青海省乌兰县牛布氏杆菌病血清学调查

陈志禄

（青海省乌兰县畜牧兽医站，青海 乌兰 817199）

0 引言

牛布氏杆菌病是一种重要的细菌性疾病，不仅能使母牛发生流产和不孕，使公牛发生睾丸炎和不育，还对公共卫生造成威胁[1-2]。近年，我国的牛布氏杆菌病的发生率呈现逐年上升的趋势，牛布氏杆菌病的流行情况成为当前养牛业的研究热点[3]。研究发现奶牛场的布氏杆菌病的感染情况不一，其主要原因是由于疫病防控意识淡泊，检疫和防疫工作不到位。虎红平板凝集试验和试管凝集试验虽然灵敏度不高，操作复杂；但虎红平板凝集试验和试管凝集试验的检测价格较于PCR和ELISA的价格低，且符合GB/T18646—2018的要求。应做好牛布鲁氏杆菌病的预防措施，本文探讨青海省乌兰县牛布氏杆菌病的感染情况，为进一步防控牛布氏杆菌病奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

虎红平板凝聚试验抗原、牛布氏杆菌病阳性血清、牛布氏杆菌病阴性血清和牛布氏杆菌病试管凝集试验抗原均购自中国兽医药品监察所。代测血清采自青海省乌兰县5家不同规模奶牛场，样品数量共1 200份。

1.2 试验方法

1.2.1 虎红平板试管凝聚试验

（1）操作方法。取30μL的受检血清置于干净的玻璃板上，向受检血清中加入30μL的牛布氏杆菌病虎红平板凝聚试验抗原，使用一次性接种环将受检血清和抗原均匀混合。此外，在虎红平板试验时，还应同时设置阴性对照和阳性对照，试验过程与受检血清的检测过程相同。

（2）判定标准。阳性对照在5～10 min内出现肉眼可见的沙粒样凝集现象；阴性对照未出现肉眼可见的凝集现象，且混合液呈均匀粉红色；受检血清在5～10 min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性；反之判为阴性，且混合液呈均匀粉红色。

1.2.2 牛布氏杆菌病试管凝集试验

（1）操作步骤。将4支试管编号后，向第1支试管中加入920μL的稀释液，再向其他试管中加入0.5 mL稀释液；再取受检血清80μL加入到第1支试管中混匀，用移液器移取第1支试管中0.5 mL的混合液加入到第2支试管中混匀后，用移液器移取移取第2支试管中0.5 mL的混合液加入到第3支支试管中，以此类推稀释至第4支试管，并使用移液器移取第4支试管中的0.5 mL混合液弃掉。通过倍比稀释，获得第1～4支试管的血清稀释度分别为1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100。此外，阴性血清和阳性血清用稀释液将其稀释到原有的滴度；稀释抗原的方法与受检血清的稀释方法相同。将稀释的抗原分别加入到稀释好的待检测的受检血清中，每支试管0.5 mL，摇匀，获得第1～4支试管的血清稀释度分别为1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100。最后置37 ℃培养24 h，取出判定并记录结果。

（2）比浊管制备。比浊管配制参照表1。

表1 比浊管

（3）反应程度判断。参照比浊管对各试管的上层液体的清亮度进行判读：完全凝集，上层液体完全清亮，记为4个“+”；菌体相对完全凝集，上层液体相对完全清亮，记为3个“+”；菌体部分凝集，上层液体轻微浑浊，记为2个“+”；菌体有凝集现象，上层液体浑浊，记为1个“+”；未出现凝集现象，液体均匀混浊，记为“-”。

（4）试验成立条件。阳性血清出现完全凝集（++++），而阴性血清无凝集（-），抗原对照无自凝（-）。

（5）结果判定标准。在稀释血清为1∶100时，2个以上“+”的凝集，该受检血清可确定为阳性。

2 结果与分析

2019年青海省乌兰县5家不同规模奶牛场1 200份牛血清进行虎红平板凝集试验检测，检测出阳性血清43份，阳性率为3.58%。再对43份阳性血清进行试管凝集试验检测，检测出阳性血清40份，阳性率为3.33%，见表2。

表2 5家不同规模奶牛场的布氏杆菌病血清学检测结果

3 讨论

3.1 加强外防输入，内防检测工作

养殖户应坚持“自繁自养”，不从场外引种，如必要时需进行引种，养殖户应禁止在疫区引种，引种的牛必须在出场前和进场后进行牛布氏杆菌病血清学检测，并落实隔离工作，防止牛布氏杆菌病进入养殖场。此外，养殖户应定期对养殖场内的牛进行牛布氏杆菌病的血清学进行检测和监测，并建立牛的健康档案。

3.2 净化感染牛布氏杆菌病的牛

当养殖场出现感染牛布氏杆菌病的牛后，养殖户应及时将健康牛与其分开隔离圈养，并在1～2个月内定期对健康牛进行血清学检测，并将检测出的阳性患病牛进行隔离和剃除，直至牛中没有患病牛出现。

3.3 制定免疫计划，加强疫苗接种

养殖户应根据养殖场的自身情况和所在地区政府的免疫要求积极制定牛的免疫计划，并积极实施疫苗接种工作，以此有效提升牛对牛布氏杆菌病的抵抗能力。

3.4 加强养殖人员生物安全工作

养殖场的养殖人员应做好自我防护工作，如工作中佩戴一次性医用外科口罩、一次性橡胶手套和护目镜等防护用品用具。养殖场还应定期组织养殖人员学习生物安全，以此提升养殖人员对牛布鲁氏杆菌病的了解，加强对牛布鲁氏杆菌病的重视。

3.5 病牛处置

对于感染牛布氏杆菌病的牛，养殖户应严格按照《中华人民共和国动物防疫法》及有关规定，对患病牛进行扑杀，并进行无害化处理，防止销售。

3.6 加强日常清洁消毒工作

养殖户不仅要定期对牛舍进行清扫和消毒，还应对牛舍内的用品用具进行清洗和消毒。其中消毒可选用75%酒精、来苏儿溶液、15%石灰乳、2%氢氧化钠溶液和84消毒液等消毒剂。

4 结束语

牛布氏杆菌病的发生会给当地养殖业带来很大的打击，在对青海省5家规模化牛场1 200份血清采取虎红平板凝集试验和试管凝集试验结合的鉴定方法，发现布氏杆菌依然存在，检出率在3%以上。为良好解决布氏杆菌污染，养殖场需制定感染牛布氏杆菌病或疑似感染牛布氏杆菌病牛的隔离制度，并严格执行，养殖场还应根据制定国家的动物疫病处理办法等相关要求对感染牛布氏杆菌病牛及其流产产生的死胎等进行无害化处理，包括焚烧、深埋等，保动物健康，提高养殖效益。