初诊系统性红斑狼疮患者血清Smad特异性E3泛素蛋白连接酶1及Smad1水平分析

王妍，周淑红，2，张凯，梁刘娜，陈英，杨晓蓉，郭莉江

1 甘肃中医药大学第一临床医学院（甘肃省人民医院），兰州 730000；2 甘肃省人民医院免疫风湿科；3 河西学院附属张掖人民医院老年病科

系统性红斑狼疮（SLE）是一种以自身抗体（如抗dsDNA、抗sm 抗体等）存在为特征的自身免疫性疾病，可导致免疫复合物的形成和多器官炎症反应［1］。狼疮肾炎是SLE 累及肾脏引起的免疫复合物沉积型肾小球肾炎。半数以上的SLE患者有肾脏受累［2］，从病理学角度看，狼疮肾炎的发病率近100%［3］。Smad 特 异 性E3 泛 素 蛋 白 连 接 酶1（Smurf1）位于染色体7Q22.1，是神经前体细胞发育下调表达因子4家族成员之一，在许多组织中表达，参与调节不同的生理过程［4］。泛素化异常可导致免疫系统紊乱及炎症反应的发生。有研究表明，Smurf1通过增强泛素化和促进蛋白酶体降解信号转导与转录激活子1（STAT1）使干扰素信号失控而导致自身免疫性疾病［5］。Smurf1 在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的上皮间质转化发展中起关键作用，参与肾间质纤维化的进展［6］。Smad1 蛋白是骨形态发生蛋白（BMP）/Smads 信号通路中的重要分子之一，BMP 信号通路在造血过程、免疫调节过程及血液系统疾病、自身免疫疾病、感染的发生中发挥调控作用［7］。Smurf1 是BMP 信号通路中Smad1 和Smad5的E3 泛素连接酶，通过泛素化和降解Smad1/5 来调节骨形成［5］。上述研究提示，Smurf1 与Smad1 有着密切的联系。但是对于Smurf1、Smad1 与SLE 疾病过程的关系，目前研究甚少。因此，本研究通过观察初诊SLE 患者血清Smurf1、Smad1 水平变化，探讨Smurf1、Smad1 水平与SLE 临床表现、炎症反应指标及自身抗体水平等资料的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2020 年6 月—2021 年4 月于甘肃省人民医院风湿免疫科治疗的初诊SLE 患者36 例纳入病例组，患者均为女性，年龄16 ～ 61（35.6 ± 12.3）岁；诊断符合2019年欧洲抗风湿病联盟/美国风湿病学会SLE 分类标准［8］；初次发病，未接受治疗；血液系统受累（WBC＜4.0×109/L和/或Hb＜110 g/L、PLT＜100×109/L）29 例，肾脏系统受累22例（持续性尿蛋白超过0.5 g/24 h或尿蛋白+++以上和/或血尿、管型尿，伴或不伴血清肌酐升高）。选择同期健康体检者36 例纳入对照组，年龄25 ～ 52（41.4 ± 9.2）岁，均为女性，均无风湿免疫性疾病、心血管疾病、血液系统疾病、代谢性疾病、恶性肿瘤、感染性疾病、肝肾功能不全等病史。两组研究对象均签署知情同意书。本研究获医院伦理委员会批准（伦理审查批号2020-169）。

1.2 血清Smurf1、Smad1 检测 取两组清晨空腹血，抽取约2 mL 静脉血于枸橼酸抗凝管中，使血液与抗凝剂充分混匀，2 h 内以3 000 g 离心10 min，在超净工作台中用移液枪吸取上清至无菌EP管内，做好标记，冻存于-80 ℃冰箱中。采用ELISA 法检测血清中的Smurf1、Smad1，严格按照试剂说明书操作步骤完成。

1.3 临床资料收集 收集病例组实验室检查资料，包括炎症相关指标［C 反应蛋白（CRP）、白细胞介素（IL）6、红细胞沉降率（ESR）］、血常规指标（WBC、Hb、PLT）、肾功能指标（血肌酐、尿素氮）、免疫功能指标（补体C3、C4和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM）、自身抗体指标（抗核抗体、抗dsDNA 抗体、抗Sm 抗体、抗SSA、抗SSB）。根据疾病活动指数（SLEDAI）对SLE患者疾病活动度程度进行评分，＞14 分为重度、10 ～ 14分为中度、＜10分为轻度。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0 软件进行统计分析。计量资料采用Shapiro-Wilk 法检验正态性，符合正态分布的计量资料以±s表示，组间比较采用t检验。相关性分析采用Pearson 直线相关分析法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清Smad1、Smurf1 水平比较 病例组血清Smurf1、Smad1水平分别为（44.49 ± 3.62）、（24.66 ± 1.31）ng/mL，对照组分别为（40.39 ± 6.33）、（22.62 ± 2.70）ng/mL。病例组血清Smurf1、Smad1水平高于对照组（P均＜0.05）。

