血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2与慢性乙型病毒性肝炎患者HBV-DNA载量、肝功能及肝纤维化标志物的相关性分析

刘俊香，毕泗朕

1.山东省滨州市中医医院检验科，山东滨州 256600；2.山东省济南市平阴县中医医院检验科，山东济南 250400

慢性乙型病毒性肝炎(CHB)主要是指因乙型肝炎病毒(HBV)感染引发的一种慢性感染性肝病，如不予以及时、有效的治疗，可能进展成肝纤维化，最终导致肝硬化甚至肝癌的发生[1-2]。HBV-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量、肝功能及肝纤维化标志物均是目前临床上用来诊断CHB以及评估病情严重程度的重要指标[3-4]。然而，HBV-DNA载量检查费用较高，肝功能指标则存在特异度及灵敏度不高的缺陷，肝纤维化标志物无法对CHB实施早期诊断。因此，寻求更为经济、可靠的生物学指标实现对CHB病情的评估以及肝纤维化的判定具有极其重要的意义。高尔基体蛋白73(GP73)是广泛存在于高尔基体的跨膜蛋白之一，与肝癌的发生密切相关[5-6]。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种具备免疫调控功能的细胞因子，可用来评估肝脏损伤程度[7-8]。纤维蛋白原样蛋白1(FLP1)属于特异性促肝增殖因子之一，在肝细胞增殖以及肝保护过程中起着至关重要的作用[9-10]。可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)可通过与白细胞介素(IL)-33结合，继而介导系统性炎症反应[11-12]。鉴于此，本文通过研究血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2与CHB患者HBV-DNA载量、肝功能及肝纤维化标志物的相关性，旨在为临床诊断提供数据支持，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择滨州市中医医院2021年2月至2022年2月收治的166例CHB患者为研究对象。CHB患者中男104例，女62例；年龄34～78岁，平均(58.32±10.57)岁；病程1～16年，平均(6.12±1.30)年；体质量指数19～32 kg/m2，平均(23.19±2.10)kg/m2。纳入标准：(1)所有患者的诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南：2010年版》[13]中所制定的相关诊断标准；(2)入组前12个月内未接受抗炎或(和)免疫抑制剂治疗；(3)年龄18～80岁。排除标准：(1)心、肺等脏器功能严重障碍者；(2)神志异常或伴有精神疾病者；(3)合并器质性疾病者；(4)正参与其他研究者；(5)丙型或丁型病毒性肝炎者；(6)合并血液系统疾病、免疫系统疾病或恶性肿瘤者；(7)伴有可能对本研究结果产生影响的疾病者。另选取同期健康体检人员60例作为健康对照组。健康对照组中男36例，女24例；年龄33～78岁，平均(58.41±10.62)岁。本研究所有受试者均已签署知情同意书，滨州市中医医院医学伦理委员会已批准本研究。

1.2方法 (1)HBV-DNA载量检测：采集所有CHB患者的空腹静脉血5 mL，进行离心处理(离心半径10 cm，离心速率为3 000 r/min，离心10 min)，获取血清保存备用。检测方式为聚合酶链反应(PCR)结合荧光探针的体外扩增技术，首先进行DNA的提取，随后遵循试剂盒说明书完成相关操作。相关试剂盒购自广州中山大学达安基因股份有限公司。其中上游引物序列为5′-ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT-3′，下游引物序列为5′-ACAGTGGGGAAAGCCCTACGAA-3′；探针引物序列：5′-TGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTG-3′。将所有患者根据HBV-DNA载量的差异分成低载量组(HBV-DNA载量≤105copy/mL)、中载量组(HBV-DNA载量在>105～107copy/mL)、高载量组(HBV-DNA载量>107copy/mL)。(2)血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2检测：分别于所有患者入院后翌日、健康体检人员体检当日采集清晨空腹静脉血4 mL，离心处理(离心半径10 cm，离心速率为3 000 r/min，离心10 min)后，获取血清保存至-80 ℃冰箱中备用待检。GP73、HMGB1、FLP1、sST2检测方法均为酶联免疫吸附试验，按照试剂盒说明书进行操作，相关试剂盒购自美国Bio Rad公司。(3)肝功能检测：相关指标有丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及γ-谷氨酰转移酶(GGT)，采用全自动生化分析仪完成检测。(4)肝纤维化标志物检测：相关指标有透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(CⅣ)，检测方法均为放射免疫法，按照试剂盒说明书进行操作，相关试剂盒由北京泰格科信生物有限公司提供。

2 结 果

2.1各组血清GP73、HMGB1、FLP1以及sST2水平对比 根据HBV-DNA载量的差异将所有患者分为低载量组76例、中载量组50例、高载量组40例。低载量组、中载量组、高载量组血清GP73、HMGB1及sST2水平均高于健康对照组，且中载量组、高载量组血清GP73、HMGB1及sST2水平高于低载量组，高载量组血清GP73、HMGB1及sST2水平高于中载量组，差异均有统计学有意义(P<0.05)。低载量组、中载量组、高载量组血清FLP1水平均低于健康对照组，且中载量组、高载量组血清FLP1水平低于低载量组，高载量组血清FLP1水平低于中载量组，差异均有统计学有意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组血清GP73、HMGB1、FLP1以及sST2水平对比

