多指标综合评分法优选苏木提取工艺

★ 周慧慧 韩康宁 刘云龙 刘文静 欧涛 秦冰倩 王小平,2（.陕西中医药大学药学院 陕西 咸阳 72046；2.陕西省中药基础与新药研究重点实验室 陕西 咸阳 72046）

苏木别名苏枋木，始载于《唐本草》，为豆科云实属植物苏木Caesalpinia sappanL.的心材［1］，性平，味甘、咸，归心、肝、脾经，具有活血祛瘀、消肿止痛、舒筋通络之功效［2-4］。有研究表明，原苏木素B、巴西苏木素是苏木的有效成分，不仅具有活血化瘀、消炎止痛的作用，还对肺癌、乳腺癌、胃癌等多种恶性肿瘤具有显著抑制作用［5-12］，故本实验选择原苏木素B、巴西苏木素和出膏率的综合评分为评价指标，采用正交试验优选苏木的提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

十万分之一电子分析天平（瑞士Mettler Toledo）；戴安Ultimate 3000全自动高效液相色谱仪（赛默飞世尔上海仪器有限公司）；101-2型电热鼓风干燥箱（北京科维永兴仪器有限公司）；Direct-Q 3UV 纯化水机（默克密理博）；KQ-300VDE型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-2型电热恒温水浴锅（北京科维永兴仪器有限公司）。

1.2 药材和试剂

苏木药材购自陕西中医药大学校医院，经检验为苏木真品；巴西苏木素对照品（批号：B20024，含量≥98%）、原苏木素B对照品（批号：B21622，含量≥98%）均购自上海源叶科技有限公司；甲醇、乙腈（色谱纯）均购自美国默克公司；超纯水（自制）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取工艺优选

2.1.1 正交试验设计精密称定苏木药材粗粉10 g，以溶剂用量、提取次数、溶剂浓度、提取时间为考察因素，每个因素设3个水平，按照L9（34）正交试验安排表的因素水平组合进行试验，因素水平表见表1。

表1 正交试验因素水平表

2.1.2 多指标综合评分方法建立本实验以各成分的平均含量及出膏率作为权重系数为依据，将原苏木素B、巴西苏木素的权重系数分别设为0.4，出膏率的权重系数设为0.2。综合评分=（原苏木素B含量÷原苏木素 B最高含量）×0.4×100+（各组合中巴西苏木素含量÷巴西苏木素最高含量）×0.4×100 +（各组合中出膏率÷出膏率最高值）×0.2×100［13-16］。

2.2 原苏木素B、巴西苏木素含量的测定

色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）∶水（B），梯 度 洗 脱，0～5 min 80% B，5～25 min 80%～60% B，25～30 min 60%～80% B；柱温25 ℃；检测波长220 nm；流速1 mL/min，进样量10 μL。

分别精密称取巴西苏木素1.24 mg，原苏木素B 2.54 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，即得储备液。精密吸取上述贮备液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液1，2，3，5，20 μL 注入高效液相色谱仪，记录各色谱峰的峰面积，以进样量（ng）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归。原苏木素B、巴西苏木素回归方程分别为：Y= 0.006 5X-0.096 8，（r=0.999 8），Y= 0.007 8X-0.095 7，（r=0.999 8），表明两成分分别在25.4～508. 0 ng、12.4～248.0 ng范围内线性关系良好。

2.3 浸出率的测定

精密移取提取液25 mL，置于恒重的蒸发皿中，水浴加热，再置于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出放至室温，迅速精密称定，计算浸出率（%）。

2.4 最佳工艺的确定

按正交试验安排表的因素水平组合进行试验，并对实验数据进行多指标综合评分。结果见表2、表3。

表2 苏木正交试验安排与结果

表3 方差分析

2.4.1 结果分析通过对正交实验结果进行直观分析，结果表明各因素对提取的影响程度为A＞C＞B＞D，即乙醇浓度＞提取次数＞料液比＞提取时间；方差分析结果表明，除D因素外，其余因素均具有显著性。综合分析初步选定提取工艺为A2B3C1D2，即以12倍量浓度为55%的乙醇回流提取1次，提取时间120 min。

鉴于正交实验中乙醇浓度设计参数过宽，因此根据结果进一步对乙醇浓度进行考察。

2.4.2 乙醇浓度的考察取苏木10 g，精密称定，分别以35%、55%和75%乙醇进行回流提取，以12倍量乙醇提取1次，每次120 min。结果显示当乙醇浓度为35%时，原苏木素B、巴西苏木素的含量分别为（14.55±0.08）mg/g、（5.43±0.03）mg/g，出 膏 率为（9.40±0.11）%；当乙醇浓度为55%时，原苏木素B、巴西苏木素的含量分别为（20.87±0.17）mg/g、（6.18±0.06）mg/g，出膏率为（12.35±0.03）%；当乙醇浓度为75%时，原苏木素B、巴西苏木素的含量分别为（9.13±0.05）mg/g、（4.58±0.13）mg/g，出膏率为（9.95±0.07）%。因此，综合分析选定最佳提取工艺为12倍量浓度为55%的乙醇回流提取1次，提取时间120 min。

3 讨论

苏木主要含有巴西苏木素类、原苏木素类、高异黄酮类以及査尔酮类等有效成分［17-21］，以单一指标成分进行工艺优选与中药多组分、多靶点的特点不相符合［22］，故本试验以原苏木素B、巴西苏木素的含量以及浸出率作为指标，采用多指标综合评分进行工艺优选。在方差分析表中，为了估价试验误差和方差分析，若无空白列，则选择离差平方和中最小者做近似估计，虽然D项值略大，但是与其他各项水平值相比，还是有很大差异，故以D项（提取时间）做近似估计。权重系数的设定以各成分在质量评价中出现的频次以及药理活性作为主要依据［23-26］。该提取工艺科学、简单、合理、可行，为后期苏木药材的开发利用提供了实验依据。