长大二元母猪DIS3L2基因与总胎次产仔数和总胎次活仔数的性状关联分析

王大林，刘永刚，李昌武，谢式云，廖 柱

（1.罗牛山股份有限公司，海南 海口 570125；2.云南农业大学，云南 昆明 650000；3.海南罗牛山畜牧有限公司，海南 海口 570100）

在我国畜牧生产中，猪的养殖生产占有重要地位，猪产仔数对商品猪生产的意义不言而喻。因此，发掘及筛选长大二元母猪高产仔数相关的基因及分子标记，并积极用这些基因或分子标记，以促进养猪生产，提升经济效益具有重要的意义。DIS3L2（DIS3 Like 3'-5' Exoribonuclease 2，DIS3 3'-5'外切核糖核酸酶2），是一种高度保守的3'-5'外切核糖核酸酶[1]，DIS3L2在RNA代谢中起到关键作用，并参与多种生物学和生理过程，如细胞分裂、增殖、分化和凋亡[2-3]。Ching-Jung等[4]的研究表明，DIS3L2的损失完全阻断了雄性果蝇的精子发生，导致雄性不育，同时揭示了异常的基因表达程序，并表明非编码RNA可能优先受到DIS3L2的影响。但截至目前，大多关于DIS3L2的研究是关于人类Perlman（帕尔曼）综合征，其主要表征为胎儿羊水过多、巨大儿、独特面部外观等[5]，造成该疾病具有此临床特征的主要原因是由RNA代谢紊乱引起的，虽然DIS3L2的确切靶标尚未被表征，但在细胞模型中已经确认DIS3L2低表达与细胞生长和分裂过程中出现异常有关[6-8]。目前还未见关于利用猪DIS3L2基因作为长大的二元母猪产仔数的遗传标记来进行长大二元母猪产仔数标记辅助选育的报道。本文为确定DIS3L2基因PCR-TaqI-RFLP多态性位点与长大的二元母猪产仔数差异是否相关，建立的PCR-TaqI-RFLP方法进行多态性检测，以分析猪不同基因型与总胎次活产仔数的相关关系。

1 研究目的

探明DIS3L2基因与长大母猪的总胎次产仔数是否存在关联，探明DIS3L2基因与长大母猪的总胎次活仔数是否存在关联。试验于2021年在海南海口进行。

2 材料与方法

2.1 试验猪群及数据分析

随机选择200头7胎龄的长大二元母猪为试验材料，采用PCR-TaqI-RFLP方法进行多态性检测，并分析猪不同基因型与产活仔数的相关关系。采用Statistical Analysis System （SAS）统计软件GLM程序进行单标记方差分析并进行显著性检验，所采用模型为：Yijk=μ+Gi+Yi+Pk+eijk，Yijk为性状表型值，μ为平均值，Gi为基因型效应（包括基因加性效应和显性效应；加性效应用1、0和-1分别代表AA、AC和CC基因型，显性效应用1、-1和1分别代表AA、AC和CC基因型）；Yi、Pk为固定效应，分别为年度和胎次效应；eijk为残差效应。

2.2 试验方法

（1）从猪耳组织中提取基因组DNA，根据猪DIS3L2基因序列和所述的两条遗传标记特异引物（表1），用该两条引物在猪基因组DNA中进行PCR扩增，PCR程序为：94 ℃ 4 min，35个循环94 ℃ 50 s，57 ℃ 45 s，72 ℃ 50 s，然后72 ℃10 min，最后4 ℃终止反应，PCR反应体系：2.0 μL DNA（100 ng），2.5 μL 2 mmol/L mixed dNTPs，2.5 μL 10×Taq DNA polymerase buffer，2.5 μL 25 mmol/L MgCl2，1 μL 20 μmol/L引物1，1 μL 20 μmol/L第2引物，2 unit of Taq DNA polymerase（1 U/μL），11.5 μL无菌水，最后得到PCR产物。

表1 DIS3L2基因作为长大母猪总胎次产仔数和总胎次活仔数遗传标记的两条特异引物

（2）将步骤（1）中得到的PCR产物用限制性内切酶TaqI酶切，TaqI酶切反应体系为：10 μL PCR产物，7 μL无菌水，1 μL Taq I（10 U），2 μL 10×buffer。PCR产物TaqI酶切反应条件为：混合物在水浴锅65 ℃恒温加热4 h。在2%的含有EB（溴化乙锭）的琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，凝胶成像系统观察并记录基因型。

3 结果与分析

3.1 试验结果

根据条带差异，可分为3种基因型，具有228 bp、176 bp 2条带的是AA型，只有404 bp 1条带的是CC型，同时具有404 bp、228 bp、176 bp 3条带的是AC型（图1）。

图1 长大母猪DIS3L2基因分型检测结果

3.2 DIS3L2基因型与长大二元母猪产仔数的关联分析

在200头长大二元母猪群中进行了不同基因型与产仔数间关联分析，统计分析结果总结见表2。

表2 DIS3L2基因型与长大二元母猪产仔数的关联分析

4 结论与讨论

由结果可以看出，在长大二元母猪中，基因型AA及AC个体的总胎次产仔数和总胎次活仔数极显著高于CC基因型个体（P<0.01）。通过选留DIS3L2基因位点含有A等位基因的长大二元母猪个体作为种畜，可以提高其总胎次产仔数和总胎次活仔数。