浮针和毫针对腰椎间盘突出症兔步态功能、β-内啡肽及炎症因子表达的影响

封迎帅 刘百祥 陈欲攀 阳大为 张子怡 李俊

[关键词]浮针；毫针；腰椎间盘突出症；β-内啡肽；前列腺素E2；肿瘤坏死因子α；白介素6

腰椎间盘突出症（lumbarintervertebraldischerniation，LIDH）是临床的常见病和多发病，可引起腰痛、放射性神经根性腿痛和感觉障碍等临床症状，患者在站立、行走、打喷嚏或咳嗽后症状常常会加重，严重影响患者日常生活和工作，给患者身体或心理健康造成很大的伤害[1]。随着人们生活节奏的加快、生活方式的改变，LIDH的发病趋于年轻化，且其发病率呈现逐渐上升的趋势[1]，寻找一种高效治疗此病的方法是目前研究的关键问题之一。研究表明保守治疗中的针灸疗法如浮针、毫针、电针等对LIDH具有一定的疗效[2]，但不同的针刺方法的治疗频次及作用却不尽相同，浮针与毫针治疗LIDH的疗效有何差异？浮针治疗LIDH的作用机制如何？目前尚不明确。因此，本研究以LIDH家兔为实验对象，以毫针治疗为对照组，观察浮针、毫针对LIDH兔步态功能、血清β-内啡肽（β-endorphin，β-EP）、前列腺素E2（prostaglandinE2，PGE2）、髓核肿瘤坏死因子α（tumornecrosisfactorα，TNF-α）、白介素6（interleukin-6，IL-6）表达的影响，比较浮针与毫针对LIDH的疗效差异，探讨浮针治疗LIDH的相关作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料和仪器设备

普通健康3月龄新西兰家兔40只，雌雄各半，体重（2.25±0.25）kg，购于湖南太平生物有限科技公司[生产许可证号：SCXK（湘）2020-0005]。浮针进针器与一次性使用中号浮针（南京派福医学科技有限公司）；一次性华佗牌针灸针（苏州医疗用品厂有限公司）；micro17R高速冷冻离心机（美国赛默飞公司）；ELX800酶标仪（美国biotek公司）。TNF-α试剂盒（货号：CSB-E06998Rb），IL-6试剂盒（货号：CSB-E06903Rb），PGE2试剂盒（货号CSB-E06960Rb）均购自武汉华美生物工程有限公司，β-EP试剂盒（货号：JN21031）购自上海纪宁生物有限公司，乌拉坦（货号：S11036）购自源叶生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分组与造模 本研究已经医院动物伦理委员会批准。健康3月龄新西兰家兔40只，在我院临床研究所实验中心单笼喂养，自然光照，自由饮水进食，室温（23±2）℃。兔适应性饲养3d后，按照体重进行编号，并采用随机数表法将其分为空白组、模型组、浮针组、毫针组，每组各10只。模型组、浮针组、毫针组采用团队前期研究的自制改良的LIDH兔造模器（由直径1.6mm上颌窦穿刺针改制），制备兔LIDH模型[3]，空白组不予以处理。需建模的兔麻醉后，固定、剃毛、消毒，在左下腹正中线外1cm处作5cm长的纵行切口，依次分离相关肌肉、暴露L6～L7椎间隙前方韧带及椎间隙，在此处将LIDH造模器与椎间隙约成45°角度向右下方刺入7.80～8.00mm，固定造模器针管，用平头针芯把针管内的椎间盘组织推送到后纵韧带的前方，建立L6～L7椎间盘右侧突出病理损伤模型，缝合皮肤。造模后对家兔抽样行CT检查，家兔的髓核向椎管内突出为造模成功。

