放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6和CD10在早期胃癌诊断中的价值*

郑倩，彭昌能，曹慧秋，张晓梅

（1.郴州市第一人民医院 消化内科，湖南 郴州 423000；2.中南大学湘雅医院 消化内科，湖南 长沙 410008）

胃癌通常起源于胃黏膜上皮，好发于50 岁以上的人群，具有明显地域差异[1]。我国是胃癌高发国家，发病率呈逐年上升趋势，且病死率高，威胁人们的身心健康[2]。胃癌的诊治时机与患者预后相关，进展期胃癌患者在行胃癌根治术等综合治疗后，5年生存率不及20%，给国家和家庭带来了沉重的负担[3]。因此，胃癌的早诊早治对改善患者预后，具有重要临床价值。放大内镜的原理是在常规内镜上增加变焦镜头，起到组织光学放大的作用，已逐渐用于早期胃癌的诊断，其不仅能够观察到胃小凹的变化，还能显示胃黏膜的集合小静脉[4-5]。近年来，有研究[6]发现，黏蛋白2（mucin 2，MUC2）、黏蛋白5AC（mucin 5AC，MUC5AC）、黏蛋白6（mucin 6，MUC6）和CD10 在多种恶性肿瘤中存在异常表达。本文旨在探讨放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 在早期胃癌中的诊断价值，以期为胃癌的早期诊断和治疗提供依据。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年5月－2021年5月郴州市第一人民医院拟行内镜黏膜下剥离术（endoscopic submucosal dissection，ESD）治疗的127例早期胃癌患者，收集癌组织及癌旁组织（ESD 标本距肿瘤边缘≥1 cm）。纳入的127例患者中，男78例，女49例；年龄35～74岁，平均（58.72±9.81）岁。

纳入标准：①参考共识[7]的诊断标准；②术前均行放大内镜检查；③临床资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②中晚期胃癌；③临床资料不全；④重要脏器严重异常者；⑤有精神和神经疾病者。本研究经医院伦理委员会批准通过。

1.2 主要试剂

艾博抗公司（Abcam）生产的兔抗人MUC2 单克隆抗体、兔抗人MUC5AC 单克隆抗体、兔抗人CD10单克隆抗体和兔抗人MUC6单克隆抗体。

1.3 放大内镜检查

应用Olympus GIF-H260Z电子放大内镜检查，若见可疑病灶，对可见病灶进行充分冲洗，再用0.5%亚甲蓝染色，使用变焦镜头仔细观察胃小凹颜色、结构、形态以及胃黏膜微血管，同时取活体组织标本送检。全部检查由同组具有5年以上内镜检查经验的主治医师进行。

1.4 蛋白表达测定方法

采用免疫组化法测定癌组织与癌旁组织MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 的表达。取3 μm石蜡标本切片、烤片、脱水和修复后，以3%过氧化氢处理，再用PBS溶液洗涤3次（每次5 min）。采用血清封闭30 min 后，甩去多余液体，加入MUC2 一抗（1∶500）、MUC5AC 一抗（1∶500）、MUC6 一抗（1∶500）和CD10 一抗（1∶200），在4℃下过夜；再加入二抗（1∶1 000），在37℃下孵育30 min，用PBS溶液洗涤3次（每次5 min）；显色、复染、脱水、透明和封片后，在显微镜下观察。

1.5 统计学方法

采用SPSS 23.0 统计软件处理数据，计量资料以均数±标准差（）表示；计数资料以例（%）表示，行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 放大内镜诊断准确率

127例早期胃癌患者，经放大内镜诊断准确率为85.03%（108/127）。

2.2 癌组织与癌旁组织的蛋白阳性表达率比较

癌组织MUC2 阳性表达率为61.42%（78/127），明显高于癌旁组织的11.81%（15/127）；癌组织MUC5AC 阳性表达率为54.33%（69/127），明显高于癌旁组织的14.17%（18/127）；癌组织MUC6 阳性表达率为48.03%（61/127），明显高于癌旁组织的7.87%（10/127）；癌组织CD10 阳性表达率为73.23%（93/127），明显高于癌旁组织的15.75%（20/127），差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1和附图。

