强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子及miR-155与脊柱活动度的关系*

顾维杰 郑冰 汪池 吴旭强

(成都市第五人民医院，四川 成都 611130)

强直性脊柱炎是一类慢性炎症性的关节病变，累及的关节以髋部、颈部、腰部为主[1]。此外，由于强直性脊柱炎患者的骶髂关节、肌腱及其周围附着点受到炎性细胞的浸润致使外周关节炎的发生，严重影响其生存质量[2-3]。强直性脊柱炎发病原因较为复杂，目前考虑与感染、免疫、环境以及遗传等因素有关[4]。相关研究发现T淋巴细胞免疫反应在机体自身免疫疾病发生、发展过程中发挥着关键作用[5]。辅助性T细胞17(Th17)是近年新发现的一种CD4+细胞亚群，可特异性产生白细胞介素，其和具有抑制炎症反应的调节性T细胞(Treg)在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义[6]。微小核糖核酸-155(microRNA-155，miR-155)属于微小核糖核酸(miRNA)家族中的一员，能调节T细胞的增殖、分化，在自身免疫疾病患者中呈异常表达状态[7]。本研究就强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155与脊柱活动度关系进行分析，现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2018年1月～2021年3月我院收治的强直性脊柱炎患者116例，并将其归为观察组。根据强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)[8]分为活动期(BASDAI≥4，n=52)与稳定期(BASDAI<4，n=64)。纳入标准：①所有患者的诊断均符合1984年制定的强直性脊柱炎纽约标准[9]。②近三个月未接受过免疫调节治疗。③患者及家属均知晓同意。④本研究经医院伦理委员会批准。排除标准：①存在自身免疫、血液疾病者。②心、脑、肝、肾等脏器功能严重不全者。③存在精神疾患、意识障碍等依从性差的情况。④存在其他类型风湿性疾病者。⑤处于妊娠期或哺乳期女性。⑥存在感染性疾病者。另选取同期于我院进行健康体检的健康志愿者97例，设为对照组。

1.2 方法 检测Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平 观察组在入院第2天、对照组在体检当日分别抽取空腹静脉血5 mL，3000 r/min离心15 min，离心半径10 cm，分离血清，置-80℃保存。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Th17/Treg相关细胞因子，即IL-10、TGF-β、IL-17、IL-23水平，仪器为美国贝克曼库尔特全自动免疫分析仪，试剂盒由深圳欣博盛生物科技有限公司生产。使用人淋巴细胞分离液将外周血单个核细胞分离，采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血单个核细胞中miR-155的表达，以U6为内参，上游引物：5′-GCGA AAGCATTTGCCAAGAA-3′，下游引物：5′-GCGAA AGCATTTGCCAAGAA-3′。皆严格按照说明书进行操作。

1.3 观察指标 ①对比观察组和对照组Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平。②对比活动期和稳定期强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平。③采用Bath AS测量指数(BASMI)[10]评价强直性脊柱炎患者的脊柱活动度，包括耳壁距、颈椎旋转度、腰椎前屈、腰椎侧屈、以及内踝间距5个项目，分值越低代表患者脊柱活动度越佳，并对比活动期和稳定期的脊柱活动度。④分析强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155与脊柱活动度的相关性。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 观察组男性64例，女性52例，年龄23～69岁，平均(36.71±5.98)岁；病程1～9年，平均(3.48±1.72)年。对照组男54例，女43例，年龄22～73岁，平均(37.24±7.56)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 两组Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平比较 观察组IL-17、IL-23、miR-155表达水平明显高于对照组(P<0.05)；两组IL-10、TGF-β比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平对比Table 1 Comparison of Th17/Treg-related cytokines and miR-155 expression levels between the study group and the control group

2.3 活动期和稳定期强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平比较 活动期IL-17、IL-23、miR-155表达水平明显高于稳定期(P<0.05)；活动期与稳定期IL-10、TGF-β比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 活动期和稳定期强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155表达水平比较Table 2 Comparison of Th17/Treg-related cytokines and miR-155 expression levels in patients with active and stable ankylosing spondylitis

2.4 活动期和稳定期强直性脊柱炎患者BASMI评分比较 活动期强直性脊柱炎患者BASMI评分(1.74±0.58)分明显高于稳定期(2.08±0.69)分(t=2.883，P<0.05)。

