一种鸡毒支原体净化方案的建立*

来庆梅，王世涛，丁爱君，刘瑞，张承新，郭龙宗**

（1.山东益生种畜禽股份有限公司，山东 烟台 265508；2.青岛农业大学，山东 青岛 266109）

鸡毒支原体（MG）引发的鸡毒支原体病是一种传染性疾病，也曾被称为鸡慢性呼吸道病（CRD）。该病一年四季均可发生，但是在冬季、春初多发，主要表现为咳嗽、呼噜、流鼻涕、甩鼻、面部肿胀、气管炎和气囊炎等呼吸道症状，剖检可见鼻腔卡他性渗出，气囊炎是其明显症状。鸡群随着年龄的增长，对支原体感染力增强，但雏鸡感染后症状表现的比成年鸡明显。产蛋期鸡群长时间感染后可引起产蛋率下降、受精率和孵化率降低等临床症状。单独鸡毒支原体感染，发病时间长，死亡率不高，仅出现轻型症状，如鼻腔轻微炎症、咳嗽等呼吸道症状；但并发感染对鸡毒支原体影响很大，常因接种新城疫疫苗或传染性支气管炎疫苗使呈隐性感染的鸡毒支原体暴发，导致机体表现出呼吸道黏膜出血，气囊、气管以及支气管出现干酪样渗出物，严重的会造成输卵管炎症，从而死亡率较高。

1 流行现状

鸡毒支原体主要引起禽类呼吸系统的病变，易感动物主要有鸡和火鸡，其中4～8周龄的鸡和5～16周龄的火鸡更为敏感，成年鸡通常呈隐性感染。鸡毒支原体病的传播方式主要为水平传播、垂直传播。水平传播即病原通过飞沫、羽毛、排泄物及被污染的饲料、饮水、笼具等接触性途径进行传播；垂直传播则主要通过阳性母鸡（阳性公鸡精液授精）经种蛋传给下一代。这样就造成鸡毒支原体在鸡群间相互传播，各代次间代代传播，故鸡群一旦感染后不易根除。1943年首次在被感染的病鸡中分离到鸡毒支原体，继而在世界范围内迅速进行传播，目前很多国家都已经有感染鸡毒支原体病例的报道。中国国内首次分离到MG是在1976 年，并在1984年之后造成了全国性传播。目前，鸡毒支原体在我国鸡场中普遍存在，感染率很高、传播的范围也比较广，同时净化的难度较大。鸡毒支原体的流行传播造成全球养禽业巨大的经济损失，也影响着养殖业的健康发展。目前，我国部分地区鸡群的鸡毒支原体感染率为 50%～80%，而且呈现越来越高的趋势。例如，青海省MG感染阳性率为51.08%，福建省MG感染阳性率达到47.22%，广东省MG 平均感染阳性率为45%，上海地区蛋鸡场 MG 抗体平均阳性率也达到97.8%[1]。随着家禽养殖业的不断发展以及养殖设备设施自动化、科技化、养殖规模扩大化的不断推进，各养殖企业的鸡群单位面积内的饲养密度不断提高，鸡毒支原体引起雏鸡慢性呼吸道疾病的发病率也越来越高，还会影响商品代的成活率、料肉比以及种鸡的成活率、产蛋量、孵化性能等，对家禽业的发展危害更加突出。

目前针对鸡毒支原体的防控体系主要为预防为主、防治结合的原则，对家禽养殖行业中的高代次种鸡公司来说，如何完成MG的净化工作、形成并维持阴性鸡群是他们亟需解决的问题。随着家禽业的不断发展以及鸡毒支原体病发病率的不断升高，鸡毒支原体的净化工作对于禽业公司来说愈发重要与迫切。

2 鸡毒支原体的净化工作

因为鸡毒支原体病的传播特性，感染鸡群后会代代传播、不易根除。对于高代次鸡群，如纯系、曾祖代、祖代鸡群来说，MG的感染意味着数以千万计的商品代雏鸡可能存在MG污染。但是因为高代次种鸡的特殊性，完全进行淘汰意味着种源与经济的高额损失，所以对污染鸡群的净化工作是现在家禽种业公司面临的重大课题。MG的净化工作可以从种蛋处理、孵化阶段处理、育雏育成期阶段筛选、建立全程生物安全体系进行，从而获得全阴性鸡群。

