牛结核病的临床症状、病理变化及诊断方法

张建军

（乌兰察布市动物疫病预防控制中心，内蒙古 乌兰察布 012000）

牛结核杆菌病在世界各地均有发生，具有上千年的历史，曾经造成人和动物大批死亡，1882年发现其致病原是结核分枝杆菌。世界动物卫生组织（OIE）报道，全球每年新增有800～1 000万的结核病人，导致死亡的约300万人，因此，被OIE列为B类动物疫病。目前，世界上发生结核病最多的国家是印度，而我国活动性肺结核病人也有500多万，属于高负担国家之一，排名世界第二。

20世纪50年代，我国曾发生过牛结核病的大流行，当时抽样检测其阳性率高达36.4%，报道一出，立即受到极大关注，各部门积极采取有效措施，经过长期努力，使结核病阳性率大大降低。在随后的两次全国对奶牛进行流调，结果显示牛结核病的阳性率均在5%～6%。目前，我国的养牛大省发生牛结核病的概率正呈现逐年上升的趋势，目前均已高达9%，有些地区比例更高。因此，做好牛结核病的宣传与了解至关重要。本文重点介绍了牛结核病的临床症状、剖检变化、诊断方法与防控措施，以期为广大养殖户提供理论支持。

1 病 原

结核分枝杆菌分三个型：牛型、人型和禽型。牛结核病主要由牛型结核分枝杆菌引起，也可由人型结核分枝杆菌引起。牛型结核分枝杆菌可感染人，也能使其他家畜致病。禽型结核分枝杆菌可感染牛、猪和人。人型结核分枝杆菌属于细长杆菌，有直的，有微弯的，有些有分枝，一般单独或者多个平行排列；牛型结核分枝杆菌相比会短而粗，不均匀着色；禽型结核分枝杆菌相比会小而短，且形态不一，多变。

结核分枝杆菌最适生长温度为37～38℃，牛型结核分枝杆菌最适生长pH为5.9～6.9；人型结核分枝杆菌最适生长pH较高，一般为7.4～8.0；禽型结核分枝杆菌最适生长pH为7.2。结核分枝杆菌常用齐-尼二氏抗酸染色，染色后较难脱色，会被染成红色。结核分枝杆菌非常“懒惰”，生长非常缓慢，需要经半个月才能长出菌落，长出典型的菌落，呈现出粗糙型，此种菌群毒力强，也有变异菌株菌落，变异菌株菌落则呈光滑型，相比较毒力较粗糙型要弱。

结核分枝杆菌对自然界的抵抗力很强，尤其是对干燥、湿冷的抵抗力很强。据报道，在干燥的痰液中结核分枝杆菌能存活10个月，在土壤中7个月后仍然存活，在粪便中5个月后依然存活，在奶中90 d后依然存活，在冷藏奶油中可存活10个月，在干酪中可存活8个月。在-198℃可长期存活。但面对湿热和阳光直射，其抵抗力大大降低，特别是阳光直射的情况下，几分钟至几小时可使之死亡。湿热情况下，如沸水中立即死亡。常用的消毒药如10%漂白粉、75%乙醇、氯胺、4%甲醛溶液、石碳酸等均可将其杀死。

牛分枝杆菌在细胞内生长发育可以诱导机体产生相应的抗体，无内毒素产生，同时也无外毒素产生，其毒力主要和脂质有关，含量越高，毒力越强。

2 流行病学

开放型患畜是牛结核病主要传染源，病畜通过痰液、粪尿、乳汁和生殖器官的分泌物排出，健康动物通过被污染的空气、饲料、饮水经呼吸道、消化道等途径感染。如饲养环境较差，如圈舍拥挤、通风不良、饲养管理较差、营养不良等情况，会增加其患病率。此外，还可以通过直接接触、饮用牛奶等途径而传染给人，威胁人体健康。此病全年各季节均可发病。

