肺炎支原体肺炎患儿T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平与喘息的关系

张晓艳，李涛，王萍萍

(亳州市中医院儿科，安徽 亳州 236800)

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)感染通常见于儿童和青少年[1]。肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MMP)是由MP引发的呼吸道和肺部的急性炎症改变，临床表现多样，主要为肺部湿啰音、气促、咳嗽，部分患者可见喘息。近年来，MMP发病呈现小流行趋势，且发病出现小年龄化特点[2]。有研究[3]报道，MMP的发生不仅与MP直接侵入呼吸道有一定关系，也与免疫功能失调密切相关。近年来的相关研究解释是因为MP感染与反复喘息发作有一定联系，说明MP感染会导致机体免疫功能紊乱[4]。T淋巴细胞亚群是免疫系统失衡的指标，对于诊断免疫功能异常等有重要意义。同时辅助性T细胞在免疫反应中扮演中间过程的角色，通过增生、扩张产生其他免疫细胞，Th1可分泌γ-干扰素(γ- interferon，IFN-γ)，Th2可分泌白细胞介素-9(Interleukin-9，IL-9)[5]。本研究旨在探讨肺炎支原体肺炎患儿T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平与喘息的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年7月至2021年12月亳州市中医院收治的96例MMP患儿为观察组，同期93名体检各项指标正常的儿童为对照组。观察组中，男性50例，女性46例；年龄(8.93±2.15)岁；体重(23.45±3.24)kg。对照组中，男性48名，女性45名；年龄(8.82±2.11)；体重(22.63±3.215)kg。本研究经院伦理委员审核批准，家属知情同意，两组对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患儿再根据肺部听诊连续3 d有无哮鸣音分为喘息组(n=37)和非喘息组(n=59)。

纳入标准：(1)临床资料齐全；(2)临床诊断符合第7版《实用儿科学》[6]中MMP诊断标准；(3)对照组儿童无其它过敏史，近期无任何感染性疾病。排除标准：(1)非首次治疗者；(2)凝血功能或免疫功能异常者；(3)合并其他器官并发症者；(4)认知功能异常，无法正常交流者。

1.2 方法

所有对象均于清晨空腹状态采取外周静脉血5 mL，分别放置于采用肝素抗凝的真空采血管和非抗凝管，及时送检。其中采用肝素抗凝的真空采血管加入对应的淋巴细胞亚群的荧光抗体10 μL，混合放置暗室下孵育，加入稀释完成的溶血素裂解红细胞，再次混合放置暗室下孵育，离心，洗涤后应用流式细胞检测仪器检验CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。非抗凝管标本3 000 rpm离心10 min，采取上清液，应用酶联免疫吸附法检测IL-9(货号:WTA4529，购自上海逸星生物科技有限公司)及IFN-γ(货号：ELSH007，购自福因德科技(武汉)有限公司)水平。观察组采用微型呼气峰值流量计检测其呼气峰值流量(peak expiratory flow，PEF)，男性：PEF(L/min)=5.29×H-427.1；女性：PEF(L/min)=4.94×H-399.8；H为身高(cm)。

1.3 观察指标

(1)两组T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平；(2)喘息组和非喘息组患儿T淋巴细胞亚群、IL-9、IFN-γ水平及肺功能；(3)T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平与肺功能的相关性。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 两组T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平比较

观察组CD4+、CD4+/CD8+低于对照组(P<0.05)；CD8+、IL-9及IFN-γ水平高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平比较

2.2 喘息组和非喘息组患儿T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平比较

喘息组患儿CD8+、IL-9、IFN-γ水平高于非喘息组(P<0.05)；CD4+、CD4+/CD8+及PEF低于非喘息组(P<0.05)。见表3。

表2 喘息组和非喘息组T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平比较

2.3 T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平与肺功能的相关性

相关分析显示，CD4+、CD4+/CD8+与PEF正相关(r=0.627、0.549，P<0.05)；CD8+、IL-9、IFN-γ与PEF负相关(r=-0.273、-0.685、-0.417，P<0.05)。见图1。

