孕妇叶酸代谢关键基因位点多态性与早产的关系

杜濛濛，金春燕，顾志萍

(南京医科大学附属泰州人民医院医学遗传与产前诊断科，江苏 泰州 225300)

早产是一类较为复杂的疾病，已成为全球性医疗问题[1]。早产可导致新生儿出现相关后遗症，甚至死亡，增加产妇及早产儿罹患多种疾病的风险[2]。早产发病率随着地域、国家、种族等不同存在着差异，而叶酸代谢相关基因在不同地域、国家等也存在差异性[3-4]。叶酸是人体重要营养素之一，孕妇摄入叶酸不足可导致新生儿出生缺陷，甚至可能造成流产或早产[5]。5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)是人体叶酸代谢及转运的关键酶的其中一种类型。相关研究表明，MTHFR基因 C677T位点基因多态性与胎儿神经管疾病、孕妇流产等不良妊娠的发生有关[6-8]。但目前临床上关于MTHFR基因 C677T位点基因多态性与早产的关联性研究鲜有报道。基于此，本研究调查分析了孕妇MTHFR基因 C677T位点基因多态性的分布情况，并分析其与孕妇早产的关系，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2020年1月至2021年1月在南京医科大学附属泰州人民医院建立孕检档案并在孕早期做叶酸代谢关键基因筛查的221例孕妇为研究对象。纳入标准：(1)单胎妊娠；(2)临床生物化学检查结果及肝功能正常；(3)临床资料完整且随访至分娩者。排除标准：(1)患有肿瘤及心脏病者；(2)有吸烟及酗酒史者；(3)有胎盘早剥及前置胎盘等疾病者。根据孕妇分娩结果将研究对象分为早产组(n=125)和正常分娩组(n=96)。

1.2 方法

1.2.1 资料收集从医院病案管理系统收集研究对象一般资料，主要包括姓名、年龄、性别、文化程度、居住地、工作、家族史、孕次、妊娠高血压综合征、怀孕方式、孕前补充叶酸时间、孕期药物应用史、自然流产史、人工流产史、叶酸水平等。

1.2.2 基因检测采集受试者静脉血2 mL置于乙二胺四乙酸抗凝管中，应用Veriti Dx96-Well Thermal Cycler 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增仪以金磁微粒层析法检测MTHFR基因C677T位点的基因多态性。具体方法：将扩增液与反应液混合制成2种PCR 预混合液，分别标记为突变(muta tion，M)型和野生型(wild type，WT)，然后将预混合液分装，每管45 μL。然后，制作样本稀释液，取全血样本混匀，以12吸取全血及样本稀释液混匀，反应2 min后待血液呈现暗红色时进行PCR实验。在分装的预混合液中分别加入待测血液样本，阴性对照液、阳性对照液各5 μL，盖紧管盖后混匀。最后将PCR管置于PCR仪进行50 ℃ 2 min、95 ℃ 3 min 30 s、94 ℃ 5 s、60 ℃ 10 s、65 ℃ 30 s反应，共33个循环；65 ℃ 10 min；4 ℃保持。然后将PCR产物滴加至检测卡上的M孔和WT孔，2～5 min 内进行结果判读。根据检测线(T线)有无出现条带来判读C677T位点的基因型：M管产物在T线处不出现条带而WT管产物出现条带为CC型，M型管产物在T线处出现条带而WT管产物不出现条带为TT型，2个管产物均在试纸条T线处出现条带为CT型。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析所有研究对象的MTHFR基因C677T位点基因多态性符合遗传平衡(P>0.05)，说明纳入人群处于遗传平衡状态，样本具有群体代表性。

2.2 2组受试者一般资料比较结果见表1。早产组与正常分娩组受试者的年龄、体质量指数、文化程度、孕前3个月配偶是否吸烟、孕前3个月配偶是否酗酒、家庭经济情况、工作、孕次、自然流产史及人工流产史等情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。 早产组受试者中居住在乡村、有妊娠高血压综合征、通过人工辅助生殖技术怀孕、孕前补充叶酸时间为1个月及有孕期服药史者所占比例显著高于正常分娩组，差异有统计学意义(P<0.05)；早产组受试者的叶酸水平显著低于正常分娩组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 早产组与正常分娩组受试者一般资料比较

