双歧杆菌联合干扰素对病毒性腹泻患儿中性粒细胞及心肌酶谱的影响

翟豪强，沈德新

(中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院小儿科，河南 郑州 450000)

病毒性腹泻主要通过粪-口传播，好发于0.5～2.0岁小儿，轮状病毒是其发生主要病原体，发生率约占20.0%～70.0%，若未予以及时有效干预，患儿常因水分不足或体内大量酮体生成，出现程度不一的脱水酸中毒现象，从而引起心肌损伤，增加心肌炎发生风险[1-3]。病毒性腹泻发病机制较为复杂，相关研究认为，机体感染轮状病毒后，可激活体内炎性反应，释放大量炎性因子，而中性粒细胞杆状核、分叶核表达升高有助于评估炎性反应、判断感染程度及病情进展[4]。目前，临床上针对病毒性腹泻患儿主要采用补液、纠正水电解质紊乱或酸碱失衡等常规治疗，但其难以有效缓解肠道菌群紊乱，改善营养吸收。双歧杆菌三联活菌中富含长型双歧杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌等益生菌，有助于纠正肠道菌群紊乱，降低内毒素含量，减轻腹泻症状[5-6]。注射用重组人干扰素α-1b具有高效、广谱抗病毒活性，可刺激抗病毒蛋白基因，抑制病毒蛋白复制[7]，然而关于其与双歧杆菌三联活菌联合对患儿中性粒细胞杆状核、分叶核的影响临床尚未完全明确，有待进一步深入研究。基于此，本研究尝试分析双歧杆菌三联活菌联合注射用重组人干扰素α-1b对病毒性腹泻患儿中性粒细胞杆状核、分叶核的影响,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性收集2019年4月至2021年12月本院93例病毒性腹泻患儿作为研究对象，均符合《诸福棠实用儿科学》[8]中病毒性腹泻诊断标准；大便表现为黄稀水样或蛋花汤样；酶联免疫吸附试验测定粪便轮状病毒抗原呈阳性；排除大便呈黏液脓血便或大便常规白细胞、红细胞分别超过5个/HP者；伴有细菌性痢疾或霍乱等疾病者；存在重组人干扰素α-1b药物过敏史者；近12周内有微生态制剂或抗菌药物治疗史者；监护人精神行为异常。两组基线资料(年龄、病程、性别、腹泻次数、脱水程度)均衡可比(P>0.05)，见表1。本研究经本院伦理委员会审核评议并通过。

表1 两组基线资料比较

1.2方法 两组均予以纠正机体水电解质、酸碱失衡、口服或静脉补液、营养支持等常规治疗。在此基础上，对照组将双歧杆菌三联活菌(上海上药信谊药厂有限公司，国药准字：S10950032)溶于温水或温牛奶中送服，每次210 mg，2次/天。观察组在对照组基础上肌肉注射重组人干扰素α-1b(深圳科兴药业有限公司，国药准字：S10960059)，每天注射1次1 μg/kg。两组均持续治疗3 d。

1.3观察指标 (1)临床疗效。评价标准：治疗3 d内，全身症状消退，大便性状、次数恢复正常为显效；治疗3 d内，全身症状显著缓解，大便性状、次数有所控制为有效；治疗3 d内，未达到显效、有效标准为无效。总有效率=(显效+有效)/总例数×100%。(2)症状缓解时间，包括止呕、止泻及退热时间。(3)中性粒细胞杆状核、分叶核、炎性因子、心肌酶谱、免疫功能。检测方法：分别于治疗前、治疗1、3 d后清晨空腹取外周静脉血9 mL，均分为3份：①取其中一份根据艾康生物技术(杭州)有限公司提供的HA-360型全自动血细胞分析仪说明书测定中性粒细胞杆状核、分叶核；②再取其中一份，抗凝处理，根据美国BD公司提供的Accuri C6型流式细胞仪测定CD4+、CD8+水平；③另一份常规离心处理(3 000 r/min离心12 min)，取上清液，-80 ℃低温保存待检。根据上海酶联生物科技有限公司提供的酶联免疫吸附试验试剂盒说明书检测白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；根据上海玉兰生物技术有限公司提供的酶法试剂盒说明书检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。

2 结 果

2.1临床疗效 观察组治疗总有效率95.74%，高于对照组(80.43%)，差异有统计学意义(χ2=5.225，P<0.05)，见表2。

表2 两组临床疗效对比[n(%)]

2.2症状缓解时间 观察组的止呕、止泻及退热时间均短于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组症状缓解时间对比

2.3中性粒细胞杆状核、分叶核 治疗1、3 d后，两组中性粒细胞杆状核、分叶核计数均较治疗前明显下降，且观察组下降幅度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 两组中性粒细胞杆状核、分叶核对比

2.4血清炎性因子 治疗1、3 d后，两组血清炎性因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均较治疗前明显下降，且观察组下降幅度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

表5 两组血清炎性因子水平对比

续表5 两组血清炎性因子水平对比

2.5血清心肌酶谱 治疗1、3 d后，两组血清心肌酶谱CK、CK-MB、LDH及HBDH水平均较治疗前明显下降，且观察组下降幅度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表6。

表6 两组血清心肌酶谱水平对比

组别nLDH治疗前治疗1 d后治疗3 d后HBDH治疗前治疗1 d后治疗3 d后观察组47175.41±23.16157.36±12.12a148.32±7.62a183.41±15.82149.63±10.37a132.58±8.41a对照组46173.69±25.38165.24±13.47a155.83±8.41a180.69±13.24159.73±11.28a141.26±10.29at-0.3422.9674.5150.9044.4974.459P-0.7340.004<0.0010.368<0.001<0.001

