不同澄清剂对调脏舒秘合剂澄清度的影响*

范润勇，徐 伟，蒲立立，张 明，钟佰明，周 茜

（四川省南充市中医医院，四川 南充 637000）

合剂作为医疗机构中药制剂常用剂型，临床疗效确切，使用人数多，服用方便，但合剂中常含有鞣质、淀粉、蛋白质等大分子物质，沉淀多、溶液浑浊，其澄清度不佳［1］，同时鞣质常与蛋白质、生物碱、多糖形成氢键生成不溶于水的沉淀，导致药液浑浊［2］。据报道，壳聚糖［3-6］，101 果汁澄清剂、ZTC1 + 1 天然澄清剂及壳聚糖［7］，明胶和壳聚糖复配絮凝剂［8］，KBT - ZTC 澄清剂［9］均可作为合剂的澄清剂。调脏舒秘合剂为我院肛肠科范艺缤主任基于五脏同调法治疗慢传输型便秘的临床经验方，临床疗效较好，由柏子仁、白术、白芍、肉苁蓉、瓜蒌皮、瓜蒌子、枳实、当归、甘草等药味组方［10］。为改善调脏舒秘合剂的澄清度，提高产品质量，增强治疗依从性，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法测定调脏舒秘合剂中松果菊苷、芍药苷和阿魏酸的含量，采用紫外-可见分光光度（UV-Vis）法测定透光率，以表示澄清度，以熵权法确定松果菊苷、芍药苷、阿魏酸、透光率和固体总量的权重，根据权重对上述指标进行综合评分；查阅相关文献，筛选调脏舒秘合剂最佳的澄清剂，比较吐温80、海藻酸钠、活性炭、明胶、壳聚糖、无水硫酸钠、硅藻土、101 果汁澄清剂、ZTC1 + 1 天然澄清剂、琼脂等澄清剂的澄清度，为解决医疗机构中药制剂合剂澄清度问题提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Ultimate 3000型高效液相色谱仪（美国赛默飞世尔科技公司），配有WPS - 3000TSL 型进样器，LPG -34000SDN 型四元泵，TCC - 3000SD 型柱温箱，VWD -3100 型检测器；AUW220D 型分析天平（日本岛津公司，精度为十万分之一）；FA2004 型分析天平（上海力辰科技仪器有限公司，精度为万分之一）；TU-1901 型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；G-100S型超声波清洗器（深圳市歌能清洗设备有限公司，功率为500 W，频率为40 kHz）；RE-1102 型旋转蒸发仪（上海嘉鹏科技有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水真空泵（上海力辰科技仪器有限公司）；SYG-4型数显恒温水浴锅（常州朗越仪器厂）；WGL-45B型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；LCK2000型煎药机（天津三延精密机械有限公司）。

1.2 试药

松果菊苷对照品（批号为111670-201907，纯度为91.8%），芍药苷对照品（批号为110736-202044，纯度为96.8%），阿魏酸对照品（批号为110773-201915，纯度为99.4%），均购自中国食品药品检定研究院；柏子仁（批号为200401），白术（批号为200501），白芍（批号为200501），枳实（批号为200101），瓜蒌子（批号为191201），瓜蒌皮（批号为200201），肉苁蓉（批号为200201），当归（批号为200501），甘草（批号为200401），均购自成都吉安康药业有限公司，经南充市中医医院张德明中药师鉴定均为正品；海藻酸钠（上海埃彼化学试剂有限公司，批号为F20180515）；活性炭（批号为20210705），琼脂粉（批号为20211027），均购自福晨（天津）化学试剂有限公司；明胶（天津市登峰化学试剂厂，批号为20211001）；无水硫酸钠（批号为2015011201），硅藻土（批号为2016110801），均购自成都市科龙化工试剂厂；无水乙醇（成都市科隆化学品有限公司，批号为2021093002）；壳聚糖（恒鑫生物科技有限公司，批号为 20211112）；ZTC1 + 1 天 然 澄 清 剂（批 号 为20210820），101果汁澄清剂（批号为20210820），均购自四川世纪之星生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，水为怡宝纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈 - 0.2%磷酸溶液（20∶80，V/V）；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：5µL。理论板数按阿魏酸峰计应不低于5 000，分离度应不小于1.5，拖尾因子应在0.95～1.05 间，含量测定中灵敏度的信噪比应不低于43。

