犬猫癣菌病调查及天然植物抗真菌香波功效评价

雷镒妃，肖雅夫，胡长敏*

1.华中农业大学动物医学院，武汉 430070；2.肽泽（武汉）生物科技有限公司，武汉 430075

皮肤癣菌病通常由皮肤癣菌感染引起，犬猫皮肤癣菌病主要是指由犬小孢子菌（Microsporum canis）、须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes）和石膏样小孢子菌（Microsporum gypseum）3 种致病菌感染所引起的皮肤病[1-2]。统计显示，皮肤癣菌病约占临床皮肤病病例总数的16%[3]，且由于皮肤癣菌可以通过直接接触在动物和人之间传播，因此宠主、动物爱好者等人群也易感染，故在临床上应更加重视[4]。

皮肤作为最大的免疫系统和物理屏障[5]，具有一定的防御能力，能够有效抵制病原菌的侵蚀和破坏，而当皮肤遭遇外部寄生虫感染、过敏、细菌、损伤、代谢障碍、内分泌障碍等情况时，其皮肤微生态环境则可能被破坏，对皮肤的酸碱度、湿度和温度等造成影响，为皮肤癣菌的生长和繁殖提供便利条件[6]。多项研究表明真菌的发病机制多与菌丝及其内源性蛋白有关，并且真菌的多种毒力因子均能导致疾病的发生。当皮肤癣菌定植于皮肤表面并且适于生长时，其能在毛囊口产生大量菌丝伸入毛囊，吸取机体的营养以供自身大量繁殖，同时破坏毛囊、毛根及毛球上部的角质，并分裂形成紧密的孢子或分节菌丝[7-8]，故在降解皮肤角质层的同时也将宿主皮肤作为营养源供给自己，引起毛发病变及皮肤炎症。

犬猫皮肤癣菌病的治疗，现阶段常用方法主要为采用抗真菌药浴或使用酮康唑、伊曲康唑及特比萘芬等抗真菌药物。随着抗真菌药物的临床应用日益广泛，其耐药性逐渐给真菌感染治疗带来严峻挑战[9]。天然植物类抗真菌药物具有高效、低毒及低残留特点，临床应用日益广泛。本研究拟对一款天然植物抗真菌香波防控犬猫真菌感染的功效进行初步评价，以期为临床犬猫真菌性皮肤病的治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材 料

石膏小孢子菌ATCC 42890、须毛癣菌ATCC 28185 购于上海嘉楚生物工程有限公司。沙氏葡萄糖琼脂培养基（sabouraud dextrose agar，SDA）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（potato dextrose agar medium，PDA）及皮肤霉菌试验培养基（dermatophyte test medium，DTM）购自青岛海博生物技术有限公司。天然植物抗真菌香波为肽泽（武汉）生物有限科技公司产品（20200701），另外2 种对照香波为市售产品（下称对照1、对照2）。

1.2 临床病例

2019—2020 年度华中农业大学动物医院皮肤癣菌病例，以及2020 年收集的使用天然植物抗真菌香波治疗的病例。

1.3 抗真菌香波的体外评价

1）真菌培养及镜检。将石膏小孢子菌及须毛癣菌分别接种于SDA、PDA 及DTM 培养基，置于28 ℃培养箱培养7 d。将培养好的真菌使用乳酸酚棉兰染色液染色并镜检。

2）天然植物抗真菌香波抑菌效果评价。

①真菌菌液制备。使用5 mL 无菌生理盐水冲洗生长良好的真菌并收集菌液，通过细胞计数器将菌液的孢子浓度调整为108CFU/mL，随后将200 μL菌液均匀涂布于沙氏培养基上。

②药敏纸片制备。分别吸取天然植物抗真菌香波原液、对照1 及对照2 与无菌水进行1∶10 稀释；将滤纸剪成直径10 mm 的圆形小滤纸片，分别放入上述稀释液中浸湿，随后晾干备用。

③抑菌试验。所有样品重复上述步骤，接种后每日观察记录真菌生长情况，并置于28 ℃培养箱中倒置培养，7 d 后出观察结果，测量抑菌环的直径，其边缘以肉眼看不到真菌明显生长为限。

1.4 抗真菌香波功效评价

选择仅患皮肤癣菌病的犬猫，应用天然植物抗真菌香波进行药浴，对患病动物精神状态、病灶清洁度与严重程度、主要临床表现等情况做观察记录。初次采样后，将患病动物用温水浸湿，全身涂抹天然植物抗真菌香波原液，揉搓按摩5～10 min 后冲洗干净，1 周后再次进行评价。治疗效果通过临床症状的恢复情况以及2 次真菌的培养结果进行使用评价。鉴于真菌性皮肤病有反复发作的特性，所以使用抗真菌香波动物的临床症状消失后，仍然持续使用香波2～4 次防止复发。

2 结果与分析

2.1 发病特征调查

共收集犬猫皮肤癣菌病115 例（表1）。犬19 个品种64 个病例，患病占比最高的品种为串种犬，患病数16 例，占比25.0%，其次为泰迪犬，患病数7例，占比10.9%，其他品种患病占比均小于10%。猫8 个品种50 个病例，患病占比前3 的品种为英国短毛猫，患病数24 例，占比48.0%；布偶猫10 例，占比20.0%；田园猫9 例，占比18.0%，其他品种猫则少数发病。

