDV 感染的ELISA 检测结果

3.2 分子生物学检测结果

结果10 份患有呼吸道症状鼻拭子提取样中BVD 抗原阳性率0%,IBR 抗原阳性率30%。见图1。

图1 BVD、IBR 核酸检测结果

4 讨论

BVD、IBR 对牧场威胁非常大且该病研究至今并无特效药品。仅能使用疫苗来进行免疫防控[9,10]。但现在很多牧场存有侥幸心理,仅考虑本牧场从未暴发过该病,并不考虑整体大环境,新疆各个地区均有BVD、IBR 发病。自1980 年从新西兰通过引进肉牛传入我国,该病在我国各个地区广泛流行。未免疫牧场依旧存在很大的感染压力。有野毒感染的风险。董坤对吉林部分地区牧场牛群796 份粪便样品进行抗原检测,其检出率为3.45%~42.65%[11]。杞艳萍对西北四省包括陕西、宁夏、新疆和西藏17 个牛场采集1234 份牛群血清样本进行抗原检测,BVDV 阳性率为7.2%(89/1234)[12]。李天增于2019 年~2020年对国内7 个奶牛重点养殖区域的98 家规模牛场2 831 份血清样本进行BVD 抗体调查,出现BVDV 抗体阳性牛场的比例为99.47%[13]。2011 年~2013 年罗玉江在新疆四个不同地区规模化奶牛场检测IBRV 血清抗体阳性率为87.4%[9]。2017 年宋健发现新疆部分地区规模化养殖场IBRV 抗原阳性率为70%[8]。2018 年王标发现新疆某规模化牧场犊牛IBR 的诊断发病率为38.36%[10]。李欣宇等发现新疆两家牛场引进的安格斯牛IBRV抗体阳性率为100.00%[14]。研究结果表明全国各地BVD、IBR广泛流行于全国各地牧场。世界各国流行情况也是如此,目前IBR 只在丹麦和瑞典及其他少数国家彻底净化[15]。从特定区域彻底根除BVDV 和IBR 对牧场和监管机构有利,但边境控制和持续监测对防止病毒重新进入对已免疫的牛群至关重要[16]。牧场对BVD、IBR 进行净化是最终目的,现阶段防控策略建议全群检测,淘汰阳性PI 牛是牧场主要措施。检测、监测、淘汰阳性牛,消灭传染源,加强牧场圈舍消毒,引种时加强检测力度。避免外界病毒传入牛群,加强饲养管理,提高牛群免疫力,避免外界野毒感染牛群[17]。

本场牛群为经免场。成母牛均有较高的抗体水平,对BVD和IBR 两种疾病有较高的抵抗能力。小牛未免疫,母牛在妊娠两月前加强免疫,犊牛通过吃初乳来获得母源抗体。而分子生物学检测结果,10 份鼻拭子BVD、IBR 抗原阳性率分别为0 和30%。建议给犊牛加强免疫IBR 疫苗和泰拉霉素。可能在饲养管理中初乳喂养量不足,或者其他原因导致犊牛出现呼吸道症状,有可能是巴氏杆菌、支原体、环境因素等其他原因。本实验给该规模化牧场防控、净化BVD 和IBR 提供了科学的依据。

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