纺锤体蛋白、锌指转录因子和紧密连接蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

张子杭，成元华，2，李小梅

作者单位：1贵州医科大学临床医学院病理学教研室，贵州 贵阳 550004；2贵州医科大学附属医院病理科，贵州 贵阳550004

在我国，胃癌的发病率及病死率均居消化道恶性肿瘤之首［1-3］，每年死于胃癌的病人达16 万人［4］。胃镜的普及应用使许多早期胃癌病人得到了早期诊断和治疗，从而获得了长久的生存［5］。但在国内早期胃癌检出率不足10%，大部分病人被发现时已处于中晚期，即使施行了胃癌根治术，5 年生存率仍低［6］，预后仍差。肿瘤转移和复发是预后差的主要原因［7-8］，上皮间充质转化（EMT）是肿瘤发生转移的重要原因［6］。纺锤体蛋白（SPIN1）是新近发现的癌基因［9］，在多种肿瘤中高表达，且与不良预后密切相关，而紧密连接蛋白（Claudin-1）为锌指转录因子（Slug）的下游基因［10］，其三者共同参与了EMT 的调控，与胃癌发生转移的原因密切相关，目前国内相关研究较少，故本研究旨在分析胃癌病人癌组织中SPIN1、Slug 和Claudin-1 三种蛋白的表达情况与其临床病理特征的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取贵州医科大学附属医院2019年6月至2021年7月确诊并收治的胃癌病人中抽取病人作为实验对象，在早期胃癌病人和晚期胃癌病人中按照性别进行1∶1 分层抽样，各抽取50 例，共计100 例，排除其中不愿参与研究病人与合并其他癌症病人，余下的84例病患按照胃癌分期分为对照组（早期胃癌）和实验组（晚期胃癌）两组。对照组男20 例，女22 例，年龄范围30～73 岁，年龄（50.48±9.51）岁；实验组男23 例，女19 例，年龄范围35～74岁，年龄（55.16±10.43）岁。所有病人均符合胃癌诊断标准。病人或其近亲属知情同意，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法ELISA 检测肿瘤组织中SPIN1、Slug 和Claudin-1 三种蛋白表达：新鲜肿瘤组织磨碎的匀浆5 000g离心5 min，上清液使用ELISA 试剂盒检测（上海康朗生物科技公司），标准孔各加50 μL 不同标准浓度；分别设置待测空白孔和样品孔。稀释后，样品的最终稀释度为5 倍。加入100 μL 酶标试剂，密封避光，37 ℃孵育60 min，弃去液体，洗涤5次，显色后在450 nm 波长处测量各孔的吸光度，比较标准曲线从而计算出各组蛋白含量。

1.3 统计学方法采用Graph pad 8.0.2 和SPSS 13.0 软件进行统计分析。计量资料以表示。独立t检验用于两组比较，计数资料以例数（%）形式表示，用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较两组病人在性别、吸烟史上差异无统计学意义（P＞0.05），在年龄、饮酒史、胃部疾病上差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组早、晚期胃癌病人一般资料比较∕例（%）

2.2 两组病人SPIN1、Slug 和Claudin-1 蛋白表达情况实验组SPIN1 蛋白表达情况为（784.19±16.42）ng∕L，对照组SPIN1 蛋白表达情况为（397.46±14.29）ng∕L。实验组Slug 蛋白表达情况为（876.84±17.78）ng∕L，对照组Slug 蛋白表达情况为（412.34±16.08）ng∕L。实验组Claudin-1 蛋白表达情况为（324.03±16.77）ng∕L，对照组Claudin-1 蛋白表达情况为（918.95±19.46）ng∕L，实验组Claudin-1 蛋白表达程度低于对照组（P＜0.001）。

2.3 两组胃癌病人与临床病理的关系两组胃癌病人组织学分级、肿瘤长径、是否存在淋巴结转移之间均差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 早、晚期胃癌病人临床病理情况比较∕例（%）

3 讨论

胃癌是全球常见的恶性肿瘤之一［11］，其发生发展涉及多信号、多基因的调控，而EMT 在这一过程中起着关键作用［12-14］。研究表明，细胞间连接丢失是EMT的重要标志之一［15-16］。Claudin-1作为一种紧密连接蛋白，可调节小离子在相邻细胞之间的转运，保持细胞极性，在联系细胞间通信和维持上皮屏障功能中发挥重要作用。Claudin-1 的缺失会大大增加胃癌细胞远处转移的概率［17］，而过表达Claudin-1能抑制黑色素瘤的侵袭和迁移，同时能够减弱裸鼠成瘤能力［18-19］。

Slug 蛋白作为EMT 的重要转录调节因子，可诱导E-cad 蛋 白表达下降从而促进EMT 发 生［20-21］，SPIN1 表达情况与Claudin-1 成反比，而Claudin-1 本身是上皮细胞中Slug 转录因子的直接下游靶基因。推测SPIN1、Slug 与Claudin-1 三者间通过某种方式促进了EMT 的发生，从而调控肿瘤细胞的侵袭和转移能力，导致肿瘤发生远处转移。

本研究观察到晚期胃癌病人SPIN1、Slug 蛋白表达情况较早期胃癌病人明显升高，而Claudin-1 蛋白表达明显下降。结合两组间临床病理情况后发现，相较于早期胃癌病人，在SPIN1、Slug 蛋白高表达而Claudin-1 低表达的晚期胃癌病人中，肿瘤体积较大且多见淋巴结转移，组织学分型多为高、中度分化，可看出SPIN1、Slug 蛋白表达情况与胃癌恶性程度成正比，而Claudin-1 蛋白表达情况与胃癌分期成反比，Slug 和SPIN1 蛋白可能通过抑制Claudin-1蛋白表达从而促进EMT 的发生。E2F1 是参与调控细胞周期的重要因子［22］，在胃癌中可上调胃癌病人体内SPIN1 的表达，研究表明，SPIN1 可以促进胃癌细胞的迁移和增殖［23］，也可以促进细胞周期进程。这些结果表明SPIN1 在胃癌中充当潜在的癌基因，通过促进胃癌细胞生长和远处转移从而带来不良预后，相关研究发现，SPIN1高表达时Claudin-1表达情况会显著降低［24］，其二者之间的作用关系目前仍然未知。Slug 蛋白作为EMT 上游的重要转录因子，与CDH1启动子结合后可诱导E-cad蛋白表达降低，从而激活EMT 发生，并导致远处转移和较差的预后。Claudin-1 是上皮细胞中Slug 家族因子的直接下游靶基因，通过Slug 与近端E-box 区域的直接结合而被抑制其转录［25］，Claudin-1 作为参与构成紧密连接结构的密蛋白，当其表达收到Slug 转录因子的抑制，紧密连接的结构和功能即发生改变从而导致细胞间黏附的丧失。因此当Slug蛋白高表达，E-cad和Claudin-1 表达均收到抑制，从而导致细胞正常极性和组织结构完整性降低，引起癌细胞侵袭性和转移能力增加，恶化病人预后［26］。

综上所述，在胃癌病人中，SPIN1、Slug蛋白高表达而Claudin-1 蛋白低表达往往提示发生淋巴结转移且预后较差，能够作为判断胃癌分期较好的临床指标。