慢性前列腺炎病人EPS中炎症相关生物标志物检测

姜涵中　孙立江

［摘要］目的探讨慢性前列腺炎（CP）病人趋化因子、白细胞（WBC）、卵磷脂小体（SPL）、神经生长因子（NGF）的表达水平及其临床意义。方法根据美国国立卫生研究院的分类标准，收集2020年2月—2021年5月就診的93例Ⅲ型CP病人，其中ⅢA型44例，ⅢB型49例，另外选择50例健康体检者作为对照组。采用CP症状指数评分表（CPSI）评估病人临床症状，采用酶联免疫吸附法检测前列腺液（EPS）中趋化因子单核细胞趋化因子（MCP-1）、巨噬细胞炎症因子α（MIP-1α）和NGF水平，EPS镜检WBC及SPL计数，分析不同分型病人EPS中趋化因子、WBC、SPL和NGF水平差异。结果ⅢA型和ⅢB型病人的WBC计数等级和SPL计数差异有统计学意义（Z=-9.053、-3.056，P<0.05）。ⅢA型和ⅢB型病人WBC、SPL计数与CPSI各项评分无相关性（P>0.05）。与对照组相比，ⅢA型和ⅢB型病人EPS中趋化因子MCP-1、MIP-1α及NGF水平均升高（F=101.397～196.707，P<0.05）；与ⅢA型相比，ⅢB型病人趋化因子MCP-1、MIP-1α水平降低（P<0.05），NGF水平及CPSI总分升高（P<0.05）。CP病人趋化因子MCP-1、MIP-1α与CPSI量表中疼痛和不适评分存在正相关（r=0.405、0.427，P<0.05）。结论Ⅲ型CP病人EPS中趋化因子及NGF均高于对照组。ⅢA型与ⅢB型EPS镜检WBC及SPL计数存在差异，WBC和SPL可以用来对CP进行分型，但与CPSI症状评分无相关性。MCP-1和MIP-1α可用来评估CP病人的分型和严重程度。

［关键词］前列腺炎；趋化因子类；白细胞计数；神经生长因子

［中图分类号］R697.33;R977.9［文献标志码］A［文章编号］2096-5532（2023）03-0397-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2023.59.081［开放科学（资源服务）标识码（OSID）］

［网络出版］https：//kns.cnki.net/kcms2/detail/37.1517.R.20230725.0936.001.html;2023-07-2611：47：54

MEASUREMENT OF INFLAMMATORY BIOMARKERS IN EXPRESSED PROSTATIC SECRETION OF PATIENTS WITH CHRO-NIC PROSTATITISJIANG Hanzhong， SUN Lijiang （Department of Urology， The Affiliated Hospital of Qingdao Univer-sity， Qingdao  266003， China）

［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression levels of chemokines， white blood cell （WBC） count， small particles of lecithin （SPL）， and nerve growth factor （NGF） and their clinical significance in patients with chronic prostatitis （CP）. Me-thodsAccording to the classification criteria established by the National Institutes of Health， 93 patients with type Ⅲ CP who attended the hospital from February 2020 to May 2021 were enrolled， among whom 44 patients had type ⅢA CP and 49 had type ⅢB CP. A total of 50 individuals who underwent physical examination were enrolled as control group. Chronic Prostatitis Symptoms Index （CPSI） was used to evaluate the clinical symptoms of patients， ELISA was used to measure the levels of chemokines [monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1） and macrophage inflammatory protein-1 alpha （MIP-1α）] and NGF in expressed prostatic secretion （EPS）， and EPS microscopy was used to measure WBC and SPL count. The levels of chemokines， WBC， SPL， and NGF were compared between the patients with different types of CP. ResultsThere were significant differences in WBC and SPL count between the patients with type ⅢA CP and those with type ⅢB CP （Z=-9.053，-3.056;P<0.05）. There was no correlation between WBC/SPL count and CPSI scores in the patients with type ⅢA/ⅢB CP （P>0.05）. Compared with the control group， the patients with type ⅢA/ⅢB CP had significant increases in the levels of the chemokines MCP-1 and MIP-1α and NGF in EPS （F=101.397-196.707，P<0.05）. Compared with the patients with type ⅢA CP， the patients with type ⅢB CP had significant reductions in the levels of the chemokines MCP-1 and MIP-1α （P<0.05） and significant increases in the level of NGF and the total score of CPSI （P<0.05）. The correlation analysis showed that in the patients with CP， the chemokines MCP-1 and MIP-1α were positively correlated with the scores of pain and discomfort in CPSI scale （r=0.405，0.427;P<0.05）. ConclusionThe patients with type Ⅲ CP have higher levels of chemokines and NGF in EPS than the control group， and there are significant diffe-rences in WBC and SPL count between the patients with type ⅢA CP and those with type ⅢB CP. WBC and SPL may be used for the classification of CP， but they are not correlated with CPSI symptom score. MCP-1 and MIP-1α can be used to evaluate the classification and severity of CP patients.

