大麻哈鱼苗耳石标记技术研究

◎ 文/李娜 王雅倩 杨春桥 潘发林 张嘉祺

为提高大麻哈鱼标记质量，减少对鱼苗的伤害，降低标记成本，本团队研究并实践了一种方法简单、全标记、无伤害的大麻哈鱼标记技术，即通过控制水温变化，可以使大麻哈鱼耳石部位产生轮纹，根据2种水温作用时间的不同，形成的纹距不同，可以产生不同标记轮，从而达到精确判定该标记鱼苗的归属。连续三年对放流大麻哈鱼苗进行不同号段的耳石温度标记，每年随机抽取标记鱼苗进行采样检测，结果表明放流大麻哈鱼耳石温度标记率为100%。

大麻哈鱼是吉林省著名的土著鱼类，近些年由于图们江流域鱼类天然产卵场生态环境被破坏、洄游通道被水电设施和漂流项目阻断、渔政执法难度大等多种原因，导致大麻哈鱼资源急剧减少。为了保护和恢复大麻哈鱼野生资源，吉林省渔业部门每年坚持在密江和图们江两地放流大麻哈鱼苗。增殖放流时，常以剪掉脂鳍或剪掉一部分尾鳍来标记，数百万尾鱼苗标记操作难度大、成本高，难以规模化，标记率仅为5%。此外，在操作过程中鱼苗死亡率高，还会影响其入海后正常生长。

为提高大麻哈鱼标记质量，减少对鱼苗的伤害，降低标记成本，团队从2019年开始一直致力于研究出操作简单、全标记、无伤害的标记技术。经过两年试验，团队发现在大麻哈鱼发眼卵阶段，通过温度变化，可以使全部鱼苗在耳石部位产生日轮，且不同温度、不同作用时间下，形成的纹距也不相同，即可以产生亿到千亿个不同标记轮组，从而精确判定鱼苗的归属。耳石温度标记不会对大麻哈鱼苗造成任何伤害，不影响大麻哈鱼入海生长，此标记终生携带，并随时可用于鉴定该鱼的归属，有助于提高大麻哈鱼标记率及为人工增殖放流后评价工作提供技术保障。

一、人工繁殖放流鱼

大麻哈鱼一生中产卵一次，产卵后便死亡。其对产卵场的条件要求极高，要水质澄清、环境僻静、水流较急，水温4℃～7℃，底质为沙砾，产卵期为10月下旬至11月中旬，产卵后2个～3个月，亲鱼绝大多数死亡。幼鱼出生后，在淡水生活一段时间，然后降海生活。

（一）亲鱼

大麻哈鱼在海水中生活2年～3年后，达到性成熟时，为了繁殖后代，进入江河，上溯到产卵场生殖。秋季可从北太平洋洄游至图们江流域。团队挑选体质健壮、无病、无伤、无畸形的成熟个体，雌鱼体重2.5kg～3kg，雄鱼3kg～4kg，然后在面积50m2～80m2，水深0.6m水泥池中人工培育至性腺完全成熟。雌雄混养在流动的淡水中，水温控制在10℃以下，产卵前12h将雄鱼放入网兜中分开养殖，整个养殖期间不需要投喂。

（二）催产孵化

每隔6d～8d鉴别一次成熟度，一般在11月初，可以观察到雌鱼的腹部膨大柔软，生殖孔红肿外突，雄鱼用手轻压腹部有入水即散的白色精液流出，此时开始催产。从雌鱼中选出5条～6条，用手轻揉腹部，将圆而饱满、有弹性的粉红色卵粒挤出，放至同一干燥的不带孔的受精盆中。再挑选1条～2条雄鱼，轻压腹部，将流出浓稠的乳白色精液挤入同一受精盆中，用手沿着一个方向轻轻地快速均匀搅拌10s～30s，使卵子与精子充分接触，倒入清水，快速清洗2遍～3遍，放置阴暗处静止8min～10min。确认精子完全失去受精能力后，用清水将多余的精液及污物、卵皮漂洗干净，之后将受精卵放入槽式孵化器中流水孵化。控制孵化水温不超过4℃，冰水混合物为宜，定期对受精卵孵化环境进行管理，及时将死卵、未受精卵拣出，保证流水水质，随着孵化时间的延长，逐渐加大进水量，至发眼卵阶段。

