2021年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析

陈斯奇，邱国斌，陈朝阳，陈新华，李彦芳，屈勇刚

（1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.第四师畜牧兽医站，新疆 克拉玛依 835216）

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病为主要症状的病毒性传染病，因能导致发病猪出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故称“蓝耳病”。该病被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的动物疫病，我国将PRRS列为二类动物疫病，于2008年规定为免疫接种病种[1-2]。自1987年在美国首次发现以来，猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）已于全球范围内广泛存在，给世界养猪业造成了巨大经济损失。目前，我国几乎所有生长阶段猪群均存在PRRSV，严重威胁我国养猪业健康发展。由于目前此病没有非常有效的治疗方法，猪群的免疫效果评价以及补免工作的开展在PRRS防控中起到了积极的作用[3]。

为了解2021年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征的免疫抗体水平，本试验采用猪繁殖与呼吸综合征病毒的酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测试剂盒对新疆4个地区（石河子、塔城、库车、克拉玛依）的12个规模化养猪场的382份血清样品进行抗体检测及分析，以期为新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征防控工作提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2021年1—12月期间，从新疆4个地区（石河子、塔城、库车、克拉玛依）的12个规模化猪场采集血液样品382份。

1.2 材料与仪器

PRRSV的ELISA抗体检测试剂盒（北京爱德士元亨生物科技有限公司）；兽用一次性采血器5 mL（武汉民生医用器械有限公司）；自动酶标仪（美国BioTek公司）；微量移液器（德国Eppendorf公司）。

1.3 方法

1.3.1 样品的处理 用一次性兽用采血器从待检猪只的前腔静脉采血3～5 mL/头，在室温下静置，待血清析出后，将析出的血清收集于EP管内，放于4 ℃冰箱内保存待检。

1.3.2 间接ELISA检测法 本试验严格按照PRRSV的抗体检测试剂盒说明书进行操作，使用前将所有试剂恢复至18～26 ℃。

使用前先将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水10倍稀释，用样品稀释液40倍稀释待检血清样品。取出抗原包被板，分别将100 μL的阴性对照血清和阳性对照血清加入孔内，各加2孔。在其余孔中加入100 μL已稀释好的血清样品，于18～26 ℃条件下孵育30 min。用洗涤液洗板3～5次后，每孔加入100 μL酶标抗体，在18～26 ℃条件下再次孵育30 min，洗涤3～5次，拍干各孔残留的洗涤液。每孔加入100 μL TMB底物液，孵育15 min，每孔加入100 μL终止液，终止反应，置于酶标仪中，测定OD650nm值，记录并保存数据。

1.3.3 结果判定 本试验成立必须满足：阳性对照的平均OD值与阴性对照的平均OD值的差≥0.150，且阴性对照的平均OD值≤0.150。

S/P≥0.40为阳性，S/P＜0.40为阴性（其中S=样品OD650nm值-阴性对照OD650nm平均值；P=阳性对照OD650nm-阴性对照OD650nm平均值）。

1.3.4 数据分析 根据试验数据，计算出不同地区和各养殖场的PRRSV抗体的阳性率、S/P平均值、标准差以及离散度[离散度用变异系数表示，变异系数=（标准差÷S/P平均值）×100%]；使用SPSS软件对试验结果进行统计分析。

2 结果

2.1 不同地区PRRSV抗体检测结果

4个地区的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体平均阳性率均高于国家标准（70.00%），不同地区之间猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体水平存在差异，其中石河子和克拉玛依2个地区间差异显著（P＜0.05）。石河子、库车和塔城3个地区的抗体离散度较高，分别为88.76%、80.96%、76.31%，结果见表1。

表1 新疆不同地区PRRSV抗体检测结果

2.2 不同养殖场PRRSV抗体检测结果

12个规模化养殖场（用A～L表示）的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体平均阳性率为80.10%，高于国家规定水平（70%）；S/P的平均值为（0.579±0.306），变异系数为82.98%。其中，75%的养殖场（9/12）PRRSV抗体阳性率高于国家规定标准，I、K和L等3个养殖场的阳性率分别为42.1%、53.84%和38.71%，未达到国家规定标准（70%）。50%的养殖场（6/12）的PRRSV抗体变异系数高于60%，抗体离散度较大。不同猪场之间的PRRSV抗体水平存在差异，个别猪场之间PRRSV抗体水平差异显著（P＜0.05），结果详见表2。

表2 新疆部分地区12个规模化养猪场PRRSV抗体检测结果

3 讨论与分析

2021年新疆部分地区PRRSV抗体平均阳性率为80.10%，4个地区PRRSV抗体阳性率均高于国家标准，75%的养殖场PRRSV抗体阳性率达到国家规定标准，整体免疫效果较好。2016年陆民等曾对克拉玛依的PRRSV抗体水平进行调查发现，该市5个地区的抗体阳性率均高于94.58%[4]。常军帅等[5]、王紫阳等[6]分别对2019年和2020年新疆部分地区规模化猪场的PRRSV抗体进行检测发现，PRRSV抗体平均阳性率分别为92.82%和78.49%。由此可见，近年来新疆地区的PRRSV抗体水平呈现下降趋势。

虽然，新疆4个地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体阳性率均高于国家标准，但均不能达到规模化养猪场控制猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫情水平，石河子、库车和塔城地区3个地区PRRSV抗体离散度较高。可能是疫苗质量不高、疫苗的保存和注射操作不规范、免疫程序不合理等原因引起的。这些地区相关部门不能掉以轻心，应对当地PRRS防控工作进行查漏补缺，严格规范免疫操作，及时优化免疫程序，从而确保本地猪群的健康。

不同养殖场之间PRRSV抗体水平差异较大（38.7%～100.0%），A、B、E、G、I、K和L等7个猪场的PRRSV抗体水平较低，离散度较大，免疫效果较差。这些猪场应及时补免PRRSV疫苗，1个月后再次采血检测抗体，直至所有猪群均具有高水平的PRRSV抗体，以确保猪群的健康生产。新疆地区PRRSV抗体平均变异系数为82.98%，抗体水平离散度较大，相关单位应高度重视，尽快找出原因并加以解决，确保新疆地区养猪业的顺利发展。