覆盆子鞣花酸含量影响因素分析

钭凌娟，王琤帅，陈有来，吴梅，李根有，傅杨群

(1.金华市农业科学研究院，浙江 金华 321017；2.金华市食品药品检验检测研究院，浙江 金华 321001；3.磐安县双溪乡综合农技服务中心，浙江 金华 322309；4.浙江农林大学 暨阳学院，浙江 绍兴 311800；5.浙江大成药业有限公司，浙江 磐安 322305)

覆盆子为蔷薇科植物掌叶覆盆子的干燥果实，用于肾虚遗尿、小便频数、阳痪早泄、遗精滑精等症的治疗[1]，其功能和疗效民间基础好、认可度高，同仁堂、胡庆余堂和九芝堂等诸多国内知名的中成药生产企业均对该药材有大量需求。浙江为覆盆子道地产区，栽培面积达0.49万hm2[2]，但是近几年发现，市场上覆盆子鞣花酸含量常常达不到药典规定标准，对整个覆盆子产业造成不良影响。本文从种源、施肥、遮阴、果实成熟阶段、炮制方法等方面对覆盆子鞣花酸含量的影响因素开展研究，为栽培和加工过程中提高覆盆子鞣花酸含量提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

种源对比试验在磐安县双溪乡进行，海拔560 m，砂壤土，土壤肥力中等。施肥对比试验在塔石乡进行，海拔 240 m，砂壤土，土壤肥力中等。遮阴对比试验在兰溪市水亭乡天保药材发展有限公司进行，海拔52 m，黄壤土，土壤肥力较差。成熟阶段对比试验的覆盆子采自塔石乡试验点，炮制方法对比试验的果实采自兰溪市水亭乡天保药材发展有限公司试验点。试验收集了浙江中西部13个种质资源，具体采集地点和编号如表1。2020年5月6日果实青转黄时采集，采用45 ℃低温烘干。以上栽培及采集的覆盆子经浙江农林大学暨阳学院植物分类学教授李根有鉴定，均为掌叶覆盆子。

1.2 处理设计

1.2.1 不同施肥方案对覆盆子鞣花酸含量影响

试验设置每丛施羊粪0.5 kg、羊粪1 kg、硫酸钾复合肥100 g、硫酸钾复合肥200 g、不施肥(CK)5个处理，每处理重复3次。所用的羊粪为湖州购买，硫酸钾复合肥为史丹利品牌，在2020年2月22日洒施在树盘附近。2020年4月28日果实青转黄时采摘，采用45 ℃低温烘干。

1.2.2 不同遮阴处理对覆盆子鞣花酸含量影响

据相关研究，遮阴对植物的光合特性及基因转录有影响[3]，为避免长期遮阴对覆盆子坐果产生影响，进而影响产量，试验采取了短期遮阴，即坐果后再进行遮阴的处理。试验设置50%遮阴度、75%遮阴度和不遮阴3个处理，每处理重复3次。遮阴网于2020年4月14日覆盖，2020年4月28日果实青转黄时采摘，采用45 ℃低温烘干。

1.2.3 不同成熟阶段覆盆子鞣花酸含量比较

试验于2020年5月5日开始采集转白、转黄、转橙、软熟4个阶段果实，每处理重复3次，采用45 ℃烘干。

1.2.4 不同炮制方法对覆盆子鞣花酸含量影响

2020年4月28日果实青转黄时采摘覆盆子，设晒干、45 ℃烘干、蒸青后45 ℃烘干再回潮发酵、开水焯后晒干4个处理，每个处理重复3次。

1.2.5 鞣花酸测定

按《中国药典》(2015版)测定方法测定[1]。

1.3 数据分析与处理

使用Excel 2019对数据进行整理，用SPSS25.0软件进行单因素和双因素分析，单因素试验用ANOVA方差分析，用LSD法进行多重比较；双因素试验采用双因素方差分析。

2 结果与分析

2.1 不同种源覆盆子鞣花酸含量对比

从表1看，不同种源覆盆子鞣花酸含量在0.055 0%～0.135 7%，都未达到药典要求的含量0.2%。种源间鞣花酸含量相差较大，很多相互间达到了极显著差异。其中JY-04的鞣花酸含量最高，为0.135 7%，极显著高于其他种源，比本地种源(CK)高；JY-01的鞣花酸含量最低，为0.055 0%，比本地种源(CK)低，极显著低于除JY-05外的其他种源。