2.1 种蛋的处理

2.1.1 种蛋熏蒸消毒 种蛋生产场区执行严格熏蒸程序（3倍量熏蒸：42 mL甲醛+21 g高锰酸钾，时间30 min）。

2.1.2 种蛋高温处理 指将熏蒸好的种蛋使用孵化器进行高温处理，蛋内温度46 ℃，30 min。

高温处理前准备工作：首先，校准孵化器温湿度探头，然后将蛋盘一一进行百毒杀浸泡消毒，孵化机、蛋车以及孵化间进行彻底冲刷，包括机器顶部、机器左右机器板都擦拭干净，清水冲刷结束后用百毒杀或者立洁进行冲刷消毒，冲刷结束后用高锰酸钾和福尔马林熏蒸消毒，空机3倍量，带蛋1倍量。空机消毒，高：福=360 g：720 mL；带蛋消毒，高：福=126 g：252 mL。

种蛋高温处理过程：①将装好种蛋的孵化蛋盘放置于蛋车上，推入蛋车准备高温处理，同时安排人对阴性蛋库进行喷雾消毒；②设定温度为蛋内温度46 ℃进行高温处理；③待孵化器内环境温度达到30 ℃时，用盆放入孵化器内适量甲醛+高锰酸钾1倍量带蛋熏蒸消毒25 min，完成熏蒸后将容器取出；④处理完毕后取出放置于消毒后的蛋库（设置20 ℃），进行冷却备用。

2.2 孵化阶段处理

将冷却好的种蛋放入孵化器内，面板调温度为38 ℃，湿度60%，风门为0，同样在孵化器内空气温度30 ℃时进行带蛋消毒（1倍量）；孵化过程按照常规孵化流程进行管理控制即可；注意上孵、落盘、出雏过程管理：①尽量减少与其它品系种蛋、雏鸡接触，避免交叉污染；②出雏过程注意环境降尘，可间断性喷洒对人没有危害的消毒液，如卫可（1：200）。

2.3 育雏育成场区净化工作

2.3.1 空舍准备工作 做好饲养场区的冲刷消毒工作，按部就班完成相关工作。

2.3.2 消毒工作 全场鸡舍、功能间甲醛熏蒸消毒、大环境消毒液喷洒消毒后进行采样（舍内外），确定MG是否杀灭彻底。

2.3.3 笼位安排 养殖场区根据现场实际笼位数量与计划接雏数量，接鸡前提前完成鸡舍笼号编码安排。笼位安排原则：尽可能降低单笼饲养量。

2.3.4 药物禁用 饲养过程中严禁使用对支原体有净化作用的药物。

2.3.5 日常饲养管理 为避免笼位间可能出现交叉污染，禁止进行分群与调笼位工作。

2.3.6 采样工作

2.3.6.1 材料准备 棉签（4周之前使用小棉签）、离心管、标签纸、10 kg水桶（装有配好的消毒药）。

2.3.6.2 采样方法 ①准备好离心管与棉签（小头）；②每只鸡一个棉签头，一人一手保定鸡只，另一只手固定头部并借力打开口腔，另一人用灭菌棉拭子在咽喉部上腭裂采样，反复旋转至少3圈，蘸取分泌物后立即放入离心管中，剪去露出的拭子杆部，盖紧离心管盖，做好标记冷藏，尽快送检。

2.3.6.3 注意事项 ①根据每个笼饲养鸡数制定合样量（合样检测是为了加速检测，一般3个合一个样或5个合一个样），先对笼具做好顺序编号，比如1号笼8只鸡，可以分2个离心管（1-1，1-2）放置采好样的棉签头，同时做好标记；②采样过程中做好消毒工作，每个笼采样结束需要对采集人员的手臂+手在消毒桶进行浸泡消毒，注意消毒过程中避免消毒液沾染棉签；③采样对象雏鸡周龄较小，动作要轻柔。