2.6免疫功能 治疗1、3 d后，两组CD4+、CD4+/CD8+水平均较治疗前明显升高，CD8+水平较治疗前明显下降，且观察组下降及升高幅度均大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表7。

表7 两组免疫功能指标水平对比

组别nCD4+/CD8+治疗前治疗1 d后治疗3 d后观察组470.96±0.101.23±0.15a1.43±0.22a对照组460.99±0.121.10±0.14a1.23±0.19at-1.3114.3194.688P-0.193<0.001<0.001

3 讨 论

双歧杆菌三联活菌可为机体补充有益生菌，发挥良好抗病毒作用，修复受损肠道黏膜[9-10]，但单独服用存在起效慢、治疗时间长等不足，需与其他药物联合以增强治疗效果，缩短治疗时间。本研究针对病毒性腹泻患儿采用双歧杆菌三联活菌联合重组人干扰素α-1b治疗，结果显示，二者联合能有效缓解腹泻症状，且其总有效率高达95.74%，考虑机制可能在于重组人干扰素α-1b不仅可结合细胞表面受体，促进大量细胞抗病毒蛋白产生，从而抑制细胞内病毒合成，还能通过抑制胃肠激素分泌，加快肠内氯离子、钠离子吸收，减轻肠腔渗透压，进而产生良好止泻作用，加快症状改善速度[11]；双歧杆菌三联活菌可提高肠道防御屏障功能，降低肠道pH值，抑制病原菌定植与入侵，两者联合可从不同作用机制方面发挥抗病毒作用，维持患儿胃肠道生态平衡，进而修复患儿受损肠道功能。

同时，多项研究证实，肠道炎性反应是轮状病毒性腹泻主要病理变化，TNF-α作为炎性反应的启动因子，可诱导IL-10等促炎因子释放，加剧肠黏膜炎性损伤[12-14]。IL-6主要由T淋巴细胞、单核吞噬细胞分泌、合成，其表达在轮状病毒感染性腹泻患儿中异常升高，可调控体液免疫与炎性反应[15]。IL-8作为机体重要趋化因子，可刺激中性粒细胞，激活机体局部炎性反应，郝雯颖等[16]认为，其与轮状病毒肠炎患儿病情程度呈正相关，可为评估患儿病情提供有效依据。中性粒细胞杆状核、分叶核两者比值与超敏C反应蛋白、IL-6均存在正相关性，可表现炎性反应程度[17]。既往临床多侧重于症状改善，本研究创新性对患儿中性粒细胞杆状核、分叶核及炎性因子水平进行分析，发现双歧杆菌三联活菌联合重组人干扰素α-1b在调节病毒性腹泻患儿炎性反应方面具有一定积极效应，这可能归因于重组人干扰素α-1b可提高靶细胞表面主要组织相容性复合物表达，帮助淋巴细胞完成抗原提呈过程，激活巨噬细胞、杀伤细胞，抑制炎性因子生成，与双歧杆菌三联活菌联合，可抑制轮状病毒对黏膜上皮细胞的黏附、侵袭，阻断炎症信号传导，从而产生良好抗炎作用。

另有学者指出，随着轮状病毒性腹泻患儿脱水程度增加，氧自由基不断释放，在一定程度上可诱发脂质过氧化反应，引起心肌细胞损伤[18-19]。CK、CK-MB、LDH及HBDH均是临床评估心肌损伤程度的特异指标，余万辉等[20]研究认为，上述指标在轮状病毒性腹泻患儿中呈高表达，对指导小儿轮状病毒腹泻的早期诊治具有较好应用价值。本研究指出，双歧杆菌三联活菌联合重组人干扰素α-1b在降低病毒性腹泻患儿心肌酶谱水平方面优于双歧杆菌三联活菌单独服用，这可能是由于二者联合可强化抗病毒作用，有助于调节肠道水电解质平衡，提高小肠黏膜能力，减少水钠潴留，防止肠腔内大量肠液聚集，从而缓解心肌损害。此外，由于小儿免疫系统尚未达到成人水平，再加上轮状病毒可直接附着于小肠表面，影响小肠绒毛功能，破坏肠绒毛完整性与连续性，降低机体免疫蛋白水平，从而导致患儿免疫功能紊乱，症状改善时间延长[21-22]。T淋巴细胞亚群是评价机体免疫状态的重要指标。本研究对治疗前后免疫功能指标变化进行分析，两组治疗1、3 d后CD4+、CD4+/CD8+水平均较治疗前升高，CD8+水平较治疗前降低，提示双歧杆菌三联活菌能改善病毒性腹泻患儿免疫功能。进一步分析两组治疗后免疫功能指标差异可知，治疗1、3 d后观察组CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组，CD8+水平低于对照组。这一结果说明在双歧杆菌三联活菌治疗的同时加用重组人干扰素α-1b更能改善病毒性腹泻患儿免疫功能，这可能与重组人干扰素α-1b对免疫功能具有调节作用，可激活各种免疫细胞，提高自然杀伤细胞活性，诱导淋巴细胞增殖反应，促进免疫蛋白合成，进而增强机体免疫系统防御功能，清除机体病毒感染细胞有关。

综上所述，双歧杆菌三联活菌联合注射用重组人干扰素α-1b通过降低心肌酶谱水平、调节免疫炎性反应可有助于增强治疗效果，缩短病毒性腹泻患儿症状改善时间。但本研究为回顾性分析，数据结果可能存在一定偏移，今后需进行大样本量前瞻性研究，进一步论证结果可靠性。