据报道，哺乳动物中约有50多种、禽类中约有20多种可患结核病[1]，其中包括牛、猪、鹿、猴、马、绵羊、山羊、家禽等。

3 临床症状

牛结核病的潜伏期长短不一，有时达数月以上甚至数年之久。通常病初无明显症状，很难发现，当病程逐渐延长，病症才逐渐显露。主要临床症状为咳嗽、消瘦、呼吸困难，体温无变化。人型分枝杆菌和禽型分枝杆菌对牛毒力较弱，多为“无病灶反应牛”，此种牛极少有传染性。

结核分枝杆菌侵入机体后，由于其毒力和动物机体抵抗力情况不同，以及发病部位不同，症状也不同。牛结核病多侵害肺脏、乳房、肠道、生殖器、脑和淋巴结等。

肺结核：病牛病初无明显症状，但是易疲劳，常发生短促干咳，渐变为湿性咳嗽，当患病牛吸入冷空气或者含有较多灰尘的空气时，更容易发生咳嗽。听诊肺部区域会有啰音，如若胸膜发生结核病变，可听到摩擦音，又称之为“珍珠病”。随着病情进一步加重，咳嗽频次增加，并表现出明显的痛苦症状，呼吸次数逐渐增加，严重时会出现气喘现象。随着病情的发展，病牛会日渐消瘦且伴有贫血。

淋巴结核：对于淋巴结核，均会发生在发病部位临近淋巴结。常发部位有肩前、腹前、腹股沟、颌下、咽及颈部等，淋巴结肿大，但无热感，触之无痛。如果纵隔淋巴结受到侵害，则会引起慢性瘤胃臌气。如果病情无法控制，极易发生粟粒性结核，即为全身性淋巴结结核。

乳房结核：乳房淋巴结肿大，触之无热痛。初期乳汁无明显变化，随病情发展乳汁日渐稀薄，泌乳量逐渐减少甚至无乳，若发生混合感染乳汁中会有脓块。

肠结核：犊牛多发，常表现消化不良、食欲不振、便秘与下痢交替出现，动物快速消瘦。

生殖器结核：生殖器结核多引起性机能紊乱，母牛发情频繁，性欲增强。对于妊娠母畜，常引发流产。对于公牛，常导致附睾肿大，阴茎前部发生结节、糜烂等。

脑结核：表现神经症状，如癫痫、运动障碍等。

4 病理变化

牛发生结核病，在发病部位多形成突起、散在白色或灰白色的、粟粒大至豌豆大、半透明且坚硬的结核结节。切面干酪化坏死、钙化，切开有沙砾感。乳房结核多见大小不等的病灶，内有干酪样物质。胸腹膜发生结核，会形成密集结节，像极了散落的珍珠，故又被称为“珍珠病”。肠道黏膜会形成溃疡以及大小不等的结核结节。子宫黏膜下组织或肌层组织内也会发生结节、溃疡，且子宫腔含有油样脓液，卵巢肿大，输卵管变硬[1]。

5 诊断

因本病无特异症状，仅凭借临床检查很难确诊。若动物出现进行性消瘦、咳嗽、慢性乳房炎、淋巴结慢性肿大、顽固性腹泻等症状时，结合以上临床症状，根据流行病学、病理剖检变化可做出初步诊断，确诊则需要通过实验室检测完成。目前国内外实验室大多采用细菌学方法、分子生物学方法以及免疫学方法确诊。

5.1 细菌学检查法

在临床上，对于开放性结核病，最有诊断意义的方法要数细菌学检查法，此法虽为传统方法，但是临床意义重大。但由于工序繁多、耗时较长、检测率较低，已被取代。采集病料，例如病变部位、痰液、粪便、乳汁及其他分泌物，不同的病料需要采用不同的处理方法，如采取病牛痰液，首先加入2倍安替佛尼液，然后置于温箱1～2 h，离心取沉淀，再用3%醋酸溶液中和沉淀物，用纯化水反复洗涤；对于病牛粪便，称取30 g，加入15 mL安替佛尼液和55 mL纯化水，静置2～3 h，离心沉淀30 min[2]。取沉淀用棉拭子蘸取，涂片、镜检，可见外形呈棍状，没有芽孢和荚膜。将病原体分离培养并接种于实验动物进行感染试验[3]。

