一款含泰束胶原蛋白肽护肤品对面部皮肤抗老化功效研究

吴黎明 张婷婷 吴田田 赵磊 张勇杰 石梅玲

【摘 要】目的 通過体外及人体联合测试方法，评价一款含泰束胶原蛋白肽护肤品的安全性及抗皱、紧致等方向的抗老化功效作用。方法 通过利用培养成纤维细胞，运用ELISA方法检测Ⅰ型胶原蛋白、弹性蛋白含量及第三方人体功效实验室（SGS）进行人体功效检测，分别在0、2、4周采集分析皱纹、皮肤水分含量、经皮水分流失值、弹性等数据，综合评估本产品的抗皱功效。结果 基于体外UVA刺激成纤维细胞模型试验得出，测试产品能显著性提升Ⅰ型胶原蛋白、弹性蛋白含量（P<0.05）；33名敏感肌受试者使用产品28 d后与使用产品前相比，皮肤角质层水分含量、皮肤经表皮失水值、皮肤弹性（R2值、R7值）、皮肤紧致F4、眼角处皱纹（长度、数量）均有极显著性改善（P<0.001），皮肤弹性R5值与眼角处皱纹深度也得到改善（P<0.05）。结论 含泰束胶原蛋白肽精华对面部皮肤老化引起的皮肤干燥、粗糙和皱纹有一定的改善作用，且安全性良好。

【关键词】泰束胶原蛋白肽；抗老化；功效性；护肤品

中图分类号：TQ658.2 文献标识码：A 文章编号：1004-4949（2022）24-0001-06

Study on the Anti-aging Efficacy of A Skin Care Product Containing Taishu Collagen Peptides

WU Li-ming1， ZHANG Ting-ting2， WU Tian-tian3， ZHAO Lei1， ZHANG Yong-jie4， SHI Mei-ling5

（1.Xian Bohe Medical Technology Co.， Ltd， Xian 710032， Shaanxi， China； 2.Xian Bohong Biotechnology Co.， Ltd， Xian 710032， Shaanxi， China； 3.Shaanxi Baiao Regenerative Medicine Co.， Ltd， Xian 710032， Shaanxi， China； 4.Guangdong Boxi Biotechnology Co.， Ltd， Dongguan 523808， Guangdong， China； 5.Shaanxi Bai Chen Biotechnology Co.， Ltd.， Xian 710032， Shaanxi， China）

【Abstract】Objective To evaluate the safety and anti-aging effect of a skin care product containing Taishu collagen peptide by in vitro and human joint test methods. Methods By using cultured fibroblasts， ELIASA method was used to detect the content of type Ⅰ collagen and elastin， and a third-party human efficacy laboratory （SGS） was used to detect human efficacy. The wrinkles， skin moisture content， transcutaneous water loss value， elasticity and other data were collected and analyzed at 0， 2 and 4 weeks to comprehensively evaluate the anti-wrinkle effect of the product. Results Based on the model test of fibroblasts stimulated by UVA in vitro， the test products could significantly increase the content of type Ⅰ collagen and elastin （P<0.05）. After 28 days of using the product， the water content of skin stratum corneum， skin transepidermal water loss value， skin elasticity （R2 value， R7 value）， skin tightening F4， and wrinkles （length， number） at the corner of the eye were significantly improved compared with those before using the product （P<0.001）. The R5 value of skin elasticity and the depth of wrinkles at the corner of the eye were also improved（P<0.05）. Conclusion Taishu collagen peptide essence on facial skin aging caused by dry skin， rough and wrinkles have a certain improvement， and with good safety.

【Key words】Taishu collagen peptide； Anti-aging； Efficacy； Skin care products

皮肤老化是影响面部年轻化的重要原因，而紫外线照射又是外源性皮肤老化的关键因素，长期接触紫外线的皮肤表现为粗糙、皱纹加深、失去弹性，伴有色素沉着[1]。随着人们生活水平日益提高，越来越多的人们开始追求拥有健康、年轻的皮肤状态。而泰束胶原蛋白肽是纳米级纯化学合成仿生人源Ⅰ型胶原蛋白，拥有Gly-Pro-Hyp胶原特征序列最多的肽段，富含约超过35%羟脯氨酸含量，比市面上大多数胶原蛋白中羟脯氨酸高13%[2]，且分子量在2000 Da，可有效渗入皮肤角质层[3]，发挥抗衰功效。本研究通过研究泰束胶原蛋白肽对Ⅰ型胶原蛋白含量及弹性蛋白含量合成的影响，观察该活性原料用于人体后的功效表现，以期获知基于泰束胶原蛋白肽的活性物在产品配方中体外和人体功效数据，判断其是否具有改善皮肤干燥、粗糙和皱纹的功效作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 CO2培养箱（Thermo，150 L）、超净工作台（苏州安泰，SW-CJ-1F）、酶标仪（BioTek，Epoch）、倒置显微镜（Olympus，CKX41）、UVA照射仪（博溪生物）、Antera 3D（芬兰Delfin）、Cutometer MPA580（德国CK）、Corneometer CM825（德国CK）、Tewameter TM Hex（德国CK）；低糖DMEM培养基（博溪生物）、PBS（博士德）、新生牛血清（NBS，兰州荣晔）、MTT（Sigma）、Elastin ELISA试剂盒（Abcam）、Collagen I alpha 1 ELISA试剂盒（Abcam）、TGFβ1（Peprotech）、觅光环游记芯肌多效修护紧致精华液（西安博鸿生物技术有限公司，陕G妆网备字2022000820，规格：30 ml）。