1.2.2 干预措施 取穴参考《实验针灸学》[4]。于造模后第2天，选取患侧承山、环跳、大肠俞穴。毫针组采用0.30mm×25mm针灸针针刺，承山直刺7mm，环跳直刺20mm，大肠俞直刺7mm，施以平补平泻法，得气后，留针20min，每天1次，连续干预处理10次。浮针组分别在患侧承山、环跳、大肠俞位置，采用中号浮针针刺，并配合肢体导引功能活动（再灌注活动）[5]，治疗结束后将针取出。具体的操作如下，进针：将中号浮针装入浮针进针器内，针体与皮肤呈15℃角刺入皮下层，将浮针从进针器内取出。再将针体沿皮下疏松组织层平行向前推进，待针身完全推进后，将针尖退回软管中并锁定。扫散：用右手做扫散动作[5]，扫散幅度30°，频率为100次/min。導引功能活动：扫散的同时，用左手拿揉病变局部组织，或左手托住家兔的患侧肢体向前、向后伸腿或伸髋等相关功能活动[5]，促进针效。每次功能活动持续时间为30s，兔放松肌肉休息时间为30s，功能活动3次。扫散结束后，拔针。浮针治疗隔天1次，一共处理5次。空白组和模型组不予干预。

1.2.3 肢体步态功能评估 采用步态功能评分标准[6]评估家兔步态功能。并于造模前、造模后、治疗后评定其步态神经功能评分，分别从肢体肌肉收缩、运动、反应等方面进行综合评估。总分0～4分，评分越高代表步态神经功能损伤程度越轻，4分为完全正常。

1.2.4 检测家兔血清β-EP、PGE2水平 家兔麻醉后，心脏采血法取血5ml，离心，取上清液-20℃保存待测。用酶联免疫吸附测定法检测每组家兔血清标本中β-EP、PGE2水平。

1.2.5 检测家兔髓核TNF-α、IL-6水平 家兔麻醉后取材，耳缘静脉注射空气（40ml）处死，取腰L6～L7椎间盘的髓核组织，0.9%氯化钠溶液冲洗残留物，加入0.5ml0.9%氯化钠溶液（2ml/400mg），组织研磨仪60Hz研磨60s制成髓核组织匀浆，离心，取上清液，-20℃保存待测。用酶联免疫吸附测定法检测每组家兔髓核组织标本中TNF-α、IL-6水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件进行数据处理，对数据资料进行正态性检验、方差齐性检验，计量资料用均数±标准差（x±s）表示。自身前后比较用配对t检验；多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较，方差齐时采用LSD-t检验；方差不齐时采用Tamhane’sT2法分析，以P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著统计学意义。

2 结果

2.1 各组家兔肢体步态功能比较

造模前，各组家兔步态评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）；除空白组外，其他三组造模后家兔步态功能评分均明显低于造模前，差异有显著统计学意义（P<0.01）；浮针组、毫针组治疗后家兔步态评分值明显高于造模后，差异有显著统计学意义（P<0.01）；模型组、空白组治疗前后步态评分值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。造模后，模型组、浮针组、电针组步态评分明显低于空白组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；治疗后，浮针组步态评分显著高于模型组和毫针组，差异有显著统计学意义（P<0.01）。浮针组治疗前后步态评分差值显著高于空白组、模型组和毫针组，差异有显著统计学意义（P<0.01）。见表1。

2.2 各组家兔血清β-EP、PGE2含量比较

模型组家兔血清β-EP水平显著低于空白组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；浮针组和毫针组血清β-EP水平显著高于模型组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；浮针组血清β-EP水平显著高于毫针组，差异有显著统计学意义（P<0.01）。见表2。

模型组血清PGE2水平明显高于空白组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；浮针组血清PGE2水平明显低于模型组，差异有显著统计学意义（P<0.01），毫针组血清PGE2水平明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；浮针组血清PGE2水平明显低于毫针组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 各组家兔髓核TNF-α、IL-6水平比较

模型组髓核组织TNF-α、IL-6水平明显高于空白组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；浮针组、毫针组髓核组织TNF-α、IL-6表达明显低于模型组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；浮针组髓核组织TNF-α、IL-6水平明显低于毫针组，差异有显著统计学意义（P<0.01）。见表3。