［KEY WORDS］prostatitis; hemotactic factors; leukocyte count; nerve growth factor

慢性前列腺炎（CP） 是由各種病因引起的前列腺组织慢性炎症，美国国立卫生研究院（NIH）将其分为Ⅰ～Ⅴ型，其中Ⅲ型占90%～95%，Ⅲ型CP分为ⅢA型和ⅢB型，其病因与发病机制尚未完全阐明[1-2]。神经生长因子（NGF）作为神经营养因子，介导炎症因子和神经痛觉，可导致CP病人疼痛加剧[3]。有研究显示，不同NIH分型的CP病人前列腺液（EPS）中的炎症相关因子、趋化因子和免疫细胞递质存在较大差异，推测机体自身免疫异常可能是引起CP发生和分型的重要因素[4]。本研究纳入不同CP分型病人的免疫、趋化因子和NGF等指标进行对比分析，同时镜检EPS 中白细胞（WBC）及卵磷脂小体（SPL）计数，分析病人CP症状指数评分表（CPSI）症状与WBC和SPL计数的关系，为进一步探究CP不同分型差异提供理论依据。

1资料与方法

1.1研究对象

1.1.1一般资料2020年2月—2021年5月，收集在我院就诊的93例Ⅲ型CP病人，年龄20～63岁，平均（37.4±9.3）岁；病程0.1～3.7年，平均（1.2±0.6）年。另外，选择50例健康体检者作为对照组，年龄19～65岁，平均（36.6±8.7）岁。对照组与CP病人的年龄差异无统计学意义（P>0.05）。所有纳入研究的病人及其家属均已签署知情同意书。

1.1.2纳入标准①慢性非细菌性前列腺炎，符合NIH[5]制定的CP（Ⅲ型）诊断标准的病人；②病人骨盆区域各部位出现慢性或反复发作疼痛感，可伴有排尿异常症状，持续时间>3个月；③EPS细菌培养无菌生长；④EPS中镜检WBC异常升高。

1.1.3排除标准①NIH标准中的Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ型CP病人；②合并睾丸炎等其他类型的泌尿系统炎症感染病人；③前列腺癌、前列腺结石或急性膀胱炎；④合并其他类型自身免疫性疾病；⑤近3个月接受过免疫治疗。

1.2研究方法

1.2.1EPS标本采集收集EPS标本前，嘱咐病人多饮水，用浸湿生理盐水的棉球清洗尿道口，用碘附消毒，由同一位从事相关工作10年以上泌尿科医生对病人经直肠进行前列腺按摩，收集第1滴EPS置玻片上送常规检查，其余EPS置于Eppendorf 管中进行病原学检查。

1.2.2CP分型和分组参考NIH制定的分类标准，根据病原学分类原则，均诊断为Ⅲ型慢性非细菌性前列腺炎、慢性骨盆疼痛综合征。同时，根据有无炎症反应分为ⅢA型（炎症性CP）和ⅢB型（非炎症性CP）。

1.3观察指标

1.3.1WBC和SPL计数 临床检验时取出标本，以湿玻片法在400倍显微镜下观察5个高倍镜视野（HP）下 WBC、SPL 计数，取平均值，根据平均计数进行 分 组。WBC 计 数：计 数 <10/HP 记 为 少 见，10/HP≤ 计 数 ≤20/HP 记 为 +，21/HP≤ 计 数 ≤30/HP记为++，31/HP≤计数≤40/HP 记为+++，计数>40/HP 记为++++。SPL 计数：未见 SPL 或稀疏少见SPL，记为-;SPL分布占视野≤1/4，记为+;占视野>1/4～1/2，记为;占视野>1/2～3/4，记为+++;分布满视野，记为++++[6]。

1.3.2CPSI量表检测由具有相关培训经验10年以上泌尿科医师进行指导，由病人根据自身情况填写CPSI量表。量表主要症状项目包括排尿、疼痛、生活质量及症状严重程度等，每个项目包括9个条目，总分43分，评分越高表明症状越严重[7-8]。

1.3.3趋化因子和NGF检测采用酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），以双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）检测EPS中趋化因子单核细胞趋化因子（MCP-1）、巨噬细胞炎症因子α（MIP-1α）水平和NGF水平[9]。

1.4统计学处理

采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析。计数资料用例数表示，等级资料比较行Mann-Whitney 检验；计量资料用±s表示，2组均数的比较采用两独立样本的t检验，3组均数比较采用单因素方差分析，均数间两两比较采用SNK（Student-Newman-Keuls）法；采用Person相关系数分析WBC计数、SPL计数、趋化因子与病人CPSI量表评分的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1镜检WBC、SPL计数及其与CPSI量表评分的关系

