当归饮子及其拆方对慢性湿疹豚鼠皮毛疏泄与润泽功能状态的影响

高 志，马静怡，武亦阁，范丽娜，贺 乙，周 光

(新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木齐 830011)

湿疹是由素体在多种因素诱发下的临床难治性皮肤病，病理组织形态表明可累及皮肤表皮及真皮浅层[1]，引起表皮屏障功能障碍。中医皮毛“疏泄肌表”和“润泽肌肤”的功能和状态与西医“表皮屏障功能”趋同，其功能障碍是临床皮肤病的共性机制[2-3]。皮毛“疏泄肌表”和“润泽肌肤”的功能和状态是课题组对皮毛“卫外作用”理论的研究诠释，皮毛“开阖”功能和生理状态反映了皮毛的“疏泄”作用，皮毛“润泽肌肤”是指皮毛的正常生理和功能表现需要气血津液的正常敷布与润养。历代医家对苔藓化皮损为特征的湿疹患者多从血虚风燥证论治[4]，多以当归饮子加减治疗。当归饮子(出自《重订严氏济生方》)具有祛风止痒、养血润燥之功效，课题组前期研究表明当归饮子能够降低豚鼠血清IgE水平，减轻瘙痒症状，平衡血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)水平，调节皮肤水通道蛋白AQP3及皮肤角质层含水量和经皮水分散失量[5]。基于课题组前期研究，本实验以方测证，观察了当归饮子“疏泄”与“润泽”组方用药对皮肤角质层含水量和经皮水分散失量的影响，研究当归饮子调节皮肤屏障功能的关键用药和配伍意义。

1 实验材料与方法

1.1动物 雄性豚鼠40只，体重(350±20)g，购自陕西君行生物科技有限公司，合格证号：SCXK(陕)2017-001。实验动物饲养环境为普通级环境实验室，光照12 h，自由摄食饮水，豚鼠适应性喂养1周后开始实验。本实验得到新疆医科大学第一附属医院动物伦理委员会批准(IACUC-20160218-076)。

1.2药物、试剂及仪器 当归饮子：当归10 g、白芍药10 g、川芎10 g、生地黄10 g、白蒺藜10 g、防风10 g、荆芥10 g、何首乌5 g、黄芪5 g、炙甘草5 g、生姜3 g。当归饮子去疏泄药组：当归10 g、白芍药10 g、川芎10 g、生地黄10 g、何首乌5 g、黄芪5 g、炙甘草5 g。当归饮子去润泽药组：白蒺藜10 g、荆芥10 g、防风10 g、黄芪5 g、炙甘草5 g。饮片购自新疆医科大学第四临床医学院中药房。将中药采用传统煎煮方法常规煎煮2次，合并滤液后通过95 ℃水浴锅浓缩后保存备用。当归饮子药液生药浓度为1.36 g/mL，当归饮子去疏泄药的生药浓度为0.85 g/mL，当归饮子去润泽药的生药浓度为0.62 g/mL。2，4-二硝基氯苯(DNCB)购自上海古朵生物科技有限公司(批号：20191210)，丙酮购自天津富宇精细化工有限公司(批号：20190608)。德国CK公司MPA6/10型多功能皮肤测试仪；德国Sartorius公司BL310/BL21S型分析天平；上海菁海仪器有限公司DY15K型电子天平。

1.3造模溶液的制备 致敏溶液的制备：称取DNCB 3.50 g，溶解于50 mL丙酮中制成7% DNCB丙酮溶液作为实验的致敏溶液；激发溶液的制备：称取DNCB 0.10 g，溶解于100 mL丙酮中制成0.1% DNCB丙酮溶液作为实验的激发溶液。

