肝细胞癌组织中PHF2表达与临床病理特征及预后的关系

杨军 孙龙 赵健全 季骊 宋辉

原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤，死亡率占恶性肿瘤前三[1-2]。目前关于肝细胞癌发生机制尚未完全明确[3]。有学者发现，PHF手指蛋白2(PHF2)参与恶性肿瘤的发生和发展[4]。PHF2是Jmjc家族成员之一，位于9q22.31，能够调控靶基因的转录。PHF2在结肠癌、胃癌组织中呈低表达，并且低表达影响预后，并能促进肿瘤进展，但在肝细胞癌作用没有完全清楚[5]，与肿瘤临床病理特征及预后关系尚不清楚。我们检测肝细胞癌病人癌组织及癌旁组织中PHF2表达情况，分析其与临床病理特征、预后的关系。

对象与方法

一、对象

2015年1月～2019年1月诊治的肝细胞癌病人121例，术前未做过任何针对本病的治疗。年龄44～81岁，平均年龄(50.50±5.15)岁；男性86例、女性35例；脉管癌栓97例；肿瘤直径1.25～11.51 cm，平均(5.26±1.45)cm；病理分级Ⅰ级16例、Ⅱ级64例、Ⅲ级26例、Ⅳ级15例；血清HBsAg阴性21例、阳性100例；肝硬化97例；吸烟史94例；饮酒史106例。纳入标准：(1)病理检查为肝细胞癌；(2)成年病人；(3)知情同意。排除标准：酒精性脂肪肝；妊娠期哺乳期；合并其他恶性肿瘤；合并代谢性疾病；血液性疾病。

二、方法

1.临床资料收集：包括年龄、性别、肿瘤直径、病理分级、血清HBsAg、肝硬化、吸烟史和饮酒史。血清HBsAg阳性标准≥20 ng/ml，阴性<20 ng/ml。病理分级参考《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中的Edmondson分级法，Ⅰ级癌细胞形态似正常肝细胞、Ⅱ级癌细胞略异型、Ⅲ级癌细胞异形明显、Ⅳ级癌细胞形态变异大。

2.肝细胞癌病人癌组织及癌旁组织中PHF2表达检测：手术取除肝细胞癌组织及癌旁组织(近肿瘤边缘2 cm)。采用免疫组化SP法。组织切片经二甲苯、不同浓度酒精脱蜡，枸橼酸钠修复抗原，过氧化物酶封闭15分钟。加入兔抗人PHF2抗体(1∶200，Abcam 公司)，4 ℃冰箱过夜。二抗1小时，3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐显色5分钟，依次通过苏木素、盐酸酒精、氨水，通过不同浓度酒精、二甲苯，封片。PHF2阳性位于细胞核。(1)染色程度：无0分，浅黄色1分,黄色2分，棕黄色3分。(2)每张高倍镜下选5个视野，计算阳性细胞百分比：<5% 为0分。5%～25%为1分，25%～50%为 2分，>50%为3分。(1)+(2)<2为阴性，≥2为阳性。

3.随访：采用电话随访及门诊复查等方式统计病人3年生存情况及生存时间，如病人失联则联系其亲属。

三、统计学方法

结果

1.癌组织及癌旁组织的PHF2表达情况比较见表1、图1。结果表明，癌旁组织中PHF2阳性表达率高于癌组织，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 癌组织及癌旁组织的PHF2表达情况比较(例，%)

A.癌旁组织(SP×20);B.癌组织(SP×20)图1 癌旁组织及癌组织PHF2表达

2.癌组织中PHF2表达情况与肝细胞癌临床资料关系分析见表2。结果表明，PHF2表达与年龄、性别、吸烟史、饮酒史无关(P>0.05)；PHF2表达与肿瘤直径、病理分级、血清HBsAg、肝硬化有关(P<0.05)。

表2 癌组织中PHF2表达情况与肝细胞癌临床资料的关系(例，%)

3.肝细胞癌病人组织中PHF2表达与预后的关系分析：PHF2阴性表达病人平均生存时间为(16.24±2.11)个月，阳性表达为(21.29±2.18)个月，差异有统计学意义(P<0.05)。见图2。多因素Cox回归分析显示，病人预后与肿瘤直径、年龄、性别、饮酒史、肝硬化、血清HBsAg无关，而与病理分级、PHF2表达相关(P<0.05)。见表3。

图2 肝细胞癌病人组织中PHF2表达与预后的关系

表3 多因素Cox回归分析肝细胞癌预后相关的危险因子

讨论

近年来肝细胞癌发病率逐渐升高，大部分病人确诊时已是中晚期，错失最佳手术时机。早期诊断对改善预后尤为重要。

PHF2也称为KDM7C，主要在正常组织表达，可通过甲基化赖氨酸进行调控基因的转录。多项研究表明，PHF2在多种恶性肿瘤组织中低表达，与肿瘤的临床病理特征、预后有关。但PHF2在肝细胞癌中的表达尚不清楚[6-8]。本研究结果显示，肝细胞癌组织中PHF2低表达，提示PHF2可能参与了肝细胞癌的发生。我们分析可能是PHF2的去甲基化，促进凋亡基因转录，导致肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖，从而抑制肿瘤生长。病理分级与肿瘤预后密切相关，分级越高病人预后越差，本研究发现PHF2表达水平与病理分级、肿瘤直径有关，可能是因为PHF2下调失去了对肿瘤的抑制作用，从而使肿瘤的侵袭、迁移等行为增强，导致分期的升高，肿瘤直径的增加。乙肝病毒是肝癌的病因之一，此类病人预后不佳。本研究结果显示，PHF2表达水平与血清HBsAg、有肝硬化有关，提示PHF2在乙肝病毒感染病人中起到特殊作用。

我们分析了PHF2表达与肝细胞癌病人预后的关系，结果显示，PHF2阴性表达病人的预后较差，与文献结果相似[9-10]。有研究显示，Wnt、P13K/AKt/mTOR信号通路在原发性肿瘤表达上调[11-12]；与肿瘤的增殖、凋亡及转移关系密切，但关于PHF2是否通过抑制Wnt、P13K/AKt/mTOR信号通路或激活P53信号通路发挥抑癌作用的尚不清楚。我们还将进一步探索PHF2是通过何种信号通路对肝癌的发生、发展及生物学行为产生影响。

综上所述，肝细胞癌病人癌组织中PHF2低表达，与临床病理特征及预后有关，有望成为潜在的靶点。