2.3.6.4 样品保存方法 冰柜零下20 ℃保存；样品尽可能在24 h内转送研究院检测。

2.3.6.5 异常情况（发现阳性）处理措施 ①异常鸡只所在笼位的鸡只全笼淘汰，淘汰鸡只出舍前要全部处死，浸泡1：500百毒杀消毒，然后焚烧处理；②对阳性笼进行百毒杀1：500全方位喷洒消毒，同时对该阳性笼具上下左右的笼具全部鸡只再次采样送检，同时对笼具与鸡只进行百毒杀喷洒消毒；③在整个淘汰、采样以及消毒过程中，操作人员要做好个人手与手臂的消毒工作，一笼一消毒。

2.3.6.6 浸泡焚烧流程 ①舍内准备直径40～50 cm塑料桶用作浸泡消毒，将阳性鸡浸入消毒液，然后装入已消毒好的塑料袋扎口密封，每袋数量不宜过多，以刚好能进入焚烧炉焚烧为准；②焚烧：使用供暖期的锅炉进行直接焚烧（锅炉工操作），禁止将已封口的塑料袋打开再焚烧，完毕后将涉及到的地面使用消毒液喷洒。若用场内焚烧炉进行焚烧，要避免死亡鸡只暴露而造成污染。

2.3.7 场区日常防护消毒措施

2.3.7.1 入舍人员必须更换工作服，同时内勤人员对工作服进行集中浸泡消毒、清洗，每周2次并做好记录，一般消毒选择百毒杀（1：500）与卫可（1：200）交替使用。

2.3.7.2 鉴于场区硬件条件有限，员工宿舍在养殖楼内，进入鸡舍的人员必须再次脚踏消毒盆，手喷洒酒精消毒，同时更换舍内工作服。

2.3.7.3 带鸡消毒可选用的消毒剂：卫可（1：200）与百毒杀（1：500）交替使用；消毒频率：隔天一次，另外在淘汰后当天进行全群带鸡消毒；包括消毒区域5层楼（4品系）全舍笼具、地面、墙壁、料槽以及鸡群；消毒水量选择：鸡只消毒，1～12周使用500～600 mL/1000羽；其它区域正常消毒喷洒即可；粪盘要隔一天一换，并清洗、消毒。

2.3.7.4 场区做好日常生物安全工作，提升场区的生物安全等级，大环境每周消毒3次（立洁1：1 000，百毒杀1：500）；同时严格遵守常规隔离场区防疫控制制度，做好场区有害生物控制、进出物资和人员的消毒工作等。

2.4 产蛋场净化隔离工作

2.4.1 新转入产蛋场的鸡群进行全群咽喉拭子检测，做好个体记录，对于异常的鸡群及时进行淘汰处理，异常鸡处理注意事项参见育雏育成场处理注意事项，一般来说转入产蛋场的鸡群已完成MG净化工作。

2.4.2 检测无异常的鸡群按照正常采样程序进行采样即可，异常的鸡群需要继续进行净化工作。

2.4.3 日常工作按照常规生物安全防控工作要求执行。

2.5 相关监测工作

荧光定量PCR（Real-Time PCR），是一种使用荧光定量 PCR 扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。养殖企业可以通过对咽喉拭子进行荧光定量PCR同时配合血清 ELISA抗体检测监控鸡群健康状态，对阳性感染的个体及时进行清理，从而达到预警与筛选的目的。

2.6 MG净化工作具体实例

某养殖企业高代次种鸡建立阴性鸡群过程淘汰比例以及采样轮次见表1。

表1 某企业高代次种鸡MG净化淘汰情况

该批次经过8轮采样净化后确认达到全部阴性状态，转入产蛋场区进行继代生产后，后代经过监测全部为MG阴性，方可视为MG净化成功。

2.7 净化状态的维持

净化状态的维持需要以高效完善的生物安全体系为基础。需要场区加强日常饲养管理，科学合理选择相关疫苗建立抗体屏障；同时需要在孵化场、养殖场、转运种蛋过程执行严格的生物安全措施，多部门形成“五位一体”联合防疫体系，防止疾病在种蛋生产、运输、存放、孵化等各个环节中的传播，同时做好场区鸡群的净化维持相关工作，从而达到维持鸡群全阴性状态。