过敏性紫癜患儿滤泡辅助性T细胞及其亚群水平变化的临床意义

白跳艳

西安医学院第一附属医院检验科,陕西西安 710016

过敏性紫癜为儿童常见疾病,主要临床症状包括下肢及臀部紫癜、关节疼痛或关节炎、腹痛等,且患儿出现肾功能损害的概率达20%,严重影响患儿健康[1]。研究发现,过敏性紫癜常见于10岁以下儿童,尤其是4～6岁年龄段,并且该病复发率高,给患儿家庭及社会带来较大负担[2-3]。目前关于过敏性紫癜的发病机制仍处于探索阶段,众多研究均表明,免疫功能紊乱是引起过敏性紫癜的重要因素[4-5]。随着对机体免疫功能紊乱研究的加深,有研究者认为过敏性紫癜可能与滤泡辅助性T细胞(Tfh)有关[6]。Tfh属于CD4+T细胞亚群,其可表达趋化因子受体5(CXCR5),辅助B细胞诱导抗体应答,在B细胞转化中具有重要调控作用。根据Tfh表面趋化因子表达情况,可将其分为Tfh1(CCR6-CXCR3+Tfh)、Tfh2(CCR6-CXCR3-Tfh)、Tfh17(CCR6+CXCR3-Tfh)3个亚群,后二者能够辅助B细胞分化成浆细胞,继而产生免疫球蛋白[7-8]。以往有研究报道Tfh及亚群参与了儿童过敏性紫癜发病过程,但主要聚焦在作用机制及紫癜性肾炎的发生[9-10],而关于Tfh及其亚群与患儿预后关系的报道却较为少见。本研究通过观察过敏性紫癜患儿Tfh及亚群水平,并分析其与患儿病情及预后的关系,以期为临床改善患儿预后提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2020年8月至2022年1月西安医学院第一附属医院(以下简称本院)收治的114例过敏性紫癜患儿作为观察组,其中男60例,女54例;年龄4～13岁,平均(9.83±1.96)岁。纳入标准:(1)符合过敏性紫癜诊断标准[11];(2)年龄3～14岁;(3)入组前未使用过糖皮质激素或其他免疫抑制剂。排除标准:(1)存在严重感染性疾病;(2)有系统性红斑狼疮、肾病综合征等免疫系统疾病史;(3)合并心、肝、肺等重要脏器功能障碍;(4)有过敏性鼻炎、支气管哮喘等过敏性疾病史。另选择同期于本院行体检的57例健康儿童作为对照组,其中男34例,女23例;年龄5～14岁,平均(9.91±2.03)岁。两组研究对象性别、年龄比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本次研究符合《赫尔辛基宣言》,患儿家属均知情同意。

1.2仪器与试剂 FACSCantoⅡ型流式细胞仪购自BD Biosciences公司,CD3-BV510、CXCR3-PE、CXCR5-PECY7、CCR6-PerCP-Cy5.5均购自BD Biosciences公司,红细胞裂解液购自天根生化科技北京有限公司,CD4-FITC购自北京四正柏公司。

1.3方法

1.3.1Tfh及亚群水平检测 采集受检者清晨空腹静脉血3 mL,肝素钠抗凝,分成3管,第1管加入CD3-BV510、CD4-FITC,第2管加入CD3-BV510、CD4-FITC、CXCR5-PECY7,第3管加入CD3-BV510、CD4-FITC、CXCR3-PE、CXCR5-PECY7、CCR6-PerCP-Cy5.5,振荡混匀后室温下避光孵育30 min,之后向每管加入2 mL红细胞裂解液,振荡混匀,静置10 min后以3 000 r/min离心3 min,除去上清液,加入1 mL磷酸盐缓冲液(PBS),振荡混匀,再次以3 000 r/min离心3min,除去上清液,重复相关操作,向得到的液体中加入200 μL PBS重悬细胞,置于流式细胞仪上检测。

1.3.2紫癜症状评估 根据FESSATOU等[12]制订的过敏性紫癜症状评分法对观察组患儿紫癜症状(皮肤紫癜、关节、消化道、肾脏)进行评估,评分越高表示患儿过敏性紫癜症状越严重。

1.3.3预后评估 观察组患儿出院后均进行随访,随访截止日期为2022年9月30日,记录随访期间患儿过敏性紫癜复发情况,若复发则判为预后不良,若无复发则判为预后良好。

2 结 果

2.1观察组和对照组Tfh及其亚群水平比较 观察组Tfh、Tfh2水平均高于对照组,Tfh1水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但两组Tfh17水平比较,差异无统计意义(P>0.05)。见表1。

表1 观察组和对照组Tfh及其亚群水平比较

2.2不同紫癜症状评分的过敏性紫癜患儿Tfh及其亚群水平比较 观察组患儿紫癜症状评分为(5.27±1.14)分,其中≤4分38例,>4分76例。紫癜症状评分>4分的患儿Tfh、Tfh2水平高于紫癜症状评分≤4分的患儿,Tfh1水平低于紫癜症状评分≤4分的患儿,差异均有统计学意义(P<0.05),但不同紫癜症状评分患儿的Tfh17水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同紫癜症状评分的过敏性紫癜患儿Tfh及其亚群水平比较