3 讨论

腰椎间盘突出症归属于中医“痹病”“腰腿痛”“痿证”等范畴，在中医古籍中有大量关于腰腿痛与督脉、足太阳膀胱经、足少阳胆经等经络密切相关的记载，表明这些经络循行部位是腰腿痛患者主要发病部位，根据“经络所过，主治所及”理论选取膀胱经大肠俞、承山穴、胆经环跳穴等均可治疗腰腿痛疾病。浮针疗法是使用浮针皮下针刺并配合导引再灌注活动（边治疗边运动）的一种现代针灸疗法[7]。目前临床上仅仅从患者的临床评分角度对浮针、毫针治疗LIDH疗效进行比较，发现浮针比常规针刺治疗更能有效缓解患者的疼痛程度，并能提高患者的治疗有效率[8]，但是却缺乏规范的相同穴位的两种不同的针刺方法对比研究，也缺乏相关疼痛及炎症因子指标的研究。本研究用浮针、毫针针刺相同穴位治疗LIDH，并探究疼痛及炎症因子生化指标是否在LIDP的疼痛及炎症的调节中起作用。

LIDH患者腰椎神经根受压水肿可引起腰部疼痛，其可能与外周致痛物质与内源性抗痛物质水平密切相关[9-10]。β-EP是一种具有镇痛功能内源性阿片肽物质，在疼痛应激状态下，血液中的β-EP水平相应增加；如果其分泌不足可引起痛觉过敏，进而加重疼痛[9]。LIDH患者血液中β-EP含量与其疼痛密切相关[10]。PGE2不仅能促进炎症的发展，而且还可以引起疼痛超敏化从而导致疼痛加剧。LIDH髓核突出后可刺激椎间盘中的PGE2释放，诱发椎间盘组织细胞分泌各种炎性介质，从而引起腰腿疼痛[11]。PGE2在LIDH的炎症初期异常增高，且和疼痛程度密切相关[12]。本研究表明，LIDH经过浮针、毫针治疗后可以诱导血清β-EP的释放增加，抑制血清PGE2表达，浮针治疗的效果更优于毫针治疗的效果，可能是浮针配合了导引功能活动进一步诱导β-EP释放到血流有关，这与一些物理治疗和适当运动是内源性β-EP释放到血流的诱导剂的报道观点一致[13]。

突出的腰椎间盘组织刺激或压迫神经根引发腰痛和/或下肢放射性坐骨神经痛，与局部炎症因子的释放密切相关，TNF-α是一种具有强烈致痛作用的细胞因子，其不仅可以引起神经根性疼痛，而且可以促进IL-6和IL-1等炎症因子释放，IL-6可作为预测LIDH术后疼痛缓解与症状改善的标志物[14]，降低LIDH患者TNF-α、IL-6等炎症因子水平，将有助于缓解疼痛等症状[15]。本研究结果显示，造模组家兔的髓核中TNF-α、IL-6显著增加，经过浮针、毫针治疗后逆转了这一过程，LIDH兔髓核TNF-α、IL-6水平表达降低，家兔的步态功能明显改善。

本研究观察比较了浮针、毫针相同穴位（大肠俞、承山穴、环跳穴）治疗LIDH的效果，发现两种治疗方法均可以提高LIDH家兔的血清β-EP水平，降低血清PGE2及髓核TNF-α、IL-6水平，且浮針组的变化幅度均明显大于毫针组，但是浮针治疗的频次少于毫针。其可能的机制是浮针疗法配合了导引功能活动，更进一步诱导β-EP的释放，改善椎间盘旁局部肌肉的紧张或痉挛，从而加速减轻炎症反应、减轻疼痛。总之，浮针疗法治疗LIDH家兔疗效优于毫针疗法，治疗次数少，值得临床推广运用。本研究是从实验的角度进行机制研究，未来需要进一步从临床上观察在针刺相同的穴位时浮针、毫针两种不同治疗方法治疗LIDH患者相关疼痛及炎症因子指标的差异，以期为临床治疗LIDH提供更重要的数据支持。