泡核桃青皮的化学成分研究

马明芳 李冬梅

大理大学药学院，云南 大理 671000

泡核桃(JuglanssigillateDode.)系胡桃科胡桃属植物，又名茶核桃(云南)、铁核桃。泡核桃青皮即为泡核桃的外表果皮，未成熟时包裹在果实核外，果实成熟后自然脱落[1-3]。胡桃属植物具有悠久的用药历史，具有补肾固精、温肺定喘、清热燥湿、清肠明目等功效[4]。据文献报道泡核桃青皮中含有黄酮类、萘醌类、二芳基庚烷类、萜类、鞣质类等多种化学成分[5-8]。目前对于泡核桃青皮的研究较少，课题组前期研究发现，泡核桃青皮70%甲醇提取物具有抗肿瘤活性，为了充分利用好当地的植物资源，促进泡核桃青皮药用价值的开发与利用，本文对产自大理州漾濞县的泡核桃青皮化学成分进行了研究，从泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位分离得到了8个化合物，分别鉴定为：β-谷甾醇 (1)、熊果酸 (2)、白桦酸 (3)、2α-羟基齐墩果酸 (4)、齐墩果酸 (5)、核桃酮(6)、4,5-二羟基-α-四氢萘醌 (7)、柚皮素 (8)。其中，化合物2～5首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

旋转蒸发仪 (BUCHI Rotavapor R210)；低温冷却循环泵 (巩义市予华仪器有限公司)；梅特勒万分之一电子分析天平；400MHz全数字化超导核磁共振谱仪 (AvanceIII400MHZ，瑞士BRUKER公司)；UV-2101紫外分光光度计 (日本岛津公司)；柱层析用硅胶 (80～100目，300～400目，硅胶H，青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶 (25～100μm, Pharmacia公司)；GF254薄层层析硅胶板 (青岛海洋化工厂)。实验所用试剂石油醚、丙酮、氯仿、甲醇、乙酸乙酯均为工业纯，经重蒸后使用。泡核桃青皮2019年9月采自大理州漾濞县，经大理大学药学院生药教研室张德全教授鉴定为胡桃科胡桃属植物泡核桃 (JuglanssigillataDode.)的青果皮，泡核桃青皮采集后经低温干燥供实验所用。

2 提取与分离

取干燥后的泡核桃青皮，粉碎，共3.8 kg，采用浸渍法进行提取(70% 甲醇浸泡提取3次，每次24 h)，提取液经减压浓缩后得到浸膏101.1g。浸膏用甲醇溶解，干法拌样，经硅胶柱层析 (80～100目)，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和甲醇洗脱并分别回收溶剂，其中氯仿萃取部位浸膏为18.5g。氯仿部位浸膏经硅胶 (80～100目)柱层析，石油醚-丙酮 (15∶1～1∶1)梯度洗脱，洗脱液经硅胶TLC检测后合并相似部分，得A～I共9个组分。其中B组分 (0.6 g)，经过反复硅胶柱层析 (石油醚:乙酸乙酯 = 15∶1～12∶1)，分离得到化合物1 (39.1 mg)。C组分(1.0 g)，经反复硅胶柱层析 (石油醚∶乙酸乙酯 = 12∶1～10∶1)， Sephadex LH-20凝胶柱层析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分离得到化合物2 (93.0 mg)。D组分(1.4g)，经反复硅胶柱层析 (石油醚∶乙酸乙酯=12∶1，10∶1)，Sephadex LH-20凝胶柱层析(氯仿∶甲醇 = 1∶1)，分离得到化合物3 (73.0 mg)和化合物4 (28.1 mg)。E组分(0.8 g)，经反复硅胶柱层析 (石油醚∶乙酸乙酯=10∶1～5∶1)、Sephadex LH-20凝胶柱层析(氯仿∶甲醇= 1∶1)，分离得到化合物5 (16.0 mg)和化合物6 (40.2mg)。F组分(1.8 g)，经反复硅胶柱层析 (石油醚∶乙酸乙酯=8∶1～5∶1)、Sephadex LH-20凝胶柱层析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分离得到化合物6 (160.5 mg)和化合物7 (24.0 mg)。G组分(1.5 g)，经反复硅胶柱层析 (氯仿∶甲醇 = 100∶1～40∶1)、Sephadex LH-20凝胶柱层析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分离得到化合物8 (24.3 mg)。