1.4实验方法 实验豚鼠适应性喂养1周后，随机分为正常组、模型组、当归饮子全方组、当归饮子去润泽药组、当归饮子去疏泄药组，每组8只。参照文献[5-6]方法造模：实验第1天将豚鼠背部脱毛,范围约3 cm×3 cm，除正常组外，其余各组豚鼠背部脱毛区以7% DNCB丙酮溶液100 μL外涂致敏,实验第5天除正常组外所有豚鼠右耳内侧以0.1% DNCB丙酮溶液25 μL外涂激发，每周涂药1次,连续涂药4周。豚鼠背部致敏区皮损呈现红斑、丘疹、苔藓样变,并且伴有明显搔抓迹象，豚鼠右耳局部渗出减少且伴有少量皮屑，提示血虚风燥型慢性湿疹模型造模成功。于造模结束后第2天，按人与豚鼠体表面积比例换算豚鼠给药剂量，当归饮子全方组给予1.36 mg/mL当归饮子全方水煎液6.82 g/kg灌胃，当归饮子去润泽药组给予0.62 g/mL当归饮子去润泽药水煎液4.26 g/kg灌胃,当归饮子去疏泄药组给予0.85 g/mL当归饮子去疏泄药水煎液3.10 g/kg灌胃，正常组和模型组给予等体积纯净水灌胃，均1次/d，连续灌胃2周。

1.5观察指标与方法

1.5.1皮损评分 分别于造模结束当日和末次灌胃结束当日对各组豚鼠背部皮损(红斑、水肿、抓痕)进行评分。红斑：按无、轻微、明显、中度红斑伴轻中度痂皮、重度红斑伴重度痂皮分别赋予0，1，2，3，4分；水肿按无、轻度、中度、重度分别赋予0，1，2，3分；抓痕按无、有赋予0，1分；将各指标得分相加得到总积分，最高分为8分[7]。

1.5.2皮肤角质层含水量和经皮水分散失量 采用德国CK公司MPA6/10型仪器检测，将仪器测试探测头垂直放在测试皮肤上面，仪器电脑系统显示数据。

2 结 果

2.1各组豚鼠皮损评分 末次灌胃结束后，模型组皮损评分明显高于正常组(P<0.05)，当归饮子全方组、当归饮子去疏泄药组、当归饮子去润泽药组均明显低于模型组(P均<0.05)，各药物组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 正常组和慢性湿疹各组豚鼠皮损评分比较分)

2.2各组豚鼠皮肤角质层含水量比较 造模结束当日，各造模组豚鼠皮肤角质层含水量均明显低于正常组(P均<0.05)，各造模组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。末次灌胃结束后，模型组皮肤角质层含水量明显低于正常组(P<0.05)，当归饮子全方组、当归饮子去疏泄药组、当归饮子去润泽药组皮肤角质层含水量均明显高于模型组(P均<0.05)，但当归饮子去疏泄药组和当归饮子去润泽药组皮肤角质层含水量均明显低于当归饮子全方组(P均<0.05)。见表2。

表2 正常组和慢性湿疹各组豚鼠皮肤角质层含水量比较

2.3各组豚鼠经皮水分散失量比较 造模结束当日，各造模组豚鼠经皮水分散失量均明显高于正常组(P均<0.05)，各造模组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。末次灌胃结束后，模型组经皮水分散失量明显高于正常组(P<0.05)，当归饮子全方组、当归饮子去疏泄药组、当归饮子去润泽药组经皮水分散失量均明显低于模型组(P均<0.05)，各药物组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，但趋势全方组优于各拆方组。见表3。

表3 正常组和慢性湿疹各组豚鼠经皮水分散失量比较

3 讨 论

湿疹缠绵反复，迁延不愈，其病因复杂而不明确。现代研究表明皮肤屏障功能障碍是临床常见皮肤病的主要发病机制[8]，慢性湿疹皮肤干燥伴随着表皮屏障功能障碍，多表现为皮肤水分过度散失，从而引起皮肤干燥脱屑，同时促进皮肤炎症因子的释放[9]。中医认为湿疹患者多为禀赋不耐，素体脾虚，或为饮食不节，或为外邪诱发，病情反复，邪热蕴肤，化热耗伤津血，肌肤失养，皮肤脱屑、干燥、苔藓化。究其根本为湿热蕴肤，玄府、腠理阻塞，皮毛“疏泄”失调，湿热蕴久，耗伤阴血，皮毛津血不足，“润泽”失司。皮毛“疏泄”与“润泽”的功能与状态与表皮屏障功能密切相关，二者之间具有趋同性[10-11]。

