气相色谱-串联质谱法测定百合（干）中7 种有机磷农药残留

万 静，王健雄

（1.昆明市食品药品检验所 食品检验中心，云南昆明 650032；2.云南水投供水投资有限公司，云南昆明 650051）

百合是一种药食两用的植物，其中淀粉、蛋白质、膳食纤维、维生素C、氨基酸及多种矿质元素的含量丰富，营养价值较高[1]。随着我国对食品安全监管越来越严格，人们对食品安全越来越重视，农副产品中农药残留的检测必不可少。有机磷类农药（Organophosphorus Pesticides，OPPs）因种类多、广谱性、药效好、易降解等优点而被广泛应用，但进入人体会产生神经毒性，严重时可导致呼吸麻痹而死亡，且有机磷农药易降解的特性为检验检测带来了一定难度[2]。因此，本文选用QuEChERS 前处理技术，结合灵敏度高、通量高、抗干扰能力强的气相色谱-串联质谱法（Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）进行检测[3]，为百合（干）中7 种有机磷农药残留快速检测、准确定量提供技术基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

7 种有机磷农药（灭线磷、治螟磷、甲基对硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、甲基异柳磷、蝇毒磷标准品）：100 mg·L-1；乙腈、乙酸乙酯：色谱纯；Bond Elut QuEChERS 提取盐包：4 g 硫酸镁、1 g 柠檬酸钠、0.5 g 柠檬酸氢二钠、1 g 氯化钠；PSA、C18、GCB：分析纯。

1.2 仪器与设备

气相色谱-三重四级杆串联质谱仪7890B-7000D；AL104 电子天平；旋涡混合器（Multi Reax）；大容量冷冻离心机（Allegra X-30R）；超纯水器（Arium®Comfort）；全自动平行浓缩仪（AutoEVA-20Plus）。

1.3 样品处理方法

1.3.1 样品的制备取百合（干）制品，粉碎成粉末，充分混匀过三号筛，放入聚乙烯袋中保存。

1.3.2 提取

样品称取3.00 g 于50 mL 的离心管，并加入10 mL水，涡旋混匀5 min，静置30 min，加入15 mL 乙腈和一颗陶瓷均质子，涡旋提取振荡5 min，再加入Bond Elut QuEChERS 提取盐包，立即振荡混匀，再涡旋振荡5 min，5 000 r·min-1离心5 min。

1.3.3 净化

吸取8 mL 提取液加到15 mL 离心管中（内含885 mg 硫 酸 镁、300 mg PSA、100 mg C18、15 mg GCB），涡旋振荡5 min，5 000 r·min-1离心5 min，取2 mL 净化液于40 ℃水浴中氮吹至近干，加入1 mL 乙酸乙酯溶解，过0.22 μm 滤膜，待测定。

1.4 仪器条件

1.4.1 色谱条件色 谱 柱：DB-5MS UI 石 英 毛 细 管 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；进样口温度：280 ℃；载气流速：1.0 mL·min-1；不分流进样，进样量：1.0 μL；升温程序：40 ℃保持1 min，以40 ℃·min-1升温至120 ℃，再以8 ℃·min-1升温至300 ℃保持5 min。

1.4.2 质谱条件

电子轰击电离（EI）；电离能量70 eV，离子源温度280 ℃，传输线温度280 ℃，四极杆温度150 ℃；溶剂延迟为4 min，多反应监测模式（MRM），目标农药选择一对定量离子、两对定性离子，其具体参数见表1。

表1 7 种农药质谱条件

1.5 标准系列制备

7 种农药基质混合标准溶液配制：定量吸取各标准品于同一容量瓶，用乙酸乙酯稀释成1.0 mg·L-1，再用空白百合（干）基质溶液进行稀释，制成浓度为5 μg·L-1、10 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和300 μg·L-1的基质混合标准溶液。