1.2 体外测试方法

1.2.1细胞毒性测试 按8×103个/孔的接种密度接种成纤维细胞至96孔板，培养箱（37 ℃，5% CO2）中孵育过夜。待96孔板中细胞铺板率达到40%～60%时进行给药。溶剂对照组每孔加入200 μl 10% DMSO的培养液；调零组无细胞接种，仅加入200 μl细胞培养液；样品组共设置8个浓度梯度，依次每孔加入200 μl 0.0781%，0.1563%，0.3125%，0.6250%，1.25%，2.5%，5%，10%（V/V）的泰束胶原蛋白肽精华液；以上三组均放置在培养箱中培养24 h，且每个样品共设置3个重复孔。培养24 h后，弃掉上清，加入MTT工作液（0.5 mg/ml），37 ℃避光孵育4 h，孵育结束后，弃掉上清，每孔加150 μl DMSO，在490 nm处读取OD值。利用细胞相对活力（%）=（样品孔OD-调零孔OD）/（溶剂对照组OD-调零孔OD）×100%公式计算细胞相对活力。当相对细胞活力≥80%，认为受试物在该浓度下无细胞毒性。

1.2.2体外功效测试 按2.2×105个/孔的接种密度接种成纤维细胞至6孔板，培养箱（37 ℃，5% CO2）中孵育过夜；待6孔板中细胞铺板率达到40%～60%时，进行分组给药，每孔加样2 ml，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱（37 ℃，5% CO2）中继续培养24 h。按照30 J/cm2辐照剂量对细胞进行UVA辐照，继续放入培养箱（37 ℃，5% CO2）中培养24 h后，收集细胞培养上清液于离心管中，根据Ⅰ型胶原蛋白、弹性蛋白ELISA试剂盒的操作说明书进行检测[4-6]。

1.3 人体测试方法 受试者选取上海地区自认为敏感皮肤的31名亚洲女性和2名亚洲男性，年龄29～60岁；纳入标准：面部有轻度皮肤老化表现（干燥、细纹、弹性下降和皱纹等）；自愿参加本试验，签署知情同意书，按要求使用产品并完成随访；近2个月内没有参加任何涉及皮肤的临床试验。排除标准：测试部位有皮肤疾病者；处于怀孕期、哺乳期、备孕期；经研究者判断为不适合参加试验者。按照每日早晚洁面后各使用1次，每次根据使用习惯量取适量产品，均匀涂抹于面部，轻轻按摩至吸收，连续使用28 d。使用Antera 3D（芬兰Delfin）和Cutometer MPA580（德国CK）检测使用前，使用后28 d随机一侧外眼角区域皱纹长度、皱纹平均深度、皱纹数量；皮肤弹性参数R2值、R5值、R7值和皮肤紧致参数F4值；并使用Corneometer CM825（德国CK）和Tewameter TM Hex（德国CK）检测使用前、使用后14 d、28 d皮肤角质层水分含量和经皮水分流失值；测试时，受试者清洁面部，并用无屑干面巾纸擦干皮肤，在温度（21±2） ℃，湿度（50±10） %的检测室中静坐平衡30 min。各检测指标面部区域标记点如下所示：

1.4 统计学方法 采用SPSS 28.0统计学软件进行数据分析，计量资料以（x-±s）表示，若测试数据为正态分布，则采用配对t检验方法；若测试数据为非正态分布，则采用秩和检验；P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.001表示统计学意义极显著。

2 结果

2.1 体外安全性测试结果 根据MTT和形態学结果，认为样品基于成纤维细胞，在1.25%的浓度范围内未表现出明显的细胞毒性，见图2、图3。故使用该浓度进行体外功效测试。

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