3 讨论

目前对于MMP的发病机制临床尚未有统一观点，但多数研究认为与MP直接侵入、呼吸道上皮吸附和免疫功能失衡有关[7-8]，尤其近年来免疫功能失衡备受临床关注。

有研究[9-10]指出，在MMP发病过程中体液免疫和细胞免疫均扮演着重要角色，主要是因为体液免疫和细胞免疫的混乱，主要表现为T淋巴细胞和B淋巴细胞在体内异常，从而刺激补体系统活化。其中T淋巴细胞根据表面抗原可分为CD4+辅助T淋巴细胞、CD8+辅助T淋巴细胞，CD4+经辅助T淋巴细胞分泌，积极与MHCⅡ类分子的非多肽区相结合，对Th细胞TCR识别抗原过程具有特殊作用[11-12]。同时，CD4+辅助T淋巴细胞可联合CD3+辅助T淋巴细胞激活CD8+分化，从而加入细胞免疫和体液免疫过程中，而CD8+可阻止免疫反应[13]。曾有国外学者发现在MMP患者中CD4+出现明显下降，而CD8+显著上升[14]。另一方面，T淋巴细胞可分为辅助性T淋巴细胞，能识别外来抗原，刺激、分化并形成正反馈，可激活T淋巴细胞和B淋巴细胞分化为浆细胞和记忆细胞，行使免疫功能[15-16]。此外，其接受抗原后，可分化为效应细胞，主要见于CD4+T细胞根据其细胞因子和生物学作用，可分为Th1、Th2。 Th1细胞介导的细胞免疫反应，如IFN-γ；Th2细胞介导传导液免疫反应，如IL-9[17-18]。由此可见，辅助性T淋巴细胞在人体免疫功能中发挥着非常重要的作用[19]。基于此观点，国内外有研究[20-21]表明，IFN-γ可激活单活巨噬细胞系统从而推动CD8+T细胞联合自然杀伤细胞扫除MP，可预防MP感染。本研究显示，观察组CD4+、CD4+/CD8+低于对照组(P<0.05)；CD8+、IL-9及IFN-γ水平高于对照组(P<0.05)；且喘息组CD8+、IL-9、IFN-γ水平均高于非喘息组(P<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+及PEF低于非喘息组(P<0.05)，说明T淋巴细胞和辅助T淋巴细胞在MMP患儿中水平失调，且在喘息患儿中更为明显，原因可能是T淋巴细胞和Thl分泌的IFN-γ和Th2细胞分泌的IL-9均参与了MPP呼吸系统免疫损坏过程。

同时MP感染是伴有肺外多系统并发症原因，有研究猜想原因可能是MP抗原和一些人体组织的存在在与一些常见的抗原中，它通过刺激机体，产生对应自身抗体，从而激活补体、免疫细胞，易损伤多系统免疫[22]。身体扫除病原体的同时，可释放炎症因子和细胞，可造成THL/Th2比例失调并刺激B细胞产生的因子IgE和嗜酸性粒细胞的合成和分泌增加，从而出现喘息[23]。PEF是测定喘息的判定指标，也是检测肺通气功能指标，其数值可反映气道的变化，被临床广泛应用于哮喘病情评估中。国内外有研究通过检查MMP患儿肺功能，包括喘息患儿和非喘息患儿，PEF出现降低，认为是MMP导致的混合性通气功能发生障碍的原因[24-25]。本研究显示，CD4+、CD4+/CD8+与PEF正相关(P<0.05)，CD8+、IL-9、IFN-γ与PEF负相关(P<0.05)，提示MPP患儿喘息中存在T淋巴细胞亚群、Th1及Th2细胞因子失调，可能参与了MPP患儿喘息发病过程，机制可能是Th2细胞分化，刺激IL-4分泌过多，促进B细胞和嗜酸性粒细胞的活化分化，产生大量特异性IgE和IgG，进而引起嗜酸性粒细胞在气道中被收集、趋化和浸润，从而引发气道炎性反应。

综上，T淋巴细胞亚群、IL-9及IFN-γ水平失调参与了肺炎支原体肺炎发病过程，在MPP患儿喘息发生发展中有重要意义。