二、耳石温度标记

待大麻哈鱼受精卵至鱼发眼卵阶段，根据北太平洋洄游鱼类管理委员会（NPAFC）下发的耳石号段，一周后开始进行耳石温度标记，2021年标记的号段为3,7H。利用井水和天然河水及冰水混合物所形成的温度差调控水温，先后尝试12h、24h两种不同的流水刺激时间。研究发现高低温度差大于4℃，连续标记24h时可以形成标记轮纹。2021年标记号段3,7H的具体操作记录见表1。

表1 2021年珲春密江放流站耳石标记记录

三、耳石摘取与检测

待放流大麻哈鱼卵生长至仔鱼期，随机选取鱼苗并及时在解剖镜下摘取耳石。耳石位于大麻哈鱼下头骨的两侧，由于仔鱼期微耳石、星耳石未发育或太小，团队一般摘取矢耳石一对。摘取后的耳石用超声波或离心机在纯净水中进行清理，去除杂质。清洗后的耳石在自然条件下阴干，再用树脂胶将其封片，并用紫外线灯照射10s，使其凝固在载玻片上。利用240目、600目、2500目、4000目等四种不同目数的砂纸轻轻研磨，直至在显微镜下可以清晰地观察到标记的号段，再利用抛光剂进行抛光处理，使研磨后的耳石标记轮更加清晰，将得到的耳石切片图片发送给北太平洋洄游鱼类委员会指定的耳石号段发放机构——美国渔猎部阿拉斯加实验室，得到确认。团队连续三年对放流大麻哈鱼苗进行不同号段的耳石温度标记，每年随机抽取标记鱼苗进行采样检测，结果表明放流大麻哈鱼耳石温度标记率为100%。

四、小结

在大麻哈鱼发眼卵一周后进行耳石温度标记。利用天然的河水和井水建立两种管道水，根据要标记的号段定时控制流入的水，期间也可利用冰水混合物，确保水温度差在4℃以上。如要形成等宽的标记日轮，需要先打开河水管道开关标记24h，再打开井水管道标记24h，根据标记天数形成等宽标记轮。如要间隔一段时间不进行标记，则需要延长一种水的标记时间。耳石主要成分为碳酸钙，标记后的大麻哈鱼鱼苗在进行耳石摘取前，不可保存在福尔马林溶液中，一般冷冻保存或放置于70%的酒精溶液中，以备后期研磨使用。大麻哈鱼仔鱼期耳石较小，在解剖镜下进行耳石摘取与研磨非常难。本研究摘取的是一对矢耳石，在研磨时要缓慢细磨，受力均匀，边磨边观察，确保得到一个平面，以便能清晰观察到耳石轮纹。

从2020年开始，团队将耳石温度标记的大麻哈鱼苗在密江、图们江流域开展增殖放流活动。鱼苗经过权威检测机构抽样检测合格后，用充氧袋装取鱼苗运输至放流站，整个放流过程中，由渔政及公证人员进行监督监管。当地政府积极宣传大麻哈鱼的生物学特征及经济价值，鼓励当地老百姓参与增殖放流活动，提高群众保护大麻哈鱼及其生存环境的意识。

目前大麻哈鱼由国际组织北太平洋洄游鱼类管理委员会（NPAFC）进行管理，成员国包括加拿大、美国、俄罗斯、韩国和日本。北太平洋洄游鱼类管理委员会每年给各成员国放流机构分配不同的标记方式，称之为号段（code），以标记数量、位置、宽度进行区别，并通过检查鱼耳石标记查验每个国家增殖放流比例，来确定捕捞配额。我国一直没有大麻哈鱼捕捞配额，希望通过实践并推广耳石温度标记放流大麻哈鱼技术，能有助于推动我国加入北太平洋洄游鱼类管理委员会，获得北太平洋捕捞配额。