5.2 分子生物学方法

分子生物学诊断方法具有快速、简单、分辨率高等特点，不但可以鉴别诊断，还可以按照分枝杆菌种系进化的关系确定精确的种系。现行的特异性分子生物学诊断方法有聚合酶链式反应（PCR）、基因芯片、DNA探针检测等。目前，应用比较多的有NDA探针、PCR检测。

5.2.1 DNA探针检测

DNA探针法属于快速检测法，不但可以检测病原，还可以检测其菌株。检测操作简单，样品不需特殊处理，只需将样品DNA与已知的标记好的DNA片段探针进行分子杂交，检测样品DNA中已经标记好的基因序列即可[3]。

5.2.2 PCR检测

PCR检测法是最近几年应用比较多的方法，此法需要根据基因设计特定引物，扩增目的片段，对扩增片段进行检测，与结核病原菌基因组对比从而确诊。PCR检测快速，正确率高，不足之处是对试验仪器精密度要求高，影响因素较多，检测结果的可靠性受外界影响大[3]。

5.3 免疫学方法

5.3.1 结核菌素试验

结核菌素试验法是最具现实意义的方法，也是OIE推荐的检测方法。结核菌素试验包括两种诊断法，分别是提纯结核菌素（PPD）和老结核菌素（OT）。大多数检测方法用的是PPD试验[4-5]。

OT：根据我国现行《奶牛结核病检疫规程》规定，在临床上需要采用结核菌素皮内注射法和点眼法两种方法同时进行，如若两种方法中的任意一种显示阳性，即判定该牛为结核菌素阳性[4-5]。

PPD：诊断过程中，用纯化水将牛分枝杆菌提纯菌素稀释成10万IU·mL-1，在牛颈部中上1/3处，皮内注射0.1 mL[4-5]。

5.3.2 间接酶联免疫吸附法

间接酶联免疫吸附试验利用抗原与抗体的特异性反应，使其能够快速诊断，整个试验用时少，特异性强，操作简便，目前应用较广。但是由于此法对抗原性较弱的病原菌在共同的抗原决定簇作用下，检出效果较差，限制了其应用[3]。

6 防控与治疗

对于防控牛结核病，主要采取综合防控。首先，防止病畜传入。其次，如群体中有患病动物，则需净化牛群。第三，培育健康牛群。无结核病动物群称为健康牛群，对于此类牛群，平时应加强饲养管理，特别是平时的防疫、检疫和消毒措施，防止牛结核病的传入。健康牛群每年的春、秋两季定期进行结核菌素检疫，并结合临床检查进行分析[2-4]。

一旦检测到阳性，需要立即采取措施，对整个牛群按污染牛群对待。对于结核菌素反应阳性牛群，应按照规定定期检查，一旦发现病牛立即淘汰，从而消灭传染源。对于病牛所产犊牛，出生后3～5 d可以饲喂初乳，3～5 d后，立即由无病的母牛，即代养母牛供养或人工喂养。犊牛在出生后需要做3次检疫，分别是1月龄、3～4月龄、6月龄三个阶段，一旦检测结果呈阳性，必须进行及时淘汰[2,4]。如果3次检疫结果均呈阴性，且无任何可疑临床症状，可定为假定健康牛。假定健康向健康过渡的牛，应每隔3个月检疫一次，检测一年，直到无阳性结果为止。然后在接下来的半年内连续进行3次检疫[2-4]。如果3次检测结果均为阴性则可称为健康牛群[2,4]。

对于患有牛结核病动物的治疗，目前应用较多的是链霉素、异烟胼和对氨水杨酸钠，但治疗起来疗程较长，医疗费用大，且很难根治，只能有所改善，故目前国内外均采取加强检疫、隔离、及时淘汰、防止疾病传入的方式[6]。

7 结语

牛的结核病有着重要的公共卫生价值，对牛结核病的临床症状、剖检变化和临床诊断及防治方法的研究对养殖业有重大影响，各专业学者需要积极研究，给养殖业提供一个更好的养殖环境，从而促进经济的发展。