ⅢA型和ⅢB型病人的WBC计数等级和SPL计数差异具有统计学意义（Z=-9.053、-3.056，P<0.05）。见表1。两组病人的疼痛和不适症状、排尿症状、生活质量影响CPSI评分差异无统计学意义（P>0.05），但ⅢB型CPSI总评分高于ⅢA型（t=2.018，P<0.05）。见表2。两组病人WBC、SPL 计数与CPSI各项评分均无相关性（P>0.05）。

2.2两组趋化因子水平比较

ⅢA型病人、ⅢB型病人及对照组的趋化因子MCP-1、MIP-1α差异有统计学意义（F=101.397、196.707，P<0.05），与对照组相比，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中趋化因子MCP-1、MIP-1α水平均升高（P<0.05）；与ⅢA型相比，ⅢB型病人MCP-1、MIP-1α水平降低（P<0.05）。见表3。CP病人趋化因子与CPSI量表中疼痛和不适评分存在正相关（r=0.405、0.427，P<0.05），MIP-1α与生活质量影响评分呈正相关（r=0.266，P<0.05）。

2.3两组NGF水平比较

ⅢA型病人、ⅢB型病人及对照组的NGF差异有统计学意义（F=112.767，P<0.05），与对照组相比，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中的NGF水平均升高（P<0.05）；与ⅢA型相比，ⅢB型病人NGF水平升高（P<0.05）。见表3。

3讨论

CP是由各种病因引起的前列腺组织慢性炎症，可刺激尿道并引发骨盆或会阴区域疼痛，并伴有不同程度的排尿症状和性功能障碍，严重影响病人生活质量[10-18]。虽然目前还未确定CP的特异性标志物，但多项研究发现CP病人的EPS、尿液和血清中存在多种相关生物标志物。马成泉等[12]的研究显示，EPS中的趋化因子、炎性因子和NGF等对CP的实验室诊断具有重要作用，且CP病情与自身免疫机制也存在一定关系[19-21]。

NIH根据EPS中WBC计数，将Ⅲ型CP分为ⅢA及ⅢB两个亚型。本文研究分析了两个亚型的WBC、SPL计数，并将之与CPSI评分进行相关分析，结果显示，两个亚型之间WBC、SPL计数差异较大。但相关性分析结果显示，ⅢA型、ⅢB型病人WBC、SPL计数与CPSI各项评分均无相关性，表明仅依靠WBC、SPL计数无法评判病情严重程度，也不能就此评价哪种亚型的病情更严重[22]。

趋化因子是由细胞分泌的小细胞因子或信号蛋白，在机体免疫防御时可使免疫细胞定向趋化，调节机体炎症状态[13-14]。本研究中，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中趋化因子MCP-1、MIP-1α水平均较对照组升高，且ⅢA型趋化因子水平高于ⅢB型。ⅢA型、ⅢB型病人趋化因子与CPSI量表中疼痛和不适评分存在中等程度正相关。由此来看，EPS中趋化因子水平可以作为CP初步诊断和分型的参考依据，且其水平可以显性表达病人的生理疼痛和不适感，以此可为临床采取相应干预措施提供一定参考。

NGF作为一种神经营养因子，可刺激细胞生长，延缓神经退行性病变，成为免疫调节的重要一环[15-16]。从炎症反应和牵涉痛角度看，神经纤维在外周神经丛交汇，牵涉多种支配内脏和体壁的神经纤维束，分布至盆腔及其以下多个器官。当外来刺激传入神经纤维，体壁结构接受到的神经冲动可能使伤害感受器致敏，进而形成痛觉过敏。而此時，NGF可促进中枢和外周神经元的生长发育，加快神经系统损伤后的修复，缓解痛觉过敏[23]。本研究中，ⅢA型及ⅢB型病人EPS中的NGF水平高于对照组，两种亚型的NGF因子差异也有统计学意义，ⅢB型病人的NGF水平高于ⅢA型病人，且ⅢB型病人CPSI总评分高于ⅢA型，临床症状疼痛程度更高[24-25]。表明炎症水平增高会引起NGF水平增高，但由前列腺局部引发的炎症刺激在ⅢA型和ⅢB型CP中存在不同的NGF调控机制，甚至二者可能存在不同的发病机制，需要循此思路作进一步探究。

综上所述，ⅢA型和ⅢB型CP病人EPS中的WBC、SPL、趋化因子和NGF表达均与其分型有关，可以用这些指标来评估临床分型；趋化因子还与CP病人的CPSI评分相关，可用来评估病人临床症状的严重程度。ⅢB型病人的CPSI总评分和EPS中NGF水平明显高于ⅢA型，二者可能存在不同的发生或作用机制，需要进一步的研究来探索。

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（本文編辑周晓彬）