羊布鲁氏菌3种检测方法效果对比试验

●许进红 董黎斗 尚建明 肖红亮

（个旧市动物疫病预防控制中心 云南 个旧 661000）

布鲁氏菌病（简称布病），是由布鲁氏菌属细菌致人畜共患的传染病——变态反应性疾病，在世界范围内威胁着人类健康和影响畜牧业发展。世界卫生组织将布病列为B 类重要传染病，我国将其列为二类传染病。羊布病主要由羊种布鲁氏菌病感染，呈急性或慢性经过，也是人布病的主要传染来源。布病的防控与净化已被列入《国家中长期动物疫病防治规划（2012～2020年）》，是动物疫病监测工作的重中之重，而检测方法的选择是布病防控与净化的关键环节。一直以来，兽医实验室都在寻找一种快速、准确的实验室检测方法来确诊布病[1]。

个旧市检测布病主要采用的血清检测方法为虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT），2020年以来，开始使用竞争ELISA（cELISA）检测。本试验共对9 个乡镇（街道）378 份羊血清平行进行虎红平板凝集试验、试管凝集试验、竞争ELISA 检测，以期为3 种检测方法在现场的使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 检测试验血清来源及饲养情况

检测试验羊血清来源于春秋两防中市内9 个乡镇（街道）40 户养羊户共378 份（其中春防羊血清186 份，秋防羊血清192 份），采样羊群均未使用过布鲁氏菌相关疫苗免疫注射，40 户养羊户中有1 户反应羊有流产临床症状，其他39 户未发现。

1.2 检测试剂

商品化布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、商品化布鲁氏菌试管凝集抗原、商品化布鲁氏菌试管凝集试验阳性血清、商品化布鲁氏菌试管凝集试验阴性血清，布鲁氏菌竞争ELISA 检测试剂盒，以上试剂均购自青岛立见诊断技术发展中心。现配含0·5%石炭酸的10%氯化钠溶液稀释液。

1.3 检测仪器

移液器、一次性移液器吸头、玻璃试管、试管架；超纯水机、（37±1）℃温箱、酶标仪等。

1.4 检测方法

按照中国农业标准GB/T18646—2018 对378份羊血清采用布鲁氏菌虎红平板凝集试验进行初筛，再采用试管凝集试验复核；同时采用布鲁氏菌cELISA 检测试验检测378 份羊血清。

2 结果与分析

2.1 检测阳性结果统计比较

检测阳性结果血清号，如表1所示。在春防采样的186 份羊血清中，用RBT 检测有1 户1 份阳性，SAT 也是1 户1 份阳性；用cELISA 检测，结果出现7 份阳性，涉及检测户数4 户（包含RBT、SAT 复核的阳性户）。秋防检测羊血清192份，RBT 阳性17 份，涉及5 户；SAT 复核后阳性及可疑16 份，涉及4 户；用cELISA 检测阳性17份，涉及3 户（阳性涉及户与RBT 及SAT 户数一致）。

表1 不同检测方法阳性血清统计情况

2.2 不同检测方法阳性率结果统计及百分率差异显著性检验

由表2可知，春秋防血清RBT 阳性率4·8%，SAT 阳性可疑率为4·5%；cELISA 检测方法阳性率为6·3%。

表2 不同检测方法阳性率结果统计

t检验计算，｜t｜=0·0717，查t0·05（∞）=1·96，说明RBT 、SAT、cELISA 检测感染布病阳性率差异不显著（P＞0·05）。

2.3 阳性结果一致性比较

将RBT 、SAT 检测阳性结果数与cELISA阳性结果数进行对比，存在结果不一致的情况，RBT 与cELISA 阳性结果相比有假阳性或假阴性情况存在；SAT 与cELISA 阳性结果相比，有假阴性情况存在。

3 讨论与结论

随着个旧市山羊养殖业的快速发展，布病的监测、防控工作越来越重要，但布病的血清学诊断方法种类较多，没有任何一种方法在操作简便性、敏感性、特异性和成本等各方面均能够令人满意[2]。在实际操作中，cELISA 在3 种方法中被认为具有较高的灵敏度，并且结果采用酶标仪进行读数，结果更加准确，适合大批量样品检测，但相比其他2 种方法检测成本较高；RBT 操作简便，反应时间短，试验结果迅速表达，成本低，同时对操作者要求低，易学易上手，适合在现场应用，但由于采取肉眼判断结果，以及受环境、温度的影响，结果误差较大，容易出现假阳性或判断不清的情况；SAT 操作比较复杂，耗时长，不适合大批量检测，主观因素影响较大，单独采用SAT 检测假阴性率较高，易造成漏诊[3]。实际监测筛查中，若出现漏检情况，则为布鲁氏菌的传播提供可能性，若出现阴性畜的误判，则会造成不必要的经济损失。因此，鉴于3 种方法各有不同的特点，可根据不同需要选择不同的检测方法，在进行大规模常规检疫或现场筛查时，为提高工作效率，降低工作量，同时提高检测准确性，可以先采取特异性稍差但成本低、操作简便快捷、敏感性较好的RBT 方法进行筛查，再采用特异性较好的cELISA 方法开展检测[4]。通过本次检测结果可知，在临床工作中可以根据需要选择不同的检测方法开展检测试验：在有可疑的布病诊断处理中，样本量较小又需要紧急诊断时，可以用布鲁氏菌RBT 开展检测；而在样本量较大时，可以用cELSIA 检测试验开展工作。