两种不同妊娠诊断方法在多胎萨福克肉羊上的应用*

黄佐兴，倪建宏，刘长彬，，吕占民，4，卢守亮，陈 祥，熬 政

（1.贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，贵州 贵阳 550025；2.新疆生产建设兵团第十师畜牧兽医工作站；3.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所；4.石河子大学生命科学学院）

如何快速、准确、简便有效的进行绵羊早期妊娠诊断，是畜牧工作者和规模化羊场亟待解决的问题。B型超声诊断（B超）技术在上世纪60年代就已经开始应用到畜牧兽医领域，1976年Lindahl[1]利用B超对人工授精后33～80 d的母羊进行妊娠诊断，诊断准确率为100%，这是首次将超声诊断技术应用于绵羊早期妊娠诊断。随着超声诊断技术的发展和应用范围越来越广泛，研究者们将绵羊生殖器官疾病诊断、胎儿发育阶段、单双胎鉴定等进行了深入的研究和试验，取得了一定的研究成果[2-4]。2001年张伯忠[5]利用B超妊娠诊断技术对配种后15～120 d的绵羊进行妊娠诊断，发现30 d及以上配种日龄的母羊妊娠诊断准确率高，可达100%。在诊断过程中可以明显检测到胎体、胎心、尿囊等。人工授精45 d后可明显观测到似“铜钱状”的胎盘子叶，妊娠诊断准确率为100%。目前研究者普遍认为，绵羊在人工授精后的29～31 d为B超法妊娠诊断的最佳时间段。本试验用两种不同的妊娠诊断方法对配种后30 d的母羊进行妊娠诊断，诊断准确率为100%和93.05%。该研究与试验的目的是探索兼具超早期、准确率高、简便经济等特点的家畜妊娠诊断方法，从而提高家畜繁殖效率[6]。

1 材料与方法

1.1 试验设备及试剂

荷兰Pie Medical生产的Tringa Linear VET兽用超声仪（配有多频率线阵探头）、早孕试剂盒、20 mL注射器，、带针采血器、冰块、保温箱、离心机、离心管、75%酒精、蒸馏水、乳胶手套、移液器、1 mL枪头、EP管。

1.2 试验地点和试验动物

试验地点位于新疆生产建设兵团第十师一八四团屯旺畜牧有限公司。试验动物经布鲁氏杆菌病和结核病检测的100只萨福克母羊，年龄在3～4岁。采用同期发情处理的方式进行处理，使用腹腔镜进行输精。

1.3 方法

1.3.1 早孕试剂诊断技术

用采血器进行静脉采血，离心机1 000转离心5 min，移液器吸取上面的血清，放入EP管内，室温条件下进行试剂盒操作。试剂盒在操作前，提前2 h将试剂盒放在室温下进行升温，使试剂盒温度与血清温度一致时，再进行试剂盒妊娠检测。放置在室温下3～5 min，注意观察反应孔内颜色变化，颜色变化与阳性对照相近，就可判定了妊娠，如与阴性对照相近，则判定为未妊娠。最后与B超诊断的结果进行比对，确诊母羊是否妊娠，同时对两种妊娠诊断方法的准确性进行比较。

1.3.2 B型超声诊断技术

首先将配种后30 d 的羊以自然体位站立姿势保定，用消毒液浸润的B超直肠探头，将探头的扫描面朝下进入直肠至骨盆入口前后向下呈45°进行扫查。在扫查的过程中，需要左右摆动探头位置，以便使探头与子宫位置贴合，使子宫影像显示更为清晰可见。诊断过程中以探查到胎囊、胎体、胎心搏动或胎盘子叶即可判定为妊娠，否则为未妊娠。

2 结果与分析

本试验通过同期发情处理，内窥镜输精配种的多胎萨福克母羊共计100只，配种后30 d经兽用直肠超声B超仪诊断妊娠70只，70只母羊全部产羔，共计产羔156只，产羔率为222.8%，妊娠诊断准确率为100%。采集全部100只母羊血液，离心，提取血清，采用早孕试剂盒进行早期妊娠诊断，与B超妊娠诊断相比试剂盒的妊娠诊断准确率为93.05%。

3 讨论

3.1 B型超声波诊断技术应用

B型超声波诊断技术最早应用于人类医学相关的研究。近代以来，B超技术已经成熟应用到人类疾病诊断方面。B超妊娠诊断是一种有效的早期妊娠诊断方法[7-9]。在动物繁殖方面通过超声波妊娠诊断可以准确、快速、简捷的对发情配种后30 d以上的母羊进行科学判定，可在较短的时间对大批母羊进行检查，早期发现妊娠母羊，及时将其隔离饲养，避免因相互挤压等造成流产，并通过调整饲料来保证妊娠母羊的营养需要和促进胎儿的生长发育；同时对未妊娠母羊进行发情处理或及时淘汰，避免母羊长期处于假妊娠或乏情状态，有效提高母羊的繁殖效率，增加养羊业的经济收益[10-14]。B超妊娠诊断技术可有效提高肉羊繁殖效率和生产效益，对加快肉羊养殖规模化、集约化、产业化发展具有一定的促进意义[15]。

3.2 早期妊娠诊断试剂盒的应用

早期妊娠诊断技术主要包括B超早期妊娠诊断技术和ELISA早期妊娠试剂盒两种主要方法。近些年，ELISA因具有灵敏、特异、简单等特点，在牛羊早孕诊断中广泛应用[16-19]。

目前，商品化PAG-ELISA试剂盒已开发并推广应用，如爱德士牛怀孕检测试剂盒等，可对人工授精后28 d的母牛进行早期妊娠诊断，并获得较高的诊断准确率[20-22]。而关于羊的早孕诊断，鉴于PAG蛋白家族含有一些相似的抗原表位[23]，有人尝试使用牛PAG-ELISA试剂盒（爱德士）检测母羊血清中PAG，并获得高的妊娠诊断敏感性（93.5%～100%）和特异性（93.7%～98.5%）[24-25]。因此，本实验中采用了早孕检测试剂盒对进行B超后的母羊进行了验证，通过比较发现，与B超妊娠诊断法相比，试剂盒法的妊娠诊断准确率为93.05%。该法的准确性已可以在绵羊的妊娠诊断中进行应用，为绵羊繁育提供了一种新的妊娠诊断方法。