2.2 溶液制备

将调脏舒秘合剂每付处方加8 倍量水，提取2 次，每次1 h，最终将药液浓缩至1 000 mL，精密量取调脏舒秘合剂样品溶液1.0 mL，置5 mL容量瓶中，加水稀释并定容，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45µm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

取松果菊苷、芍药苷、阿魏酸对照品各适量，精密称定，加50%甲醇溶液超声使溶解，分别制成每1 mL含496.1，105.6，100.2 µg的对照品溶液。

分别精密量取上述松果菊苷、芍药苷、阿魏酸对照品溶液，按 1∶10∶1（m/m/m）混合，即得混合对照品溶液。

按处方工艺称取缺肉苁蓉、白芍、当归的调脏舒秘合剂，制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制备缺肉苁蓉、白芍、当归的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别取2.2 项下供试品溶液，松果菊苷、芍药苷、阿魏酸混合对照品溶液和阴性对照品溶液各5µL，按2.1 项下色谱条件进样测定，供试品溶液色谱中相同保留时间处与混合对照品溶液有对应峰，且阴性对照无干扰，表明方法专属性强。色谱图见图1。

图1 专属性试验高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of the specific test

线性关系考察：分别精密量取系列质量浓度的松果菊苷、芍药苷、阿魏酸对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以峰面积积分值（Y）为纵坐标、进样量（X，µg）为横坐标进行线性回归。结果见表1。

表1 线性关系考察结果Tab.1 Results of the linear relation test

精密度试验：取2.2 项下混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样测定6 次。结果松果菊苷、芍药苷和阿魏酸色谱峰峰面积的RSD分别为1.45%，1.01%，0.88%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，12，24 h 时按2.1 项下色谱条件进样测定。结果松果菊苷、芍药苷和阿魏酸色谱峰峰面积的RSD分别为2.56%，1.08%，0.57%（n=6），表明供试品溶液24 h 内稳定性良好。

重复性试验：按处方称取药材，按供试品溶液制备方法平行制备供试品溶液6 份，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果松果菊苷、芍药苷和阿魏酸色谱峰峰面积的RSD分别为3.00%，1.94%，2.91%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取已知含量的样品6 份，每份1 mL，依法制备供试品溶液，精密加入混合对照品溶液1 mL，按2.1 项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果松果菊苷、芍药苷、阿魏酸的平均加样回收率分 别 为 97.56%，99.52%，101.30%，RSD分 别 为1.54%，2.03%，1.40%（n=6），表明方法准确度良好。

2.4 固体总量测定

按2020 年版《中国药典（四部）》通则3101 固体总量测定法［11］测定调脏舒秘合剂的固体总量。

2.5 澄清方式选择

根据前期预试验，对比静置、离心和加入澄清剂3种方式调脏舒秘合剂的澄清效果，以芍药苷、固体总量和澄清度为指标。结果最佳澄清方式为加入澄清剂。

2.6 澄清度测定［12-13］

透光率表示光透过透明或半透明的光通量与其入射光通量的百分率。影响透光率的主要原因为溶液中溶质对光的吸收作用和溶液中悬浮颗粒对光的折射作用。当保证溶液中溶质浓度相同情况下，相同温度的透光率反映溶液中悬浮颗粒的多少，透光率越低，悬浮颗粒越多，澄清度越低。因此，通过紫外可见分光光度计测定透光率可间接反映溶液的澄清度，本研究中于190～900 nm 全波长范围扫描，最终确定透光率的检测波长为850 nm。相对透光率计算公式见式（1）。

稀释X倍后，相对透光率计算公式见式（2）。

式中，T相对表示相对透光率，T供试表示供试品溶液的透光率，T样品对照表示供试品对照溶液（供试品溶液经澄清处理后）的透光率。

2.7 熵权法确定权重［14-22］

信息熵是系统不确定性和无序程度的度量，除度量数据包含的信息量，还可用于在多指标评价系统中确定各指标权重。将每个评价指标作为1 个随机变量，计算该指标的熵权系数。取值变异程度越大越无序，提供的信息量越多，该指标越重要；反之则越不重要。计算步骤如下。