皮肤角质层含水量和经皮水分散失量在一定程度反映了表皮通透屏障功能状态，其中皮肤角质层含水量可直观反映皮肤润泽状态，经皮水分散失量和表面皮脂在一定程度上反映肌表疏泄的功能状态[12-13]。表皮水分散失过多反映皮毛卫外不固，疏泄水湿过度，有损津血，皮毛失于濡养;水分散失过低反映邪蕴皮毛，玄府、腠理疏泄不畅;皮肤皮脂含量过高反映湿热邪毒蕴结皮毛，疏泄不足，濡养障碍;皮肤皮脂含量过低反映气血濡养，润泽不足。由此可见，中医皮毛“疏泄”与“润泽”功能理论及调控经验为西医“表皮通透屏障功能”研究提供了思路。

当归饮子组成药物主要为“养血润泽”药组(当归、川芎、生地黄、白芍药、何首乌、炙甘草)和“疏泄敷布津血”药组(黄芪、白蒺藜、防风、荆芥、生姜)，许多前世医家将其应用于阴血亏损合并风邪的多种皮肤病如瘙痒症、湿疹、荨麻疹等[14-16]，能有效缓解瘙痒，减少鳞屑，改善皮肤肥厚症状。课题组前期实验研究显示，该方对湿疹等免疫相关变态反应性疾病皮肤屏障具有调节作用[5]，并认为血虚风燥证慢性湿疹之风为“风象”，而非风邪。当归饮子组方中当归辛润甘缓，通络养血润燥；白芍苦、酸入肝脾经，养血和营卫；生地黄性味甘寒，凉血养血，且能养阴生津；何首乌性甘温，补肝肾，益精血；川芎性温，行气活血，通络行营卫；黄芪益气托毒，敛疮生肌；方中辛润甘缓之当归、白芍、生地黄、何首乌乃养血滋阴药，配甘温流气之川芎、黄芪，可敷布津血于皮毛，养血润燥，改善皮毛之干燥症状。《内经》提出辛味药治“肾燥”。肾精亏而津血不足，肤失润养是临床干燥性皮肤病的主要内因。故当归饮子方中辛润甘缓之当归、白芍、生地黄、何首乌又配以辛散透表之防风、荆芥、白蒺藜、生姜，一则疏泄蕴结皮毛之邪，二则助津血之药敷布于皮毛。纵观全方，虽为养血润燥之方，但养血之中孕育着“疏泄”与“润泽”皮毛之玄机。

拆方研究是研究中医组方用药规律，探索名家用药配伍经验的有效方法，能够优化中药复方，为寻找最佳组方和关键药物提供科学依据。通过当归饮子拆方实验，课题组认为当归饮子治疗慢性湿疹主要以养血润燥、辛散透表的配伍组合改善皮毛“疏泄状态”与“润泽状态”，以修复表皮通透屏障功能，因此将当归饮子拆分成“去疏泄”药组和“去润泽”药组进行验证实验。本次实验研究显示，当归饮子组豚鼠皮肤角质层含水量明显高于模型组，经皮水分散失量明显低于模型组，说明当归饮子能够提高皮肤角质层含水量，维护皮毛“疏泄”与“润泽”状态，提高皮肤屏障功能，解决皮毛干燥问题；而当归饮子去润泽药组和当归饮子去疏泄药组豚鼠皮肤角质层含水量较当归饮子组低，经皮水分散失量有所提高，说明“疏泄”药组和“润泽”药组的配伍结构在治疗中发挥了关键作用。

综上所述，当归饮子能够改善慢性湿疹豚鼠皮肤角质层含水量和经皮水分散失量，即能够改善皮毛“疏泄”与“润泽”功能状态，修复表皮通透屏障功能，从而缓解皮肤干燥状态，其效果优于拆方组，作用机制与当归饮子“疏泄”药组和“润泽”药组的配伍结构密切相关，体现出中医经典方剂当归饮子的组方特点和配伍的科学性。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。