15%吡丙醚·氟啶虫酰胺悬乳剂高效液相色谱分析

白 亮，马 超，赵宜君，2，张 喆，张立群，徐 军，2*，陈 昶,2*

（1.河北中保绿农作物科技有限公司，北京 100193；2.中国农业科学院植物保护研究所，北京 100193)

吡丙醚（Pyriproxyfen）又名蚊蝇醚，是一种由日本住友化学公司开发的杀虫剂。吡丙醚通过作用于昆虫的繁殖和蜕变过程，达到有效控制害虫的目的。其具有光稳定性好、用药量少、效果佳、对作物安全等特点，符合生态环保的标准[2]。吡丙醚对介壳虫、烟粉虱（Bemisia tabaci）、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）、小菜蛾（Plutella xylostella）、梨黄木虱（Psylla pyricola）、斜纹夜蛾（Spodoptera litura）、蓟马等有较好的防治效果[3-5]。氟啶虫酰胺（Flonicamid）是一种由日本石原产业株式会社发现并开发的新型低毒吡啶酰胺类杀虫剂。其具有内吸和触杀作用，对蚜虫等刺吸式口器害虫有良好的神经毒性和快速拒食活性，且其拒食作用具有不可恢复性，被阻止吸食的害虫最终因饥饿而导致死亡[6]。氟啶虫酰胺对蔬菜蚜虫、苹果黄蚜（Aphis citricola）、柑橘蚜虫等均具有较好的防治效果[7]。

15%吡丙醚·氟啶虫酰胺是一种高效低毒的杀虫剂，但对其悬乳剂的分析方法目前尚未见报道。本文采用高效液相色谱法对丙醚和氟啶虫酰胺进行定量分析，旨在挖掘一种操作简便，分离效果好，检测结果准确性高的分析方法，为吡丙醚·氟啶虫酰胺产品的质量控制提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试剂

甲醇（色谱纯），默克（德国）股份有限公司；乙腈（色谱纯），美国飞世尔科技公司；吡丙醚标准品（纯度98.5%）和氟啶虫酰胺标准品（纯度98.9%），沈阳化工研究院；15%吡丙醚·氟啶虫酰胺悬乳剂（7.5%吡丙醚＋7.5%氟啶虫酰胺），河北中保绿农作物科技有限公司；水（新蒸二次蒸馏水），实验室自制。

1.2 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪、2489UV-Vis紫外检测器，沃特世科技（上海）有限公司；C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），北京海诚中仪科技有限公司；UV-6100紫外-可见光分光光度计，上海元析仪器有限公司；真空抽滤器（内置孔径为0.45 μm的水系滤膜），天津科亿龙试验设备有限公司；0.45 μm有机滤膜，上海密粒膜分离技术有限公司；AL104万分之一电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

1.3 液相色谱分析条件

流动相：甲醇-乙腈-水（20∶55∶25，V/V/V），经滤膜过滤，超声脱气后待测；柱温：室温；流速：0.8 mL/min，检测波长：254 nm，进样量体积：2 μL。

1.4 溶液配制

准确称取吡丙醚标准品、氟啶虫酰胺标准品各0.05 g（精确至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声振荡20 min后，取出冷却至室温，定容，备用。

准确称取含吡丙醚和氟啶虫酰胺0.65 g（精确至0.000 2 g）的样品，置于100 mL的容量瓶中，加入甲醇溶解，超声振荡20 min后，取出冷却至室温，定容，备用。

1.5 有效成分质量分数测定

在1.3节中检测样品有效成分的分析条件下平衡检测器和色谱柱，使仪器达到最佳使用状态（基线波动范围应小于1×10-3），取1.4节中配制好的标准溶液和样品溶液进行测定。

1.6 计算

样品中的有效成分吡丙醚和氟啶虫酰胺的质量分数（w）按式（1）进行计算。

式中：A1为标样溶液中吡丙醚（氟啶虫酰胺）峰面积的平均值，mAU·min；A2为试样溶液中吡丙醚（氟啶虫酰胺）峰面积的平均值，mAU·min；m1、m2分别为吡丙醚（氟啶虫酰胺）标样、试样的质量，g；P为标样中吡丙醚（氟啶虫酰胺）的质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

利用紫外-可见光分光光度计分别对吡丙醚和氟啶虫酰胺的标准溶液进行全波长扫描，得到在190～300 nm波长范围内的紫外光谱图（图1）。在254 nm波长条件下，吡丙醚和氟啶虫酰胺均有较强的吸收峰，且吸收比例合适，各种杂质均不影响吡丙醚和氟啶虫酰胺的测定。因此，本方法选择254 nm作为检测波长。

图1 吡丙醚和氟啶虫酰胺紫外吸收光谱图

2.2 流动相的选择

以甲醇、乙腈和水为流动相，调节三者的比例对试样进行分离测试。当甲醇、乙腈和水的体积比为20∶55∶25时，有效成分吡丙醚和氟啶虫酰胺与杂质可以较好地分离开来，且基线平稳，峰型之间互无干扰（图2、图3）。

图2 吡丙醚和氟啶虫酰胺标样液相色谱图

图3 吡丙醚和氟啶虫酰胺试样液相色谱图

2.3 分析方法的线性关系

配制不同浓度的标样溶液，在1.3节色谱条件下分别进行分析，以吡丙醚和氟啶虫酰胺的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算2种有效成分的线性回归方程。吡丙醚的质量浓度在0.5～5.0 mg/mL之间，与其相应的峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y=300 083.043 8x＋14 136.106 8，R2=0.999 8；氟啶虫酰胺的质量浓度在0.5～5.0 mg/mL之间，与其相应的峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y=38 283.600 0x-4 732.600 0，R2=0.999 2。

2.4 分析方法的精密度

在1.3所述色谱检测条件下，对15%吡丙醚·氟啶虫酰胺悬乳剂试样进行5次独立测试，分析方法的精密度由表1结果可知，样品中吡丙醚的相对标准偏差为0.003%，氟啶虫酰胺的相对标准偏差为0.004%，分别小于Horwitz公式[8]［2(1-0.5logC)×0.67，其中C为样品中有效成分含量的平均值］的计算值0.989 5。以上结果均符合分析要求，说明该分析方法的精密度良好。

表1 分析方法的精密度结果（n=5）

2.5 分析方法的准确度

准确称取5份15%吡丙醚·氟啶虫酰胺SE样品再分别加入吡丙醚标准品（0.05 g）和氟啶虫酰胺标准品（0.05 g），在1.3所述的色谱条件下分别进行分析，结果见表2。吡丙醚和氟啶虫酰胺的平均回收率分别为99.20%和99.05%，均可以满足分析方法的要求，说明该分析方法准确度良好。

表2 分析方法的准确度结果（n=5）

3 结论

本文建立了能够同时对15%吡丙醚·氟啶虫酰胺SE中的有效成分吡丙醚和氟啶虫酰胺进行检测的高效液相色谱分析方法，并对此方法进行合理的方法验证。结果表明，吡丙醚和氟啶虫酰胺分离度良好，精密度和准确度高，线性关系良好，相对标准偏差分别为0.003%和0.004%，平均回收率分别为99.20%和99.05%。本方法操作便捷，是进行含有吡丙醚和氟啶虫酰胺复配样品质量控制较为理想的分析方法。