3 结果

3.1 结构鉴定

3.1.1 化合物1 白色针状结晶(石油醚-乙酸乙酯)。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.29 (1H, d,J=4.2 Hz, H-6), 3.55 (H, m, H-3), 0.92 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.86 (3H, s, H-29), 0.84 (3H, s, H-27), 0.82 (3H, s, H-26), 0.77 (3H, s, H-20);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 29.8 (C-1), 31.6 (C-2), 71.8 (C-3), 40.3 (C-4), 140.7 (C-5), 121.7 (C-6), 29.4 (C-7), 31.9 (C-8), 50.1 (C-9), 36.2 (C-10), 22.7 (C-11), 37.2 (C-12), 42.3 (C-13), 56.7 (C-14), 24.3 (C-15), 28.5 (C-16), 56.0 (C-17), 11.9 (C-18), 19.1 (C-19), 36.2 (C-20), 19.8 (C-21), 33.9 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.4 (C-26), 21.2 (C-27), 23.1 (C-28), 11.9 (C-29)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定化合物1为β-谷甾醇。

3.1.2 化合物2 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.10 (1H, brs, H-12), 3.32 (1H, m, H-3), 0.89 (3H, d,J=7.6 Hz, H-29), 0.80 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-30), 1.01 (3H, s), 0.90 (3H, s), 0.87 (3H, s), 0.82 (3H, s), 0.66 (3H, s);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 38.3 (C-1), 26.8 (C-2), 76.9 (C-3), 38.4 (C-4), 54.6 (C-5), 17.9 (C-6), 32.7 (C-7), 41.3 (C-8), 47.0 (C-9), 36.2 (C-10), 22.8 (C-11), 124.3 (C-12), 138.1 (C-13), 41.6 (C-14), 28.3 (C-15), 23.7 (C-16), 47.3 (C-17), 52.3 (C-18), 38.9 (C-19), 38.2 (C-20), 30.1 (C-21), 36.6 (C-22), 27.4 (C-23), 15.3 (C-24), 16.0 (C-25), 16.9 (C-26), 23.3 (C-27), 178.0 (C-28), 16.8 (C-29), 21.1 (C-30)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定化合物2为熊果酸。

3.1.3 化合物3 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ:12.1 (1H, s, 28-COOH), 4.69 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-29β), 4.56 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-29α), 3.37 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-3), 1.64 (3H, s, H-30), 0.93 (3H, s, H-27), 0.87 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-23), 0.65 (3H, s, H-24);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 177.7 (C-28), 150.7 (C-20), 110.1 (C-29), 77.2 (C-3), 55.9 (C-5), 55.3 (C-17), 50.4 (C-9), 49.0 (C-19), 47.1 (C-18), 42.4 (C-14), 40.7 (C-4), 39.8 (C-8), 39.0 (C-1), 38.7 (C-13), 38.0 (C-10), 37.2 (C-22), 34.4 (C-7), 32.2 (C-16), 30.5 (C-21), 29.7 (C-15), 28.6 (C-23), 27.6 (C-2), 25.5 (C-12), 20.9 (C-11), 19.4 (C-30), 18.4 (C-6), 16.4 (C-26), 16.3 (C-24), 16.2 (C-25), 14.9 (C-27)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定化合物3为白桦酸。

3.1.4 化合物4 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, C5D5N)δ: 5.44 (1H, t,J= 3.0 Hz, H-12), 4.12 (1H, m, H-2), 3.45 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-3), 3.33 (1H, dd,J= 13.5, 4.2 Hz, H-18), 1.18 (3H, s, H-23), 1.12 (3H, s, H-27), 1.00 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-24), 0.91 (3H, s, H-30), 0.90 (3H, s, H-29), 0.77 (3H, s, H-26);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 46.9 (C-1), 68.0 (C-2), 81.6 (C-3), 39.7 (C-4), 54.8 (C-5), 18.4 (C-6), 33.3 (C-7), 39.5 (C-8), 37.8 (C-9), 39.0 (C-10), 24.2 (C-11), 122.0 (C-12), 145.3 (C-13), 42.5 (C-14), 27.9 (C-15), 24.3 (C-16), 48.2 (C-17), 42.3 (C-18), 45.8 (C-19), 30.4 (C-20), 33.7 (C-21), 32.8 (C-22), 28.9 (C-23), 17.2 (C-24), 16.9 (C-25), 18.1 (C-26), 25.5 (C-27), 180.0 (C-28), 32.8 (C-29), 24.2 (C-30)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定化合物4为2α-羟基齐墩果酸。