2.2不同HBV-DNA载量组肝功能指标水平比较 中载量组、高载量组ALT、AST及GGT水平均高于低载量组，且高载量组ALT、AST及GGT水平高于中载量组，差异均有统计学有意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同HBV-DNA载量组肝功能指标水平对比

2.3不同HBV-DNA载量组HA、LN以及CⅣ水平对比 中载量组、高载量组HA、LN以及CⅣ水平均高于低载量组，且高载量组HA、LN以及CⅣ水平高于中载量组，差异均有统计学有意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同HBV-DNA载量组HA、LN以及CⅣ水平对比

2.4血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2与CHB患者HBV-DNA载量、肝功能指标及肝纤维化标志物的相关性分析 经Spearman/Pearson相关性分析可得：血清GP73、HMGB1、sST2与CHB患者HBV-DNA载量、ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ水平均呈正相关(r>0，P<0.05)，而血清FLP1与CHB患者HBV-DNA载量、ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ水平呈负相关(r<0，P<0.05)。见表4。

表4 血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2与CHB患者HBV-DNA载量、肝功能指标及肝纤维化标志物的相关性分析

3 讨 论

HBV-DNA载量检测是目前临床应用较为广泛的评价病毒复制活跃程度的指标之一，亦是CHB患者治疗适应证以及评估疗效的指标[14-16]。然而，该指标存在一定的局限性，加上部分患者出现HBV突变，从而难以获得真实的病毒复制情况，降低了病毒载量检查的特异度以及准确度[17-18]。因此，寻求一种更为准确、特异的无创性血清学标志物显得尤为重要，亦是临床研究的热点。这在针对有明显肝纤维化的CHB患者实施抗病毒治疗中至关重要[19-20]，亦是减缓病情发展以及降低相关并发症发生风险的关键，因此寻求可准确反映肝纤维化程度的生化指标具有极其重要的意义。

本文结果发现，CHB患者血清GP73、HMGB1、sST2水平均呈异常高表达，而FLP1水平呈异常低表达，且随着HBV-DNA载量的增加，上述各项指标水平升高或降低。GP73主要是由400个氨基酸构成的相对分子质量约为73×103的Ⅱ型跨膜糖蛋白，正常情况下存在高尔基复合体上，且在正常肝脏中仅在胆管上皮细胞中表达，在肝脏发生损伤时，肝脏细胞和血清中的GP73水平异常升高[21-22]。HMGB1通路在机体内炎症反应过程中具有促进炎症反应的作用[23-24]。FLP1属于肝源性生长因子之一，可促进正常肝细胞增殖，在机体内往往以同源二聚体的形式发挥自身局部促肝细胞增殖的活性[25-26]。sST2属于白细胞介素(IL)-33的重要受体，在HBV感染时IL-33会被释放至细胞外，继而导致IL-4及IL-13等大量细胞因子分泌，进一步引起Th1/Th2的失衡，从而引起炎症反应，加速肝脏功能损害[11,27]。其中侯丽娟等[28]的一项研究发现，血清sST2与CHB患者病情严重程度有关，这可为本研究结果提供佐证。此外，随着CHB患者HBV-DNA载量的增加，患者的肝功能损伤程度以及肝纤维化程度加剧。分析其原因，HBV-DNA载量的增加往往反映了病毒复制程度的加剧，患者长期处于持续感染状态之下，肝组织炎症程度增加，继而促进了病情进展[29]。随着HBV-DNA载量的增加，CHB患者ALT、AST及GGT水平逐渐升高。分析其原因，可能是ALT、AST及GGT均是临床上反映肝功能的生物学指标，随着HBV-DNA载量的增加，肝脏受损程度加剧，继而导致ALT、AST及GGT表达异常。与此同时，随着HBV-DNA载量的增加，CHB患者肝纤维化程度加剧，这可能和HBV-DNA载量越高其活性越强有关，继而对肝脏造成持续损害，促进了肝纤维化。另外，经Spearman/Pearson相关分析可得：血清GP73、HMGB1、sST2与ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ均呈正相关，而血清FLP1和上述相关指标呈负相关。这提示了血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2可辅助评估CHB患者肝功能以及肝纤维化，同时也说明这4项指标在CHB患者病情发展过程中起着至关重要的作用。其中GP73、HMGB1、sST2均有一定的促进病情进展的作用，随着其水平的升高，会加重HBV对肝功能的损害；而FLP1具有肝保护作用，可通过自分泌途径刺激肝细胞增殖，因此在肝脏再生过程中其水平升高。由此推测，实际工作中可通过对血清GP73、HMGB1、sST2及FLP1水平进行联合检测，从而为CHB的诊断和病情判定提供参考依据。

综上所述，CHB患者血清GP73、HMGB1、sST2水平均呈异常高表达，而FLP1水平呈异常低表达，且这4项血清学指标可有效评估CHB患者的HBV-DNA载量、肝功能和肝纤维化，继而指导临床CHB患者治疗方案的制订以及实施，从而达到改善CHB患者预后的目的。