2.3过敏性紫癜患儿Tfh及其亚群水平与紫癜症状评分的相关性分析 Pearson相关分析结果显示,过敏性紫癜患儿Tfh、Tfh2水平与紫癜症状评分呈正相关(P<0.05),Tfh1水平与紫癜症状评分呈负相关(P<0.05),Tfh17水平与紫癜症状评分无明显相关性(P>0.05)。见表3。

表3 过敏性紫癜患儿Tfh及其亚群水平与紫癜症状评分的相关性分析

2.4不同预后的过敏性紫癜患儿Tfh及其亚群水平比较 根据随访结果,将观察组患儿分为预后良好组(80例)和预后不良组(34例)。预后不良组Tfh、Tfh2水平均高于预后良好组,Tfh1水平低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05),但两组Tfh17水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 不同预后的过敏性紫癜患儿Tfh及其亚群水平比较

2.5Tfh及其亚群水平对过敏性紫癜患儿预后的诊断价值 ROC曲线分析结果显示,以预后良好为对照,Tfh、Tfh1、Tfh2评估过敏性紫癜患儿预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.894、0.849、0.783,诊断过敏性紫癜儿童预后不良灵敏度分别为88.24%、85.29%、76.47%,特异度分别为71.25%、70.00%、70.83%。见表5。

表5 Tfh及其亚群水平对过敏性紫癜患儿预后的诊断价值

3 讨 论

尽管过敏性紫癜具体发病机制还不明确,但大量研究证实,过敏性紫癜发病时机体细胞免疫处于异常状态,Th1/Th2、Th17/Treg细胞免疫失衡,这与过敏性紫癜的发生具有密切关联[13]。近年来有研究发现,除了Th1、Th2等细胞外,还存在一种具有独立效应的CD4+T淋巴细胞亚群,即Tfh。Tfh受B细胞淋巴瘤6蛋白(Bcl-6)控制,其通常迁移到淋巴滤泡,能够同时表达CXCR5、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)、诱导性共刺激分子(ICOS)等因子,可辅助B细胞产生抗体[10,14]。有研究显示,Tfh为抗体产生的重要辅助者,其功能失调是影响多种疾病(如自身免疫性疾病、肿瘤)发生的重要因素[15]。而在对过敏性紫癜患儿的研究中发现,与无过敏性紫癜儿童比较,过敏性紫癜患儿Tfh细胞及其相关细胞因子呈高表达[16]。本研究显示,观察组Tfh水平明显高于对照组(P<0.05),即过敏性紫癜患儿Tfh处于高水平,过敏性紫癜的发生可能与患儿机体Tfh水平有关,与以往研究相符。分析原因,Tfh能通过ICOS、CD40L等分子和分泌白细胞介素(IL)-10、IL-21促使次级淋巴组织滤泡生发中心初始B细胞发育,还可以促进B细胞抗体类别转换[17],Tfh功能亢进可能会引起自身抗体非正常增殖,介导病态免疫反应,继而参与过敏性紫癜的发生。进一步分析Tfh亚群水平,观察组Tfh1、Tfh2水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),提示过敏性紫癜患儿Tfh1/Tfh2处于失衡状态,其Tfh细胞以Thf1水平下降、Tfh2水平上升为特点亚群紊乱。

本研究结果还显示,不同紫癜症状评分的过敏性紫癜患儿Tfh、Tfh1、Tfh2水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且过敏性紫癜患儿Tfh、Tfh1、Tfh2水平与其紫癜症状评分均存在明显相关性(P<0.05),提示Tfh、Tfh1、Tfh2水平与过敏性紫癜症状密切相关,Tfh、Tfh2水平越高、Tfh1水平越低,患儿紫癜症状越严重。Tfh异常表达越明显,Tfh1和Tfh2失衡越严重,Tfh功能越亢进,自身抗体异常增殖介导的病态免疫反应也会越显著,反映到患儿上表现为紫癜症状愈加明显。目前临床治疗过敏性紫癜主要予以去除致病因素和对症支持治疗,大部分患儿经治疗后可以获得明显改善,预后较好,但仍有许多患儿疗效并不理想,容易反复发作[18]。本研究观察不同预后患儿Tfh及其亚群水平发现,预后不良组Tfh、Tfh1、Tfh2水平与预后良好组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),提示Tfh、Tfh1、Tfh2水平可能与患儿预后存在关联性。ROC曲线分析结果表明,Tfh、Tfh1、Tfh2评估过敏性紫癜患儿预后不良的AUC分别为0.894、0.849、0.783,灵敏度分别为88.24%、85.29%、76.47%,特异度分别为71.25%、70.00%、70.83%,表明检测Tfh、Tfh1、Tfh2水平有利于评估过敏性紫癜患儿预后。

综上所述,过敏性紫癜患儿Tfh、Tfh2水平较高,Tfh1水平较低,Tfh17水平正常,Tfh、Tfh1、Tfh2水平可反映过敏性紫癜患儿病情严重程度,对患儿Tfh、Tfh1、Tfh2水平进行检测,有利于评估过敏性紫癜患儿病情及预后,便于临床医师根据患儿病情调整临床治疗方案,尽可能改善患儿预后。