2.5 强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155与脊柱活动度的相关性Pearson相关系数分析显示，强直性脊柱炎患者IL-17、IL-23、miR-155表达水平与BASMI评分呈正相关，IL-10、TGF-β表达水平与BASMI评分呈负相关(P<0.05)，见表3。

表3 强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155与脊柱活动度的相关性Table 3 Analysis of the correlation between Th17/Treg-related cytokines, miR-155 and spinal mobility in patients with ankylosing spondylitis

3 讨论

强直性脊柱炎的发病较为隐匿，活动期和稳定期往往呈现为交替出现，并且无规律可言；其活动期是机体炎症反应加剧、病变复发的一种急性表现，每次病变活动发作皆会引起病变加重，致使组织损害、活动受限皆进一步发展，可引起患者脊柱活动度降低[11]。强直性脊柱炎是与HLA-B27存在明确关联的自身免疫性病变，发病原因包括微生物与宿主间的相互作用、细胞因子网络的紊乱等多方面[12]。分析强直性脊柱炎患者机体特异性指标的表达情况，不仅可进一步了解发病机制，同时还可为强直性脊柱炎患者的治疗提供思路[13]。既往研究显示强直性脊柱炎患者外周血中miR-155表达可能影响Th17/Treg的平衡[14]，但有关上述指标与脊柱活动度关系的研究较少见。因此，本研究就强直性脊柱炎患者Th17/Treg相关细胞因子、miR-155与脊柱活动度的关系进行探讨，为临床防治提供理论依据。

Th17及Treg细胞是辅助性T细胞中的重要组成部分，参与机体的免疫反应过程[15]。Zeng等[16]研究指出，健康者体内Th17和Treg在分化和成熟方面互相制约，二者呈平衡状态，并可通过某些细胞因子实施细胞转化，若体内细胞环境改变，Th17/Treg与细胞免疫失衡，致使病情进一步发展。IL-23属于促炎性细胞因子的一种，也是Th17的重要存活因子，其活化后可促进IL-17、IL-6的生成[17]。此外，IL-23由树突状细胞以及巨噬细胞分泌而来，仅于炎症刺激时分泌，说明Th17细胞的长期存活依赖于机体的炎症刺激[18]。IL-17具有强大的致炎性，能诱发促炎性细胞因子的表达，机体受炎性细胞的浸润，从而造成组织损害[19]。本研究发现，观察组IL-17、IL-23表达水平明显高于对照组，且活动期IL-17、IL-23表达水平明显高于稳定期，而IL-10、TGF-β表达水平并无显著上升，说明强直性脊柱炎患者体内可能存在Th17与Treg细胞的紊乱。

miR-155是位于21号染色体上因子，其与机体的炎症免疫反应存在一定的相关性，可通过调节T淋巴细胞的增殖、分化，推动炎症因子的表达致使机体的免疫反应出现失调[20]。Zhu 等[21]研究表明miR-155参与机体免疫性疾病的发生、发展过程。本研究结果显示，与对照组相比，观察组miR-155表达水平明显增加，且活动期miR-155表达水平明显高于稳定期，这与既往研究结果报道相似[22]。表明miR-155在强直性脊柱炎患者中呈高表达，且随着病情的进展miR-155表达水平也随之上升。BASMI为用于评估患者脊柱功能状况的评分，能客观地反应患者脊柱活动度的情况[23]。本研究通过相关性分析显示，强直性脊柱炎患者IL-17、IL-23、miR-155表达与BASMI评分呈正相关，而IL-10、TGF-β表达与BASMI评分呈负相关，提示Th17、Treg相关细胞因子及miR-155与患者病情的发生、发展有关，可在一定程度上反应患者的脊柱活动情况。但由于本研究纳入的样本量较少，可能导致研究结果出现一定偏倚，后续将扩大样本量进行深入研究。

4 结论

强直性脊柱炎患者miR-155、Th17相关细胞因子呈高表达状态、Treg相关细胞因子呈低表达状态，Th17/Treg呈失衡状态，且Th17/Treg相关细胞因子、miR-155与患者脊柱活动度具有一定的相关性，可作为临床评估病情的辅助检查。