2.3 早产组与正常分娩组受试者MTHFR基因C677T位点基因型比较结果见表2。早产组与正常分娩组受试者MTHFR基因C677T位点基因型和等位基因的分布频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 早产组与正常分娩组受试者基因型比较

2.4 MTHFR基因C677T位点多态性与早产的关系结果见表3。多因素logistic回归分析结果显示，MTHFR基因C677T位点CC基因型及等位基因T分布频率是孕妇发生早产的危险因素(P<0.05)。MTHFR基因C677T位点CT、TT基因型和等位基因C分布频率与孕妇发生早产无关(P>0.05)。

表3 MTHFR基因C677T位点多态性与早产的关系

3 讨论

目前，早产遗传学相关研究主要集中于研究相关基因分型与血清生物化学指标或环境因素的相互作用[9]。通过文献检索发现，目前与早产相关的基因包括凝血相关基因、叶酸代谢相关基因及炎症反应相关基因。叶酸直接或间接参与人体多种生物化学代谢反应。有研究发现，叶酸相关基因多态性参与心血管疾病、复发性流产及唐氏综合征等多种疾病的发生和发展[10-11]。

MTHFR基因作为叶酸代谢通路中的关键酶，其在同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)转为蛋氨酸及DNA合成的过程中发挥重要作用[12]。在围孕期补充叶酸是目前全球性的公共卫生干预方案，可有效预防神经管缺陷等疾病。但流行病学调查发现，补充叶酸的效果在不同人群中存在差异[13]。有研究显示，MTHFR基因C677T位点等位基因在不同地区分布频率不同，如在河南、广西和海南地区的分布频率分别为62.1%、39.1%、26.2%[14-15]，整体上看由北到南表现为递减趋势，存在明显的地域差异性，提示不同的遗传特征对叶酸补充效果有较大影响。王连等[16]研究发现，早产孕妇的血清叶酸水平显著低于正常分娩者。本研究中早产组孕妇叶酸水平低于正常分娩组，与王连等[16]研究报道一致，提示叶酸可能参与了早产的发生，推测其原因可能为孕妇体内叶酸缺乏或者出现代谢障碍时，可导致机体血浆中HCY水平升高，机体出现生物化学功能异常，最终导致早产。

随着单核苷酸多态性的相关研究技术的快速发展，医学工作者发现叶酸代谢关键基因多态性与某些疾病的发生关系密切。ZHANG等[17]分别检测了82例自然流产者和82例正常分娩者的MTHFR基因多态性及血清HCY水平，结果显示，自然流产者血清HCY水平高于正常分娩者；该研究还发现，MTHFR基因C677T位点突变是孕妇自然流产的危险因素。MTHFR基因多态性可使相关酶活性降低，HCY水平升高，机体出现血液高凝状态或形成血栓，进而导致绒毛间细胞结构改变，引起胎儿血管灌注不良及胎盘炎症等[18]。胎盘血液循环受阻，可间接影响胎儿发育及分娩，可能导致早产。本研究比较了早产孕妇与正常分娩孕妇的MTHFR基因位点的基因型及等位基因的分布频率，结果显示，早产组孕妇MTHFR基因C677T位点基因型及等位基因分布频率与正常分娩组比较差异有统计学意义，提示MTHFR基因C677T位点多态性可能参与早产的发生。为进一步研究叶酸代谢关键基因位点多态性对早产的影响，本研究将有统计学意义的基因型及等位基因进行多因素logistic回归分析，结果显示，MTHFR基因C677T位点CC基因型及等位基因T的分布频率是孕妇发生早产的危险因素，进一步证实了叶酸代谢关键基因位点多态性与早产有关。

综上所述，孕妇叶酸代谢关键基因多态性与早产具有一定关联性，其中MTHFR基因C677T位点CC基因型及等位基因T的分布频率是孕妇发生早产的危险因素。因此，建议MTHFR基因C677T位点CC基因型及T等位基因妇女，在备孕期间及妊娠结束前都要补充足够的叶酸，以减少因叶酸代谢问题导致的早产发生。