1.6 基质效应评价

基质效应（ME）普遍存在于质谱分析中，对于GC-MS/MS 而言，绝大部分农药存在基质增强效应，可按照公式（1）计算。当-20%＜ME＜20%时 为 弱 基 质 效 应； 当-50% ＜ME≤-20% 或20%≤ME＜50%为中等基质效应；当ME≤-50%或ME≥50%为强基质效应[4]。

式中：Sm为基质匹配标准曲线斜率；Ss为纯溶剂标准曲线斜率。

2 结果与分析

2.1 提取条件选择

百合（干）含水率较低，在萃取前加入适量水使其完全浸润后，再加入萃取溶剂能更易渗透到细胞组织，从而增加萃取效果。乙腈对农药的溶解性较好，在提取过程中易于提取，且共萃物少，农药回收率高[5-6]。因此，本研究采用乙腈作为提取溶剂。

2.2 净化条件选择

QuEChERS 方法中净化的填料主要是PSA、C18、GCB、MgSO4，可以有效去除样品中的有机酸、糖类、脂类、色素等杂质，但各自使用量并非越多越好，因此本文对PSA、C18、GCB 的使用量进行考察。百合（干）颜色略黄，选用15 mg GCB 除色素，并分成4 组对PSA、C18用量作进一步考察（①885 mg MgSO4+15 mg GCB+150 mg PSA；②885 mg MgSO4+15 mg GCB+150 mg PSA+50 mg C18；③885 mg MgSO4+15 mg GCB+300 mg PSA+100 mg C18；④885 mg MgSO4+15 mg GCB+400 mg PSA+400 mg C18），在加入量为0.05 mg·kg-1百合（干）样品中，按1.3 方法进行提取、净化，结果表明，当只有PSA 净化时，其农药回收率均偏高，而在加入C18净化后，净化效果有所提高，说明PSA、C18联合使用能有效去除百合饮片中的部分脂类物质。组合④中蝇毒磷回收率明显下降，原因是PSA、C18过多对农药产生吸附。组合③回收率最好，因此净化条件选择组合③。

2.3 回收率及精密度

当空白样品添加量为0.025 mg·kg-1、0.050 mg·kg-1、0.100 mg·kg-1时，按照上述方法进行提取净化，7 种农药的回收率为71.79%～111.87%，相对标准偏差（RSD）在0.53%～4.59%，结果见表2。由表2 可知，本方法回收率高，重复性好，同时满足《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[7]中对回收率及精密度的要求。

表2 7 种农药在百合（干）中3 个水平下的添加回收率和相对标准偏差

2.4 线性关系、检出限、基质效应

按1.5 配制基质混合标准溶液，纵坐标为农药定量离子的峰面积，横坐标为基质混合标准溶液的质量浓度，制作标准曲线；对0.005 mg·L-1加标量样品平行测定10 次，计算标准偏差得到方法检出限；绘制纯溶剂和基质标准曲线，并用公式（1）对基质效应进行评价，结果见表3。

表3 7 种农药方法检出限与基质效应

在0.005 ～0.300 mg·L-1，7 种农药线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99，方法检出限为0.80 ～2.43 μg·kg-1；7 种农药均表现为强基质效应。因此，百合（干）中7 种有机磷农药应采用基质标准曲线进行定量。

3 结论

本研究采用QuEChERS 前处理技术，基质匹配标准曲线的气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS），建立了百合（干）中7 种有机磷类农药快速、准确定量的分析方法。样品采用乙腈提取，加到内含885 mg硫酸镁、300 mg PSA、100 mg C18、15 mg GCB 的分散固相萃取管中净化，该方法在0.005 ～0.300 mg·L-1内线性关系良好，相关系数（R2）＞0.99，方法检出限为0.80 ～2.43 μg·kg-1，平均回收率为71.79%～111.87%，相对标准偏差（n=6）小于5%。本方法方便快速，灵敏度高，重复性好，能有效消除基质效应，适合于对百合（干）中多种有机磷农药含量的高效测定。