高效液相色谱法、胶体金快速定量法测定新收获小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的对比

任晓曦

（烟台市食品药品检验检测中心，山东烟台 264003）

脱氧雪腐镰刀菌烯醇具有细胞毒性和致癌性，易引起呕吐、厌食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病[1-4]，也称为呕吐毒素，被国际癌症研究机构列为第3类致癌物[5]。呕吐毒素对人体有很强的毒性，能引起呕吐、腹泻、皮肤刺激等病症，严重者会出现神经紊乱的症状，非常危险。呕吐毒素常存在于小麦、玉米等常见粮食作物中。为了保证人们的身体健康也为了保障粮食安全，准确检测粮食中呕吐毒素至关重要。本文主要对2022年本地新收获小麦所含呕吐毒素进行检测，并通过高效液相色谱仪、真菌毒素检测定量设备两种检测设备验证对比高效液相色谱法与胶体金快速定量法的 优劣。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料

1.1.1 试剂

小麦粉中呕吐毒素分析质控样品（0.844± 0.190）mg·kg-1，pribolab；甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯；聚乙二醇8000；氯化钠；磷酸氢二钠；磷酸二氢钾；氯化钾；盐酸；娃哈哈纯净水。

1.1.2 标准品

乙腈中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品，国家粮食和物资储备局科学研究院。

1.1.3 仪器和设备LC-20AD高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，日本岛津；真菌毒素检测定量设备，美国Charm Rosa；电子天平，上海天美天平仪器有限公司；vortex genie2涡旋振荡器，奥然科技；回旋振荡器，金坛市恒丰仪器厂；氮吹仪，天津市旗美科技有限公司；台式离心机，上海安亭科学仪器厂；脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱，华安麦科；DON快检试剂条，美国Charm Rosa。

1.2 样品前处理

1.2.1 高效液相色谱仪法

称取（25±0.01）g小麦磨碎试样放入具塞三角瓶（100 mL）中，然后加入5 g聚乙二醇，加水 100 mL，高速均质（≥10000 r·min-1）1 min。离心机 10000 r·min-1离心5 min。先后用快速定性滤纸、玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液为上样液。将免疫亲和柱恢复至室温，将注射器的射器筒与亲和柱连接，放在气控操作架上进行性固定，去掉免疫亲和柱下方堵头，待原有液体流尽后，移取2 mL上样液于一次性注射器中，按照每秒1～2滴的流速缓缓流出。待液体排净后，按每次10 mL分两次共加入20 mL水淋洗免疫亲和柱，流速约为每秒1～2滴，弃去废液。准确加入2 mL甲醇洗脱亲和柱，控制每秒1滴的速度，收集洗脱液，在50～60 ℃加热条件下用N2吹干，加入1 mL上机所用流动相并涡旋30 s复溶，经0.45 μm滤膜过滤后转移至进样瓶中用于HPLC仪器分析。

1.2.2 真菌毒素检测定量设备法

称取过20目筛的5 g小麦试样至干净的离心管中；加入25 mL水，用振荡器振荡1 min左右，静置1 min，用移液枪移取1 mL上清液至小离心管中，离心机离心40 s；移取100 µL上清液至小离心管中，加入1.0 mL呕吐毒素缓冲液，涡旋混合，获取上机待测液。

1.3 上机

1.3.1 高效液相色谱仪

仪器选择二极管阵列检测器，色谱柱：ODS （250 mm×4.6 mm ， 5 µm）；其余按照《食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》（GB 5009.111—2016）第二法[6]中12.5液相色谱参考条件设置。

1.3.2 真菌毒素检测定量设备

检查孵育器的温度，确保其温度为（45±1）℃；平放检测条于孵育器中，撕开检测条薄膜至指示线；用移液枪移取300 µL上机待测液至样品室中，孵育器孵育5 min；结束孵育后，取出检测条；选择DON频道MATRIX 00，按ENTER键读取数值[7]。

2 结果与分析

2.1 不同小麦中呕吐毒素的测定结果对比

按照1.2、1.3步骤处理2022年10家县区新收获的不同样品进行检测，从表1结果来看，真菌毒素检测定量设备与高效液相色谱仪的结果差异不明显，部分结果比较接近。就数据而言，真菌毒素检测定量设备的结果相比高效液相色谱仪的结果略低，都具备参考性。

表1 10家县区新收获小麦样品中呕吐毒素的结果对比

2.2 相同小麦中呕吐毒素的测定结果对比

按照1.2、1.3步骤分6次处理同一样品并进行性检测，对比结果见表2。由表2可以看出，相同小麦进行6次处理后检测的数据中，两种设备的平均值差异不大；但对比二者的RSD差距，高效液相色谱仪较真菌毒素检测定量设备相比精密度更好，波动更小。

2.3 呕吐毒素加标回收率实验

在不含被测物质的空白小麦样品中分别加入不同浓度的呕吐毒素标准物质，按照1.2的步骤进行前处理，1.3的步骤上机操作，每个加标样品测定6次，测定呕吐毒素加标回收率，见表3。由表3可知，高效液相色谱仪3个加标样品回收率均在《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[8]规定的范围内，而真菌毒素检测定量设备在加标量500 μg·kg-1时回收率略有超标，同时，二者在浓度较低时的回收率结果均不如浓度高时回收率结果准确，可能是与稀释过程操作有关。由此可见，高效液相色谱仪测定的结果回收率更好，稳定性更高。

表2 相同小麦测定呕吐毒素的结果对比

表3 呕吐毒素加标回收率对比

2.4 呕吐毒素质控样准确度实验

按照1.2、1.3步骤处理小麦呕吐毒素质控样品，测定结果如表4。相比较而言，高效液相色谱仪测定结果数据与标准值更接近，数据准确度更高；而真菌毒素检测定量设备的数据较标准值差距略大，准确度较差。

表4 呕吐毒素质控样准确度

3 结论

本文就高效液相相色谱仪、真菌毒素检测定量设备的操作流程及结果进行分析。就操作流程看，真菌毒素检测定量设备的样品处理方法简单方便，成本低、获取结果迅速，用时较短；高效液相色谱仪前处理样品复杂烦琐、成本高、获取结果用时较长。就结果分析对比看，真菌毒素检测定量设备结果重复性较差且相对不稳定；高效液相色谱仪结果重复性好且稳定，也是国家标准中采用的方法。因此，在实验中可以结合两种方法，以真菌毒素检测定量设备测的结果为参考，高效液相色谱仪为基础，以达到实验结果更为准确的目的。只有保证脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测结的精确性，才能在以后粮食检测中出具更准确、更有代表性的数据，才能保证居民餐桌上的粮食安全，为人们的身体健康提供 保障。