3.1.5 化合物5 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 12.0 (1H, s, 28-COOH), 5.24 (1H, brs, H-12), 3.20 (1H, dd,J= 7.6, 3.2 Hz, H-3), 2.80 (1H, dd,J= 8.8, 2.4 Hz, H-18), 1.26 (3H, s, H-27), 1.13 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, s, H-29), 0.93 (3H, s, H-30), 0.92 (3H, s, H-24), 0.78 (3H, s, H-23), 0.76 (3H, s, H-26);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 182.9 (C-28), 143.5 (C-13), 122.3 (C-12), 79.1 (C-3), 55.3 (C-5), 47.6 (C-9), 46.5 (C-17), 45.9 (C-19), 41.6 (C-14), 41.0 (C-18), 39.2 (C-8), 38.7 (C-4), 38.4 (C-1), 37.2 (C-10), 33.9 (C-29), 33.1 (C-7), 32.5 (C-21), 32.4 (C-22), 30.7 (C-20), 28.0 (C-23), 27.7 (C-15), 27.2 (C-2), 25.9 (C-27), 23.6 (C-16), 23.4 (C-30), 22.8 (C-11), 18.2 (C-6), 17.2 (C-26), 15.5 (C-24), 15.2 (C-25)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定化合物5为齐墩果酸。

3.1.6 化合物6 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 12.34 (1H, s, 8-OH), 7.44 (1H, t,J= 8.8 Hz, H-6), 6.99 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-5), 6.89 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-7), 4.88 (1H, dd,J= 7.6, 4.0 Hz, H-4), 2.95 (1H, m, H-2a), 2.61 (1H, m, H-2β), 2.30 (1H, m, H-3a), 2.14 (1H, m, H-3β);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 204.4 (C-1), 162.4 (C-8), 145.9 (C-5a), 137.1 (C-6), 117.5(C-5), 117.6 (C-7), 115.1 (C-8a), 67.6 (C-4), 34.5 (C-2), 31.1 (C-3)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定化合物6为核桃酮。

3.1.7 化合物7 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.44 (1H, dd,J= 7.6, 1.2 Hz, H-8), 7.26 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-7), 7.05 (1H, dd,J= 7.6, 1.2 Hz, H-6), 5.32 (1H, dd,J= 12.0, 4.4 Hz, H-4), 2.76 (1H, m, H-2), 2.50 (1H, m, H-2), 2.36 (1H, m, H-3), 2.21 (1H, m, H-3);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 196.8 (C-1), 156.6 (C-5), 133.1 (C-8a), 130.5 (C-5a), 129.1 (C-7), 121.4 (C-6), 118.3 (C-8), 65.5 (C-4), 35.2 (C-2), 31.8 (C-9)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定化合物7为4, 5-二羟基-α-四氢萘醌。

3.1.8 化合物8 浅黄色粉末。1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3)δ: 7.41 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-2′, H-6′), 6.91 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-3′, H-5′), 5.98 (2H, s, H-6, H-8), 5.45 (1H, dd,J= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 3.20 (1H, dd,J= 17.0, 12.8 Hz, H-3), 2.72 (1H, dd,J= 17.0, 3.2 Hz, H-3);13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3)δ: 197.3 (C-4), 167.1 (C-7), 164.5 (C-5), 165.2 (C-8a), 158.7 (C-4′), 130.6 (C-1′), 129.0 (C-6′, C-2′), 116.0 (C-3′, C-5′), 103.0 (C-5a), 96.7 (C-6), 95.9 (C-8), 79.8 (C-2), 43.6 (C-3)。以上数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定化合物8为柚皮素。

4 讨论

胡桃属植物具有悠久的药用历史，现代药理研究[8]表明胡桃属植物具有较好的抗肿瘤、抗氧化、抗菌、杀虫、降血糖等作用。目前胡桃属植物中研究报道最多的是胡桃楸 (Juglansmandshurica Maxim. )青皮，而关于泡核桃青皮的研究相对比较少。本研究对泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位的化学成分进行了研究，共分离鉴定了8个化合物，其中4个三萜类化合物为首次从该植物中分离得到，三萜类化合物结构类型涉及乌苏烷型五环三萜 (2)、羽扇豆烷型五环三萜 (3)以及齐墩果烷型五环三萜 (4、5)，从而进一步丰富了泡核桃青皮的化学成分类型。另外，课题组前期研究发现泡核桃青皮70%甲醇提取物具有抗肿瘤活性，而本研究分离得到的三萜类化合物文献报到均具有抗肿瘤作用[16-18]；同时，萘醌类化合物也是胡桃属植物中的抗肿瘤活性成分之一[19]，本研究从泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位中分离得到1个萘醌类化合物 (7)，从而为泡核桃青皮抗肿瘤活性的研究奠定了物质基础。