盐酸二甲双胍片体外溶出一致性评价

房 静，李志万

(1.天津生物工程职业技术学院，天津 300462；2.天津药业研究院股份有限公司,天津 300384)

降糖药盐酸二甲双胍，最初由百时美施贵宝开发，于1957年在法国首次上市，并将“格华止”作为其商品名。在此后的60余年里，二甲双胍始终作为治疗Ⅱ型糖尿病的经典用药。随着研究的不断深入，后续又研发出多种二甲双胍复方制剂，并在糖尿病的临床治疗上发挥着确切疗效。同时，二甲双胍还有一系列其他的治疗作用，如抗癌细胞增殖、改善记忆障碍、治疗DENV等[1-3]。20世纪90年代二甲双胍开始国产，目前国内厂家众多，有100多个批号，但产品质量参差不齐。本文建立了二甲双胍的体外溶出测定方法，采用 f2 相似因子法考察了自制盐酸二甲双胍片于参比制剂在不同 pH值溶出介质中的溶出行为，评价了二者的体外溶出一致性。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LC-10AT型 、LC-2010A型、LC-20A型高效液相色谱仪(均为日本岛津)；Shimadzu LC solution色谱工作站(日本岛津)；Thermo BioBasic SCX 250×φ4.6 mm 色谱柱(Welch vitimate)，4.6 mm×150 mm 的C18硅胶柱，5 μm；RD12AD溶出仪(天大天发);Tision®Elite 8 TM溶出仪(美国Hanson);UV-2401紫外分光光度计(日本岛津)； AE240电子天平(梅特勒-托利)；PHS-3E pH酸度计(上海奥豪斯)

1.2 材料

磷酸二氢铵、磷酸(分析纯，天津市风船化学试剂)，十二烷基硫酸钠(化学纯，天津市永大化学试剂)，乙腈(色谱纯，天津市康科德科)，盐酸二甲双胍仿制片(规格：250 mg，天津康瑞药业有限公司提供)，纯化水，盐酸二甲双胍片参比制剂(规格：250 mg，日本新药株式会社)。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

对照品溶液制备：取盐酸二甲双胍的对照品，精密称定后，用溶出介质溶解并定量稀释制成 30 μg/mL 的溶液。

供试品溶液制备:取自制片，按照制定的溶出方法，经 15 min 后，取适量溶液，过滤，弃去初滤液 10 mL,精密量取续滤液适量，定量稀释制成 5 μg/mL 的溶液。

空白溶液制备:取不同 pH 值溶出介质的相应样品溶液作为空白溶液。

2.2 溶出条件选择

2.2.1 测定方法选择

参考日本橙皮书《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》中盐酸二甲双胍片的溶出度方法和中国药典2020版中盐酸二甲双胍片项下溶出度的方法，结合本品的特点进行方法学试验。

任取各批片剂12片，取溶出介质 1000 mL，设转速为 50 r/min，依法操作，经5、10、15、20、30、45 min 分别取样 10 mL，过滤，取续滤液备用，同时向溶出杯中补充 10 mL 溶剂。精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释制成 5 μg/mL 的溶液，采用紫外-可见分光光度法，在 233 nm 的波长处测定吸光度；另取对照品，精密称定，加溶出介质制成 5 μg/mL 的溶液，同法测定，计算每片在各点溶出量[4-6]。

2.2.2 溶出方法选择

对比《中国药典》2020年版溶出度与释放度测定的第一法和第二法，采用 1000 mL pH4.0 醋酸缓冲液为溶出介质，转速：桨法 50 r/min，篮法 100 r/min。取样点为:5、10、15、30 min;篮法和浆法在各取样点的溶出度分别如表1所示。参考上述结果，同时考虑参比制剂也是采用桨法，所以采用桨法能更好地控制质量[5-7]。

表1 不同溶出方法的释放度测定结果 %

2.2.3 溶出介质的选择

参考日本溶出度橙皮书中的方法，分别以盐酸溶液(pH1.2)、醋酸盐缓冲液(pH4.0)、磷酸盐缓冲液(pH6.8)，以及水为介质进行比较，转速设为 50 r/min，溶剂 1000 mL 进行试验。结果见表2。