1）原始数据矩阵归一化，建立原始评价指标矩阵

设m个评价指标、n个评价对象的原始数据矩阵为A=（aij）mn，对其归一化后得到R=（Xij）mn，

对于大者为优的指标，按式（3）进行归一化。

式中，Xij表示第i次试验时在第j个评价指标的取值，i=1，2，3，…，m；j=1，2，3，…，n。

2）将原始数据矩阵（Xij）mn转换为概率矩阵（Pij）mn

信息熵公式中，Pi为某个信息的概率，满足0 ≤Pi≤ 1，必须先对矩阵（Xij）mn做归一化处理，经处理后的矩阵可视为指标的概率矩阵。计算公式见式（4）。

式中，Pij表示第j次试验在第i个评价指标下的概率。

松果菊苷、芍药苷、阿魏酸、固体总量、透光率的P矩阵如下。

3）计算信息熵（Hi）

按式（5）确定第i个评价指标的Hi，结果见表2。

表2 相关评价指标信息熵和熵权系数计算结果Tab.2 Results of information entropy and entropy-weight coefficient calculation of relevant evaluation indicators

4）计算熵权系数（Wj）

按式（6）计算Wj，结果见表2。

可知，当Hi越小，Wj越大，即当Xij相差越大，传递的信息量越多，作用越大，权重越大。

2.8 澄清工艺考察

将调脏舒秘合剂每付处方加8 倍量水，提取2 次，每次1 h，最终将药液浓缩至1 000 mL。按调脏舒秘合剂煎煮方法，煎煮13 付，备用。澄清工艺考察方法有13种，考察结果见表3。可知，加入澄清剂后，不会影响药液的有效成分含量，只是对澄清度有一定影响。采用熵权法确定了松果菊苷、芍药苷、阿魏酸成分含量和固体总量、澄清度等5 个指标的权重，并进行综合评分。ZTC1+1天然澄清剂澄清效果最佳，其次是海藻酸钠和琼脂。根据筛选出的最佳澄清剂，按ZTC1+1 天然澄清剂方法进行重复性试验。结果ZTC1 + 1 天然澄清剂的效果较好，表明稳定性较好。

表3 澄清工艺考察结果（n=4）Tab.3 Results of investigation on the clarifying process（n=4）

3 讨论

医疗机构中药制剂合剂多采用煎煮方法进行提取，但药液体积大、杂质多、沉淀多。随着科学技术的发展，水提醇沉技术［23］、微滤［24］、超滤［25］、纳滤、反渗透等膜分离技术［26-27］、高速离心技术、超临界流体萃取技术、大孔树脂吸附技术［28］等常用于中药水提液的精制工艺中。但水提醇沉法成本高、乙醇回收难、耗醇量大、生产周期长，故不作为大批量生产除去沉淀的方法。同时，膜分离技术、高速离心技术、超临界流体萃取技术、大孔树脂吸附技术等耗材成本高或对设备要求高，不适宜用于医疗机构中药制剂的纯化。澄清剂改善医疗机构中药制剂澄清度效果较好，成本较低，工艺简单、稳定，且可工业化用于生产。

中药提取液中加入吸附澄清剂，利用絮凝和凝聚的作用，除去中药提取液中的杂质，使提取液变得澄清［29］。本研究中所用吸附澄清剂主要为有机絮凝剂和无机凝聚剂，常用于药物与食品的澄清。参考文献［30-34］，选用了吐温80、海藻酸钠、活性炭、明胶、壳聚糖、无水硫酸钠（无机凝聚剂）、硅藻土（无机凝聚剂）、101 果汁澄清剂、ZTC1+1天然澄清剂、琼脂10种澄清剂。由表3可知，加入天然澄清剂的澄清效果优于静置法、离心法和水提醇沉法，有机絮凝剂的澄清效果总体比无机凝聚剂好，并筛选出调脏舒秘合剂的最佳澄清剂为ZTC1+1天然澄清剂。

本研究中采用HPLC 法、UV-Vis 法结合熵权法筛选ZTC1 + 1 天然澄清剂为调脏舒秘合剂的最佳澄清剂，不影响药液有效成分含量，且操作简单可重复，可作为解决医疗机构中药制剂合剂澄清度的方法。采用单因素法对比了不同澄清剂对调脏舒秘合剂澄清度的影响，参考文献确定澄清度的用量，后续试验将考察ZTC1 + 1 天然澄清剂最佳加入浓度，或采用正交试验法、响应面法对比多种澄清剂或每种澄清剂的使用浓度对澄清度的影响。