表1 犬猫皮肤癣菌病与品种的关系

犬猫皮肤癣菌病与性别、年龄的关系如表2所示，犬患皮肤癣菌病的雌雄比为28∶37，患病年龄主要集中于1～3 岁（34/51，占比66.7%）；猫患皮肤癣菌病的雌雄比为23∶27，患病年龄主要集中于1～3岁（19/40，占比47.5%），其次是小于1 岁的猫（16/40，占比40.0%），大于3 岁的猫患病数较少。

表2 犬猫皮肤癣菌病与性别、年龄的关系

皮肤癣菌能导致犬全身性感染，其中背部、四肢与颈部的感染率较高，猫背部和耳朵有较高感染率（表3）。

表3 犬猫皮肤癣菌病与患病部位的关系

2.2 抗真菌香波体外评价

1）分离菌株的菌落形态。SDA 平板培养菌落生长出现典型纹状沟，初始生长菌落表面呈白色粉末状，背面为黄色，随着培养时间延长，表面逐渐变为灰色（图1a）；PDA 平板培养菌落较稀疏，呈现中心向四周放射状，菌落表面呈白色，背面中心为白色，周围呈黄色（图1b）；DTM 培养基颜色呈灰青色（图1c）。

2）乳酸酚棉兰真菌染色液染色镜检。分离菌株采用乳酸酚棉兰真菌染色液进行染色，染色结果见图2，镜检结果显示菌丝周围有大量呈现纺锤形的分生孢子，孢子分隔区域大于6 个，且孢子两端呈现帽样结构，推测为犬小孢子菌的大分生孢子。

3）抑菌试验。抑菌试验结果表明，天然植物抗真菌香波对须廯毛廯菌的抑菌圈大小为12 mm，较对照品1 抑菌圈（8 mm）及对照品2 抑菌圈（6 mm）分别增加50%及100%。天然抗真菌香波对石膏样小孢子菌的抑菌圈大小为23 mm，较对照1 抑菌圈（10 mm）及对照2 抑菌圈（12 mm）分别增加130%及91.7%。天然抗真菌香波对临床真菌菌株F3 的抑菌圈大小为15 mm，较对照品1 抑菌圈（5 mm）及对照品2 抑菌圈（3 mm）分别增加200%及400%。

2.3 抗真菌香波体内评价

受试犬猫25 只，按要求使用香波的犬猫17只，在使用3 次天然植物抗真菌香波后，15 只犬猫抓挠现象减少，患处皮肤红肿面积减小，痂皮脱落，毛发恢复状况良好（图3）。

3 讨 论

统计分析发现，泰迪犬等犬种以及田园猫及英短猫等品种猫均有皮肤癣菌病的病例，几乎所有常见的犬猫均可感染真菌，罹患皮肤癣菌病。从易患犬猫品种来说，泰迪犬、金毛犬以及布偶猫等毛发浓密犬猫更易携带真菌病原。由于上述犬猫毛发厚实，如果长时间缺乏护理，更易导致真菌的感染[2]。

本研究结果显示，幼龄犬猫更易患真菌性皮肤病，这与朱重伟[10]的报道一致。转铁蛋白被证实在犬猫皮肤免疫方面具有重要作用[11]，小于11 月龄的犬缺乏合成转铁蛋白的能力。此外，幼龄犬皮肤结构如皮脂腺发育不完善，皮肤分泌不饱和脂肪酸不足，降低了对真菌的灭杀作用。报道[12]显示，随着年龄的增长，皮肤结构发育逐渐完善，犬猫对真菌的抵抗力也逐渐增强。

本研究结合药敏纸片扩散法进行了天然植物抗真菌香波及对照品的抑菌试验，结果显示天然植物抗真菌香波的抑菌效果优于对照品。体内评价试验也证实，使用天然植物抗真菌香波后，皮肤癣菌病的患病动物病变及临床症状恢复良好。

天然植物抗真菌香波是一款专用于患皮肤癣菌病的动物的洗护产品，其主效成分包括厚朴提取物、紫苏叶提取物及穿膜肽。研究发现和厚朴酚有抗炎、抗菌、抗肿瘤等作用，尤其对真菌，如犬小孢子菌、须毛癣菌以及白色念珠菌抑制作用明显[13]。紫苏叶是一年生药食两用植物，其在试管内能抑制葡萄球菌生长，紫苏醛起主要抑菌作用，在天然抑菌剂的开发上有着潜在的应用价值[14]。细胞穿膜肽（cell penetrating peptides，CPPs）是一类能与外源生物活性大分子（如核酸、蛋白质等）结合，通过内吞或直接穿透细胞膜而将外源活性物质递送进细胞内且不会损坏细胞膜结构的小分子短肽。CPPs 自身的多肽属性，使其进入细胞后能被正常分解，具有良好组织相容性，细胞毒性小，是多数药物靶向治疗的理想载体[15]。综上，结合天然植物抗真菌香波体内外评价结果，确定天然植物抗真菌香波能有效预防和改善皮肤癣菌性疾病，具有一定临床使用价值。