附图 癌组织与癌旁组织的蛋白阳性表达（免疫组化×200）Attached fig.Positive expression of protein in cancer tissues and adjacent tissues（SP×200）

表1 癌组织与癌旁组织的蛋白阳性表达率比较例（%）Table 1 Comparison of proteins positive expression rate between cancer tissues and adjacent tissues n（%）

2.3 放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10对早期胃癌的诊断效能

放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 诊断早期胃癌，灵敏度和特异度明显高于放大内镜、MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 单独诊断（P<0.05）。见表2。

表2 放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6和CD10对早期胃癌的诊断效能 %Table 2 The diagnostic efficacy of magnifying endoscopy combined with MUC2，MUC5AC，MUC6 and CD10 protein for early gastric cancer %

3 讨论

早期胃癌指仅限于胃黏膜及黏膜下层的病变，经手术相关辅助治疗，大部分可获得良好的预后[8-9]。胃癌早期诊断尤为关键，可行ESD或内镜下黏膜切除术治疗，大部分早期胃癌能够治愈，能明显提高患者的生存质量[10]。正常胃黏膜组织无海星状及微血管改变，而早期胃癌在放大内镜下通常表现为颜色改变，部分组织表现为毛细血管、集合静脉消失，出现形态不规则的新生血管[11-14]。

MUC 是一类高分子量糖蛋白，能与脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸的跨膜糖蛋白结合，可形成凝胶状结构，发挥化学屏障作用[15]。同时，这些MUC 间接或直接介导不同的生理功能，可维持胃黏膜上皮的完整性，保护胃黏膜功能。基于MUC 的细胞表达模式，分为分泌型或结合型MUC。其中，MUC2、MUC5AC和MUC6等为分泌型MUC[16]。有研究[17]显示，MUC的非调控表达是各种炎症性疾病和癌症的明显特征，各种MUC 在不同的细胞机制中发挥着重要作用，能促使肿瘤细胞增殖和分化，促进肿瘤转移。各种MUC的异常表达可作为多种恶性肿瘤诊断的分子标志物。正常生理状态下，MUC2是小肠和大肠肠上皮杯状细胞分泌的一种黏液成分，若胃黏膜上皮发生肠上皮化生，则MUC2能够在胃肠上皮化生的腺体中出现。而MUC5AC和MUC6通常表达于胃黏膜上皮，可作为判断胃癌分化的标志物。MUC5AC在早期胃癌细胞中表达上调；MUC5AC 高表达可促进肿瘤的增殖、浸润、转移；MUC6在胃窦及胃颈部黏膜细胞中表达，胃癌细胞中MUC6 明显高于正常黏膜及腺瘤细胞的表达；MUC6 与肿瘤大小、淋巴管浸润、转移呈正相关[18]。CD10是一种参与肿瘤-间质相互作用的因子，与细胞表面糖蛋白金属酶结合，在肿瘤的发生和发展中具有重要作用[19-20]。同时，CD10 可调节局部肽浓度，介导细胞对激素产生应答；CD10 还可调节细胞的生长和分化，改变细胞间的信号通路。本研究显示，癌组织MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 阳性表达率高于癌旁组织。这表明：MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 在早期胃癌中高表达。本研究还显示，放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 诊断早期胃癌的灵敏度和特异度，明显高于放大内镜、MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 单独诊断。因此，MUC2、MUC5AC、MUC6和CD10可作为早期胃癌的肿瘤标志物，联合放大内镜能明显提高早期胃癌的诊断准确率。

综上所述，放大内镜联合MUC2、MUC5AC、MUC6 和CD10 对早期胃癌的诊断具有良好的价值，联合诊断可提高灵敏度和特异度。