制何首乌中黄酮类化合物的提取工艺研究

周秀梅

(吉林市人民医院药剂科，吉林 吉林 132001)

何首乌学名Fallopiamultiflora(Thunb.) Harald，又名多花蓼，是蓼科蓼族何首乌属多年生缠绕藤本植物，块根肥厚，颜色呈黑褐色。主要产于陕西南部、甘肃南部、华东、四川、云南及贵州等地。以块根入药，具有安神、养血、活络，解毒、消痈的作用，制首乌则具有补益精血、乌须发、强筋骨、补肝肾的疗效[1]。何首乌的化学成分主要有蒽醌类、二苯乙烯苷类、磷脂类、酚类以及黄酮类等[2]。有研究表明何首乌提取物不但能清除自由基、降血脂，还具有抗病毒、抗菌和增强机体免疫力的功效。另外研究证明，黄酮类化合物表现出了很高的抗氧化活性[3]。本实验以制首乌内黄酮类化合物的含量为指标，采用单因素结合正交实验法考察制首乌的最佳提取工艺，以期为何首乌的进一步合理应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

芦丁标准品(上海源叶生物科技有限公司，编号：MUST-12040302)；何首乌(安国市凯达中药饮片有限公司，经吉林医药学院雷钧涛教授鉴定本品为蓼科蓼族何首乌属植物何首乌的干燥块根)；所用试剂均为分析纯。

摇摆式中药粉碎机(温岭市奥力中药机械有限公司)；电子天平(JD500-3型，沈阳龙腾电子有限公司)；岛津UV-1800型紫外分光光度计。

1.2 制何首乌的制作过程

制何首乌制法：取何首乌片或块，用黑豆汁拌匀，置烧杯内，炖至汁液吸尽；或清蒸或用黑豆汁拌匀后蒸，蒸至内外均呈棕揭色，或晒至半干，切片，干燥。每100 kg何首乌片(块)，用黑豆10 kg[4]。

1.3 制首乌中黄酮类化合物的最佳提取工艺

制首乌的提取试剂选用乙醇，以提取液中黄酮类化合物的含量为指标进行考察，原料选用黑豆汁炮制的制首乌。

1.3.1芦丁标准曲线绘制

用电子天平称取芦丁标准品0.0076 g，加入30%乙醇溶解后转移至25 mL容量瓶，加入30%乙醇准确定容至刻度线，并且摇晃均匀，备用。分别用移液管准确转移上述芦丁溶液0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL到25 mL容量瓶中，加入30%乙醇到12.5 mL，滴入0.8 mL 5%亚硝酸钠溶液，静置5 min，再滴入0.8 mL 5%硝酸铝溶液，静置6 min，最后滴入5 mL 4%氢氧化钠溶液，加入30%乙醇准确定容到25 mL容量瓶的刻度线，静置10 min，用紫外分光光度计在510 nm处测定吸光度[5-8]，绘制标准曲线。

1.3.2乙醇浓度的考察

各取制首乌粉末1 g，以1∶10的料液比分别加入浓度为40%、50%、60%、70%、80%和90%的乙醇，回流提取2 h，抽滤，将抽滤所得的提取液中的乙醇挥发浓缩到3 mL左右，最后用70%乙醇定容至10 mL[3，5]，测定制首乌内黄酮类化合物的含量。

1.3.3料液比的考察

各取制首乌粉末1 g，分别以1∶10、1∶12、1∶14、1∶16、1∶18、1∶20的料液比加入浓度为70%的乙醇，回流提取2 h，抽滤，将抽滤所得的提取液中的乙醇尽量挥发浓缩到3 mL左右，最后用70%乙醇定容至10 mL[3，5]，测定制首乌内黄酮类化合物的含量。

1.3.4提取时间的考察

各取制首乌粉末1g，以1∶12的料液比加入浓度为70%的乙醇，分别回流提取2、4、6、8、10、12 h，抽滤，将抽滤所得的提取液中的乙醇尽量挥发浓缩到3 mL左右，最后用70%乙醇定容至10 mL[3，5]，测定制首乌内黄酮类化合物的含量。

1.4 正交实验设计

根据以上三个单因素确定因素水平表,根据因素水平表采用正交实验设计筛选最佳提取工艺，采用L9(33)正交表实验[9]，见表1。

表 1 正交实验因素与水平表

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线图

标准曲线如图1。

图 1 芦丁标准曲线图

2.2 单因素结果分析

2.2.1乙醇浓度的考察结果

当乙醇浓度为70%时，制首乌提取液中黄酮类化合物含量较高,而且60%和80%的吸光度值比其他三个点都高，所以正交实验选择60%、70%、80%三个水平进行试验，见图2。

图 2 乙醇浓度考察结果

2.2.2料液比的考察结果

当料液比为1∶14时，制首乌提取液中黄酮类化合物含量较高，而且1∶12和1∶16的吸光度值比其他三个点都高，所以正交实验选择1∶12、1∶14、1∶16三个水平进行实验，见图3。

图 3 料液比考察结果

2.2.3提取时间的考察结果

当提取时间为10 h时，制首乌提取液中黄酮类化合物含量较高，因在8 h至12 h之间上升趋势明显，加入9 h和11 h两个单因素以确定正交实验的三个水平，而提取时间为9、10、11 h的吸光度值比其他的点都高，所以正交实验选择9、10、11 h三个水平进行试验，见图4。

图 4 提取时间考察结果

2.3 正交实验结果

由极差分析可知，影响何首乌提取的因素主次顺序为：A(乙醇浓度)>B(料液比)>C(提取时间)。最佳工艺条件组合为A2B2C2，即乙醇浓度70%，料液比1∶14，提取时间10 h。采用A2B2C2的工艺条件对制首乌进行提取，见表2。各因素对提取效果的影响顺序A>B>C，方差分析表明因素A对提取效果具有显著性影响，B、C因素则无显著性影响。通过比较F值，FA>FB>FC可知各因素对提取黄酮类化合物的影响次序是A>B>C，见表3。而三次平行验证实验结果的吸光度分别为0.246、0.253和0.250，结果差异不大，说明此提取工艺较为稳定。

表 2 正交实验结果表

表 3 方差分析表

3 结 论

在研究何首乌中黄酮类化合物的最佳提取工艺中，通过正交实验确定了影响何首乌提取因素的主次顺序为：A(乙醇浓度)>B(料液比)>C(提取时间)。最佳的工艺条件组合为乙醇浓度70%，料液比1∶14，提取时间10 h。相信通过对最佳的炮制工艺和提取工艺的研究，可以为何首乌的进一步合理应用提供理论依据。