表1 不同种源覆盆子鞣花酸含量对比

2.2 不同施肥方案对覆盆子鞣花酸含量影响

由表2可知，施肥处理的覆盆子鞣花酸含量总体比不施肥(CK)的高。其中施硫酸钾复合肥的鞣花酸含量提高较多，施200 g硫酸钾复合肥的鞣花酸含量最高，为0.072 3%。但不同施肥处理间覆盆子鞣花酸含量方差分析差异不显著，羊粪和硫酸钾对覆盆子鞣花酸含量的影响均不显著。因此从本试验看，施肥对覆盆子鞣花酸含量的提高有一定作用，但效果不显著。

表2 不同施肥方案对覆盆子鞣花酸含量影响

2.3 遮阴处理对覆盆子鞣花酸含量影响

由表3可知，遮阴处理的覆盆子鞣花酸总体含量比不遮阴处理(CK)高，其中50%遮阴的覆盆子鞣花酸含量最高，比不遮阴(CK)高23.63%。各遮阴处理间达到极显著差异，说明遮阴对覆盆子鞣花酸含量影响效果明显。

表3 遮阴处理对覆盆子鞣花酸含量影响

2.4 不同成熟阶段覆盆子鞣花酸含量比较

由表4可知，覆盆子鞣花酸含量随着果实成熟度的提高逐渐下降。软熟阶段鞣花酸含量最低，为0.040 0%；转白阶段鞣花酸含量最高，为0.056 9%，比软熟阶段高。转白阶段覆盆子鞣花酸含量显著低于转橙阶段，软熟覆盆子的鞣花酸含量极显著低于其他成熟阶段覆盆子。

表4 不同成熟阶段覆盆子鞣花酸含量比较

2.5 炮制方法对覆盆子鞣花酸含量影响试验

由表5看出，使用晒干、烘干回潮发酵再烘干、45 ℃烘干这3种炮制方法的覆盆子的鞣花酸含量都极显著高于开水焯后晒干，晒干和烘干回潮发酵再烘干的炮制技术鞣花酸含量达到《中国药典》要求，并且使用烘干回潮发酵再烘干炮制方法的覆盆子鞣花酸含量超出《中国药典》含量标准较多，达0.737 8%。

表5 炮制方法对覆盆子鞣花酸含量影响

3 讨论

中药材在炮制过程中受外界条件影响，极易引起外观性状、有效成分及生物活性的转变，直接影响到中药材的药用价值与经济价值[4-6]。从本试验看，炮制方法对覆盆子鞣花酸含量影响较大，烘干回潮发酵再烘干的覆盆子鞣花酸含量较大幅度地超过《中国药典》要求，这可能与覆盆子蒸青后，使相关的酶失活[7]，减少了鞣花酸采后的分解有关，其中原理还需要进一步深入研究。近年来，随着覆盆子产量增加，农户采摘后多为晴天直接晒干或阴雨天低温烘干，省工省力，蒸青再烘干技术较少采用，但从本试验看，该技术提升覆盆子鞣花酸含量效果明显，在实际生产中值得推广。

本试验考虑到浙江地区覆盆子采摘时期常遇阴雨天气，烘干处理方便实用，所以在种源、肥料、遮阴、成熟阶段等对覆盆子鞣花酸含量的影响的试验中，都采用了45 ℃烘干处理，这可能是造成这几个试验中的覆盆子鞣花酸含量未能达到《中国药典》标准的原因。

但从总体来看，除炮制方法外，仍可观察出以下因素对覆盆子鞣花酸含量的影响：(1)掌叶覆盆子种源间差异显著，这与姚鑫等[8]发现的掌叶覆盆子单株间药用组分变异丰富的结论相一致；缙云双溪口乡松树岗村的1个种源(JY-04)的覆盆子鞣花酸含量最高，极显著高于其他种源；(2)施羊粪和硫酸钾复合肥都能提高覆盆子鞣花酸含量，但效果不显著；(3)随着覆盆子果实成熟度提高，鞣花酸含量逐渐降低，与孙乙铭等[9]开展的覆盆子成熟过程颜色表征及其与品质指标消长的相关性研究结论一致；(4)短期遮阴处理的覆盆子鞣花酸含量较不遮阴高，这可能与短期遮阴条件下，覆盆子成熟度低于不遮阴有关，也从另一方面验证了本试验覆盆子鞣花酸含量随着果实成熟度提高逐渐降低的结论。75%遮阴的覆盆子鞣花酸含量不如50%遮阴的覆盆子，可能与遮阴提高到一定程度，会逐渐影响覆盆子果实发育有关，需要进一步深入研究。