2.2 病例组血清Smurf1、Smad1 与疾病活动指数、炎症指标、血常规指标、肾功能指标、免疫功能指标的相关性 病例组血清Smurf1、Smad1 与SLEDAI 评分、CRP、IL-6、ESR、WBC、Hb、血肌酐、尿素氮、补体C4、IgG、IgA、IgM均无相关性，血清Smurf1与补体C3、PLT呈负相关（r分别为-0.529、-0.625，P均＜0.05），与血清Smad1 呈正相关（r=0.719，P＜0.05）；血清Smad1与PLT呈负相关（r=-0.673，P＜0.05）。

2.3 不同器官受累情况及自身抗体水平的SLE 患者血清Smurf1、Smad1 水平比较 血液系统受累的SLE患者血清Smurf1水平高于无血液系统受累者（P＜0.05）。详见表1。

表1 不同器官受累情况及自身抗体水平的SLE患者血清Smurf1、Smad1水平比较（ng/mL，± s）

表1 不同器官受累情况及自身抗体水平的SLE患者血清Smurf1、Smad1水平比较（ng/mL，± s）

注：与无血液系统受累者相比，*P＜0.05。

临床资料抗dsDNA 阳性 阴性抗Sm 阳性 阴性抗SSA 阳性 阴性抗SSB 阳性 阴性血液系统受累 有 无肾脏受累 有 无尿蛋白 阳性 阴性n Smurf1 Smad1 18 18 43.93 ± 4.04 45.05 ± 3.32 24.76 ± 1.78 24.56 ± 0.68 11 25 43.57 ± 4.52 44.91 ± 3.29 24.50 ± 1.72 24.74 ± 1.17 27 9 44.39 ± 3.85 44.78 ± 3.31 24.71 ± 1.47 24.43 ± 0.72 9 27 42.14 ± 3.80 45.27 ± 3.35 24.98 ± 1.29 23.73 ± 0.95 29 7 45.48 ± 3.19*40.21 ± 1.78 24.73 ± 1.29 24.37 ± 1.27 22 14 44.49 ± 3.24 44.48 ± 4.51 24.85 ± 1.42 24.35 ± 1.15 24.95 ± 1.49 24.16 ± 1.10 16 20 45.33 ± 3.53 43.79 ± 4.43

3 讨论

SLE 的多器官损伤是由自身抗体和免疫复合物介导的免疫性反应失调所致。辅助性T细胞（Th）17产生的IL-17 参与SLE 的发病过程并与疾病活动度相关［1］。狼疮肾炎是SLE 患者最常见的脏器受累并发症，同时也是不良预后高危因素。Smurf1 介导的蛋白质降解过程在多种细胞生物过程中起重要作用。肿瘤坏死因子受体相关因子参与到炎症反应及免疫反应过程中。Smurf1通过泛素化进一步调控IL-17 及NF-κB 活性从而参与炎症反应［9-10］。有研究认为，泛素化蛋白Smurf1 参与了肾纤维化的发生［11-13］，Smurf1持续高表达使Smad7蛋白泛素化降解而导致受体调节型Smad 蛋白表达上调，最终引起肾纤维化［12］。Smurf1能够靶向泛素化和降解STAT1，是干扰素β信号的负反馈调节因子［5］。这些研究结果提示，Smurf1可能在SLE发病机制中起重要作用。

本研究结果显示，SLE 患者血清Smurf1 水平明显高于对照组，且与PLT 呈负相关；此外，合并血液系统损害的SLE患者血清Smurf1水平也高于无血液系统受累的患者，这提示如果SLE 患者血清Smurf1水平增高，要警惕PLT 减少。有研究显示，受体型Smad-Runt 相关转录因子信号通路可能通过调控Smurf1表达从而调节造血细胞功能［14］。一项多中心大样本研究显示，补体水平下降的SLE 患者WBC、Hb、PLT较正常组降低［15］。本研究结果亦显示，血清Smurf1水平与补体C3呈负相关。补体能够促进血小板活化并启动促炎反应，补体水平紊乱可引起血小板过度激活及减少［16］。有学者认为，低C3水平与SLE疾病活动度及肾脏损害相关［17］，这进一步提示Smurf1与SLE患者免疫炎症和疾病活动具有一定相关性。

Smad1 蛋白参与诱导BMP 信号通路。BMP 在胚胎发育及维持多种组织器官正常功能方面起着关键作用，其能够促进T 细胞增殖和活化，促进Th17分化［18］。有学者在类风湿性关节炎相关研究中也观察到Smad1增高与滑膜成纤维细胞的侵袭能力密切相关［19］。本研究结果显示，SLE 患者血清Smad1 水平高于对照组，尽管Smad1水平与补体C3无相关性，但是Smad1与Smurf1呈正相关，与PLT呈负相关，提示Smad1 作为免疫炎症反应的标志，在自身免疫疾病中发挥着重要作用。

结合上述研究结果，我们认为，血清Smurf1、Smad1 水平对于SLE 患者器官损害和血小板减少具有一定的预测价值。但由于本研究纳入样本量较少，血清Smurf1、Smad1 水平与肾脏系统相关指标及SLEDAI评分的相关性仍有待后续研究。