外环境蛲虫卵检测时间与蛲虫反复感染的关系

姜 遥，林玉婷，梁家源，王立忠，李博文，陈 艳

（韶关学院，广东 韶关 512000）

蛲虫病是儿童常见的寄生虫病之一，高发于夏秋季节[1]，特别是在温带气候地区更为严重[2]。据调查研究显示，全球蛲虫病的发病率达4% ～28%[3]。人群对蛲虫普遍易感，但在4 ～7 岁儿童中感染率最高[4]，其原因主要与蛲虫病“易治难防”、易反复感染和感染途径多的特性有关。我国温度、湿适宜度的东南和西南地区是蛲虫病的主要流行区（发病率≥5.00%）[4]。蛲虫感染危害人类的身心健康。对于儿童来说，轻中度的蛲虫感染对其生长发育影响较小，而重度的蛲虫反复感染1 年以上则会导致儿童生长发育滞后[5]。蛲虫也可发生异位寄生。已有相关报道显示蛲虫寄生可致阑尾炎、阴囊炎、子宫内膜炎、阴道炎、泌尿系统感染等[6-9]。不仅儿童，成人在感染蛲虫后亦可造成严重后果。例如，已有报道肝蛲虫感染误诊为结肠腺癌肝转移[10-11]及增加患焦虑症、抑郁症和睡眠障碍的风险[12]等。蛲虫卵大小约为（50 ～60 μm）×（20 ～30 μm），卵壳无色透明，有两层壳质，蛋白质膜光滑[13]，在外界环境中具有较强的抵抗力。蛲虫卵可以在凉爽、潮湿的环境中存活6 ～8 周，而在干燥的环境中只能存活几天[14]。蛲虫卵对消毒剂的强抵抗力[15]和在外界环境中的高存活率[16-17]给蛲虫病的反复发作创造了条件。蛲虫感染的监测一直是国内外关于寄生虫感染重点实施的项目。蛲虫卵的体外保存时效既是影响临床检测的一个重要因素，也可能是引起蛲虫病反复发作的因素。基于这两个因素，现将在4 ℃冰箱及其他两个温度环境中，新鲜蛲虫卵样本保存条件和时间对虫卵检出率的影响作一分析，为蛲虫病普查和实验室检测提供参考依据，同时探讨蛲虫卵保存时长与蛲虫“易治难防”、反复感染的关系，为蛲虫感染高发人群的卫生保健工作提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采取分层整群抽样法对2021 年4 月广东省韶关市共5 个幼儿园的儿童开展蛲虫感染调查。在家长、老师知情同意的情况下，对调查的儿童采用透明胶纸肛拭法采集蛲虫卵并进行镜检，检测出的阳性标本即为本次蛲虫卵形态观察的来源。

1.2 方法

1.2.1 镜检规则 选取玻片上中下三个片区为镜检观察区，每天对镜检区域进行一次观察，记录蛲虫卵的形态。

1.2.2 样本保存环境与方法 需镜检的样本一部分密封保存于4 ℃的恒温冰箱中，另一部分密封避光保存于平均气温为32℃的夏季环境和平均气温为18℃的秋季环境中。

1.2.3 虫卵形态改变的判断[18]（1）新鲜蛲虫卵：卵壳大小正常，轮廓清晰，内含一条胚蚴，胚蚴结构清晰，边缘光滑，常见缓慢蠕动。（2）胚蚴形态改变：胚蚴结构模糊，蠕动消失，边缘不光滑，有裂缝出现。（3）卵壳内有空泡：内容物皱缩未充盈满卵壳，水分流失，出现不同形状、大小的空隙。

1.2.4 密封蛲虫卵玻片方法 将玻片放置在密封性良好的铁盒中，用保鲜袋密封铁盒。

1.3 观察指标

观察不同季节（夏季、秋季）室温下蛲虫卵的形态变化及4 ℃冷藏保存下蛲虫卵的形态变化。

2 结果

2.1 不同季节室温下蛲虫卵的形态变化

在最高37℃、最低28℃、平均气温32℃以及空气湿度为91% 的夏季环境中，避光保存2 d 后蛲虫卵卵壳内的胚蚴等内容物消失，卵壳增厚，体积变小，但边缘仍光滑整齐，此时的空壳与气泡相似，已无蛲虫卵轮廓，不能判断为阳性。详见表1。在最高24℃、最低12℃、平均气温为18℃以及空气湿度为71% 的环境下，避光保存2 d 蛲虫卵形态改变率为50.0%，但仍能判断为阳性。避光保存5 d，卵壳内胚蚴等内容物消失，卵壳增厚，体积变小，边缘光滑整齐，此时的空壳与气泡相似，已无蛲虫卵轮廓，不能判断为阳性。为提高检测结果的准确率，建议类似此环境条件下2 d 内完成检测。详见表2。

表1 夏季室温（28 ～37 ℃）下蛲虫卵的形态变化

表2 秋季室温（12 ～24 ℃）下蛲虫卵的形态变化

2.2 4℃冷藏保存下蛲虫卵的形态变化

蛲虫卵在4 ℃冷藏环境中保存40 d，胚蚴大部分形态无明显改变，卵壳光滑，边缘整齐。56 d 后胚蚴的形态变化明显，边缘毛糙，偶见虫体裂解成块状，内容物丧失严重，虫卵体积皱缩变黑，但蛲虫卵轮廓仍清晰可见，可判断为可疑阳性。135 d 后蛲虫卵形态同室温保存2 d 后相似，不能判断为阳性。详见表3。