表2 4种不同pH介质中的溶出度测定结果 %

综上，4种溶出介质都可以在 15 min 达到溶出度在85%以上，故采用检测成本比较低的水比较合适。

2.3 方法学考察

线性关系考察:以pH4.0、pH6.8两种缓冲液和水为溶出介质，称取对照品约 5 mg，置于 100 mL 容量瓶中，超声溶解稀释摇匀得对照品溶液。分别量取1、1、1、1、2 mL 溶液至100、50、25、10、10 mL 的容量瓶中，加溶出介质稀释定容，在 233 nm 紫外测定，记录谱图，以样品的质量浓度为横坐标(X，μg/mL)，峰面积为纵坐标(Y)做线性回归，分别得到回归方程Y=0.078X-0.004，r=0.9995(n=5)，Y=0.080x+0.003，R=0.9995(n=5)和Y=0.080X+0.005，r=0.9995。结果表明，在0.553～11.06 μg/mL 之间，盐酸二甲双胍的质量浓度与峰面积二者之间线性关系良好。

当溶出介质为pH1.2盐酸缓冲液时，称取对照品约 10 mg，置 100 mL 容量瓶中，制成对照品溶液。分别量取1、1、1、3、5 mL 至100、25、10、10、10 mL 的容量瓶中，同法操作，得到回归方程为Y=0.017X+0.009，r=0.9995(n=5)。由结果可知，在1.099～54.95 μg/mL 之间，盐酸二甲双胍质量浓度与峰面积二者之间线性关系良好。

2.4 稳定性试验

分别以水、pH1.2、pH4.0、pH6.8的4种溶出介质，取溶出度测定项下的样品溶液分别放置 24 h，定时取样测定，RSD分别为0.38%、0.326%、0.99%和1.16%。由结果可知，溶液在 24 h 内稳定。

2.5 加样回收试验

精密称取质量62.5、100和 125 mg 的原料(标示量50%、80%和100%)，分别置于 500 mL 容量瓶之中，加入 18 mg 处方辅料药，加水超声溶解并稀释摇匀、滤过，精密量取续滤液 1 mL 置 50 mL 的容量瓶之中稀释摇匀，经 0.45 μm 滤膜过滤，233 nm 紫外测定。在四种溶出介质中测得的回收率(RSD)分别为99.70%(0.79%)、99.32%(0.36%)、100.17%(0.50%)、100.22%(0.92%)，表明该方法回收率符合要求。

2. 6 溶出一致性评价

仿制和原研药溶出曲线相似性的比较本文采用相似因子(f2)法。将两者平均溶出量与进行比较，当f2值高于50，或受试与参比制剂在 15 min 内的溶出量≥85%时，可判定为两者溶出行为相似。平均溶出量为12片(粒)的均值，结果如表3所示。

表3 仿制制剂与参比制剂溶出曲线相似性比较结果

从表3可知，在4种不同pH值溶出介质中，三批次仿制片与参比制剂的溶出量RSD在第一个取样时间点均≤20%，在其余取样时间点均≤10%，且两者在 15 min 内的溶出量均≥85%，可以做出两者溶出行为相似的判断，两者具有体外溶出曲线一致性[10-12]。4种溶出介质中的溶出曲线比较如图1所示。

图1 仿制制剂和原研制剂在4种溶出介质中的溶出曲线

2.7 有关物质检查

有关物质的测定根据中国药典2020版盐酸二甲双胍片项下关物质的色谱条件和系统适应性试验进行。利用高效液相色谱法分别测定三批参比制剂及自制制剂的有关物质，结果如表4。表4表明，有关物质测定结果符合规定，其分离度和理论塔板数均能达到要求[13-15]。

表4 盐酸二甲双胍仿制药与原研药有关物质含量测定结果

2.8 含量测定

参考日本药局方2017版盐酸二甲双胍项下含量测定的方法，采用HPLC法对样品进行含量测定。测定结果如表5所示，均符合质量标准的要求。

表5 含量测定结果

3 结论

溶出曲线的相似性并不能代表仿制与原研药之间一定生物等效，但能降低临床疗效差异出现的风险，为二甲双胍片的安全性、有效性提供一定保证。本文选择了3批原研盐酸二甲双胍片和三批仿制片， 在pH1.2、pH4.0、pH 6.8和水4种不同溶出介质进行溶出试验，并考察建立适合的溶出曲线测定方法，从相似性评价结果得出，仿制药盐酸二甲双胍片样品(0.25 g)与日本新药株式会社生产的盐酸二甲双胍片(250 mg)具有体外质量一致性。