鸡链球菌的培养分离鉴定及药敏试验

王 宇，孙玉林

（1.官渡区动物疫病预防控制中心，云南 昆明 650201；2.昆明市技术合同认定登记站，云南 昆明 650201）

动物链球菌病常见于猪、牛、羊、马、鸡等。链球菌病的临诊表现多种多样，可以引起各种化脓疮和败血症，也可表现为局部感染[1]。药物滥用导致的耐药性，已经给疾病防治带来了新问题，如何减少细菌耐药性已经成为重点关注的问题。对患病鸡病料采集、分离培养、染色镜检，生化实验、病原鉴定及药敏试验，发现链球菌对环境适应能力强，易产生耐药性，可根据药敏结果为养殖场合理用药提供依据，为诊断该疾病提供参考，减少养殖经济损失。

1 材料与方法

1.1 试验时间地点

材料病例来自昆明市某养殖场，试验于2020年2月20日至3月20日在云南农业大学兽医实验室内开展。

1.2 临床症状

该养殖场养鸡1 000多只。主诉鸡昏睡、消瘦、呼吸困难、有腹泻，没有任何异常情况下突然病死。死前食欲良好，没有经过药物治疗。挑选症状较明显病鸡8只检查，另外解剖病亡鸡2只。

1.3 检测方法

对病鸡病变脏器取样进行细菌分离培养、生化实验、药敏试验等实验室诊断。

2 检测结果

2.1 细菌分离培养结果

分离培养得到的菌株在鲜血琼脂平板上生长良好，未见明显溶血，呈露滴状，边缘整齐，表面光滑、湿润，有灰白色光泽，不透明，见轻微的α溶血环（见图1）。

图1 鲜血平板的菌落生长状况

2.2 染色镜检结果

对所分离到的可疑菌株进行革兰氏染色，并于10倍目镜×100倍物镜下镜检，观察到紫色的短链状（见图2）。

图2 分离菌株显微镜下形态

2.3 生化实验结果（表1）

表1 细菌生化实验结果

该生化指标符合链球菌属生化特性。链球菌与乳糖、蔗糖、棉实糖、海藻糖的反应为阳性；与甘露醇、山梨醇的反应为阴性；与七叶苷反应缓慢；与水杨苷反应不明显。从以下生化结果来看此菌为链球菌。

2.4 药敏试验结果（表2）

表2 药敏试验结果

按《抗菌药物药敏试验判断标准》抑菌圈≥20 mm为极敏、15（含）～20 mm为高敏、10（含）～15 mm为中敏、＜10 mm为低敏[2]。

7种药物为极敏，药物抑菌圈直径分别为羧苄西林27 mm、头孢氨苄22 mm、卡那霉素25 mm、头孢哌酮21 mm、哌拉西林28 mm、头孢曲松22 mm、头孢拉定20 mm；2种高敏药物为青霉素16 mm、新霉素18 mm；四环素14 mm为中敏。

3 讨 论

3.1 结果分析讨论

根据上述病死鸡发病情况、临床症状、细菌染色镜检及分离培养特性，结合生化实验结果，判定从病料中所分离到的病原菌是链球菌。在鸡肠道链球菌是正常菌群的组成部分之一，饲养环境中广泛分布，属于一种条件性的致病菌[3]，此次试验没有进行具体的分群。

3.2 发病原因与防治

此病发生与应激因素有关，如气候变化、温度偏低、潮湿拥挤、饲养不当、不清洁的饮水和劣质的垫料等都能导致链球菌病的发生[4]。因此，预防的关键要从减少应激因素、搞好鸡舍环境卫生、抓好定期带鸡消毒、减少和消灭环境中的病原菌体，保持饮水器具清洁卫生几方面着手[5]。

3.3 需鉴定的原因

链球菌病从发病季节及各种特征，临床症状上与其他细菌性病极其相似，因此发病时仅靠临床症状和病理变化不能准确判断，必须通过细菌分离培养、鉴定，才能与其他易混的细菌病区别开来，并进行有效治疗，才能减少相应的经济损失。

4 结 论

通过对鸡肺脏和心脏组织细菌的培养分离鉴定为链球菌；通过药敏试验得出羧苄西林、头孢氨苄、卡那霉素、哌拉西林、头孢哌酮、头孢曲松、头孢拉定对链球菌反应为极敏；青霉素、新霉素反应为高敏；四环素反应为中敏。