表3 4 ℃冷藏保存下蛲虫卵的形态变化

3 讨论

新鲜蛲虫卵的低温保存有利于保持其活性和形态，能延长有效检测时间。本研究发现，蛲虫卵密封在4 ℃的环境中保存40 d 后，大致形态仍清晰可辨。本研究表明了蛲虫卵有较长的有效检测时间。本研究的开展对于贫困地区或国家的蛲虫检测、蛲虫感染的大范围普查或集中检测，以及标本集中困难和短时间内的大量检测有参考和指导意义。目前，国内外对于蛲虫易治难防和反复感染的原因讨论较少，对于蛲虫卵检出率和防治措施的研究较多。人体对蛲虫普遍无抵抗力，研究显示感染蛲虫后的驱虫工作并不能一步到位，药物治疗6 个月后复查蛲虫感染率回升至75.39%[1]。这可能与蛲虫卵的传播途径多样及体外存活力较强有关。据记录，感染期蛲虫卵在寒冷潮湿的环境中可保存6 ～8 周[14]，而在本研究中蛲虫卵可在4 ℃的冰箱中密封保存40 d，在平均气温为18 ℃、空气湿度为71% 的室内环境中可密封保存2 d。在儿童寄生虫感染率均在30% 以上的幼儿园进行物品（如玩具、床席、桌子）采样及检测，可发现蛲虫卵的携带率为17.41%[19]。这表明，在适宜的条件下，蛲虫卵可长时间存活于环境中，造成幼托机构或家庭聚集性感染。蛲虫卵可长时间存活或许与其虫卵结构有关。猪蛔虫和蛲虫同属线虫，猪蛔虫同蛲虫一样壳质较厚且透明，为双层结构，壳外包绕一层蛋白膜[20]。猪蛔虫卵可在2% 的甲醛液、4 ℃的冰箱中存放5 年，5年后仍能孵出对动物具有感染力的幼虫，其对外界环境的抵抗力相当强[21]。而血吸虫卵即使卵壳薄，也可在4 ℃下1.2% 盐水溶液冷藏储存40 d 内保持大部分形态无明显改变，毛蚴孵出率均在70% 以上[22]。

不同温度和湿度影响蛲虫卵在外界环境中的存活时间，这与蛲虫卵的地理分布有一定的关系。在2016—2018 年全国三十个省蛲虫病的监测中发现，本病的好发气候以亚热带季风气候为主，气候夏热冬温的江西南部和西南部地区的蛲虫感染率为4.79% ～8.52%[4]；以亚热带季风性湿润气候为主的布宜诺斯艾利斯蛲虫的感染率达34.7%[23]；以温带海洋性气候为主的挪威蛲虫的感染率达18%[24]。这些地区气候的共同点是温暖湿润，最冷月平均气温也在0℃以上，全年降雨，湿度较高。有研究发现，在柏林地区，十月、十一月和十二月的蛲虫感染率较高[25]。柏林在十月、十一月、十二月的温度为0 ～14 ℃，湿度也在80% 以上，这与本研究中4 ℃的试验条件较为接近。这些条件有利于蛲虫卵在外界环境中保持活性。蛲虫的反复感染不仅与当地气候有关，还与儿童的卫生习惯和学校生活环境有密切的关系[26]。由于蛲虫卵存在于肛门中，因此粪便中也可能携带蛲虫卵。国外研究表明，家庭中儿童粪便处理方法与儿童生长发育之间有着密切的联系，使用改进的儿童粪便处理方式（将儿童粪便冲入化粪池）可使五岁以下儿童发育迟缓的流行率降低10%，使严重发育迟缓的患病率降低13%[27]。调查显示，我国扬州市改厕后的2009年比改厕前的2005 年寄生虫病的发病率下降58.1%，其中蛲虫病的发病率下降92.3%[28]。由此可见，无害化卫生厕所的普及在蛲虫病的预防中起到了重要的作用。而在偏远地区，如我国云南省农村义务学校，无害化卫生厕所的普及率仅为63.58%[29]，这或许是该地区蛲虫病高发的原因之一。蛲虫易治难防、易反复感染，且在新型冠状病毒疫情常态化的背景下，幼儿园更应提升卫生保健工作的质量，如提升保育员的卫生素养，保证卫生消毒工作的质量[30]。当前，国内外多用物理、生物方法及化学、植物性药物对寄生虫卵进行杀灭[31]。查鉴良等[32]研究发现，用过氧乙酸和1%次氯酸钠处理，能大大降低蛲虫卵的存活率。因此，推荐幼托机构使用符合原国家卫生部《次氯酸钠类消毒剂卫生质量技术规范》规定的次氯酸钠类消毒剂对物体表面进行消毒，同时消毒后应用生活饮用水将残留消毒剂擦净。对于床席、被子等织物，建议进行阳光暴晒，时间不少于6 h[33]。

综上所述，新鲜的蛲虫卵标本密封置于4 ℃环境中，1 个月内进行检测仍能保持较好的观察效果，临床上可据此合理安排检测时间。结合相关文献，提示湿度高的季节可对室内空气进行降湿处理，从而减少蛲虫反复感染的发生。