通脉降脂合剂安全性研究

孙振平，于德龙，仲 娜，裴 琳

（1. 青岛市食品药品检验研究院，山东 青岛 266071 ；2. 青岛市城阳区人民医院，山东 青岛 266108）

通脉降脂合剂为医院自行研制的中药制剂，由何首乌、泽泻、茵陈、西洋参、灵芝、山楂、丹参、三七组成，具有祛痰利湿[1-2]、补肾活血的功效。现代药理学研究表明，通脉降脂合剂可降脂、抗血小板聚集，用于治疗高脂血症[3]、血栓性疾病[4-5]等具有良好的疗效。但此药的毒性作用易被忽视。为了全面、客观、科学地评价本品有无毒性，本实验参照《药物研究技术指导原则》[6]的相关规定，对通脉降脂合剂进行了毒理学研究[7]，对该药的安全性进行评价。

1 试剂与动物

通脉降脂合剂是由八味中药饮片熬制而成的中药汤剂，批号：2019-10-11，规格：500 mL/ 瓶，将其制备成最大浓度为原溶液6 倍（即生药浓度7.2 g/mL）的药液。昆明种小鼠，SPF 级，体重为18 ～22 g ；Wistar 大鼠，SPF 级，体重为200 ～250 g。这两种小鼠均由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。实验动物生产许可证号：SCXK（鲁）20190003。动物实验室环境为SPF 级：室温20 ～25 ℃，相对湿度40% ～70%。大鼠每笼5 只，雌雄（♀♂）分笼饲养，喂颗粒饲料（由济南康大饲料有限公司提供），自由饮水，大鼠笼每周更换2 次，每周称动物体重、饲料、饮水各1 次。

2 方法

2.1 小鼠急性毒性试验[8-9]

2.1.1 通脉降脂合剂半数致死量（LD50）测定试验选用小鼠10 只，♀♂各半，以最大给药浓度7.2 g/mL（生药）及最大灌胃体积40 mL/kg 给小鼠灌胃，结果显示通脉降脂合剂最大浓度达生药量288 g/kg，观察7 d 均未出现死亡。限于药物浓度及给药体积不能再增大，不能测出其LD50。

2.1.2 通脉降脂合剂最大耐受量（MTD）测定试验选用小鼠40 只，♀♂各半，采用S-PLUS 软件按区组设计分为给药组和阴性对照组，给药组单次给予通脉降脂合剂0.4 mL:10 g，相当于生药7.2 g/mL，对照组给予等量蒸馏水。两组小鼠均于给药前禁食不禁水16 h，给药后连续观察14 d，观察内容包括小鼠的外观形态、精神状态、行为活动、粪便分泌物等。测定每只小鼠给药第0 天、第7 天、第14 天的体重，对给药组与阴性对照组进行比较。结果显示所有小鼠均未出现任何毒性反应及死亡现象，体重增长正常，大体解剖观察无异常。测得通脉降脂合剂对小鼠的最大耐受量（MTD）为生药288 g/kg ，此剂量相当于临床成人口服剂量的288 倍，未出现任何毒性反应及死亡情况。

2.2 长期毒性试验[9]

2.2.1 动物与药物 SPF 级Wistar 大鼠80 只，♀♂各半，采用S-PLUS 软件按区组设计分组，分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组， 每组各20 只，♀♂各半。通脉降脂合剂：6 倍浓缩液（即生药7.2 g/mL）作为原液。

2.2.2 剂量分组 通脉降脂合剂的临床成人口服剂量：每日2 次，每次 25 mL，即临床剂量为生药1 g/kg（按体重60 kg 计）。通脉降脂合剂的急性毒性试验未测出小鼠的LD50，其MTD 为生药288 g/kg，亦未见小鼠出现明显的毒性反应。按最大灌胃容量20 mL/kg 对大鼠进行长期毒性试验，分别以原液（生药144 g/kg）、原液1/2 浓度（生药72 g/kg）、原液1/4 浓度（生药 36g/kg）为高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠灌胃给药，空白对照组大鼠给予蒸馏水灌胃。

2.2.3 给药方法与检测 为大鼠测体重，给药前观察4 d，大鼠的一般情况良好，每天灌胃给药1 次，连续给药5周，每周测体重1 次（♀♂分别统计），并与空白对照组比较。每周称动物饲料1 次，计算摄食量。每周称动物饮水1 次，计算饮水量。检测时间：给药5 周后。每组分别取10 只大鼠用戊巴比妥钠麻醉，5 min 后背位固定于小动物手术台上，自股静脉采血，行血液学与血液生化学检测，并行系统尸解及病理组织学检查。其余大鼠停止给药，饲养照常，进行恢复性观察，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的迟发性毒性反应，观察内容与给药期间相同。停止给药后2 周，将各组动物全部采血处死，做相应检查，检查方法同上。检测指标：一般观察：外观体征和行为活动（包括神态萎靡、蜷缩不动或过度兴奋、躁动惊跳、肌肉麻痹或震颤、步态异常等），皮毛光泽度、贴身或稀疏竖散，粪便性状、颜色，食量及体重变化，对死亡或濒死动物及时尸检；血液学检查：红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、白细胞计数（WBC）及其分类〔嗜中性粒细胞百分数（NE）、淋巴细胞百分数（LY）、单核细胞百分数（MO）〕、血小板计数（PLT），使用美国HEMAET950FS 型动物血液分析仪测定；血液生化检查：天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、肌酸磷酸激酶（CK）、尿素氮（UREA）、肌酐（CRE）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG），使用日立7020全自动生化分析仪测定。

2.2.4 系统尸解和病理学检查 1）系统尸解：全面细致，为组织学检查提供依据；2）脏器重量：称量脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫重量；3）脏器系数：计算脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫的脏器系数，脏器系数（g 或mg/g）=脏器重/体重×100%；4）病理组织学检查：空白对照组、高剂量组尸检异常时要详细检查，中剂量组、低剂量组只有在高剂量组有异常时才进行检查。检查器官包括：脑（大脑、小脑、脑干）、脊髓（颈、胸、腰段）、垂体、甲状腺、甲状旁腺、食管、唾液腺、胃、小肠、大肠、肝脏、胰腺、肾脏、肾上腺、胸腺、脾脏、心脏、气管、肺、主动脉、睾丸、附睾、卵巢、子宫、前列腺、膀胱、坐骨神经、淋巴结。

2.3 统计学方法

采用SPSS 11.0 软件对各试验组动物的体重、脏器系数（♀♂分别统计）、血液学、血液生化学指标等进行方差分析，以均数± 标准差（±s）表示，摄食量、饮水量以 g/100 g 体重表示。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 一般观察结果

各剂量组大鼠给药前后均被毛平顺、洁白光泽、眼睛红亮有神、反应机敏、步态正常、口周及尾部黏膜无破溃，未出现萎靡、蜷缩不动等情况，呼吸平稳、饮食正常、大便无黏液和稀溏，口周无紫绀，四肢及头部无震颤，呈现出健康活泼的状态。可见，通脉降脂合剂对♀♂大鼠的一般行为无显著影响。

3.2 通脉降脂合剂对大鼠摄食量、饮水量、体重的影响

各组大鼠的摄食量和饮水量均随动物生长周期的增加而呈下降的趋势，组间未见异常。各给药组体重与对照组体重比较，无明显差异，这说明通脉降脂合剂不影响大鼠的生长发育。

3.3 通脉降脂合剂对大鼠系统尸解和脏器重量的影响

在给药5 周及停药2 周后分批活杀大鼠，观察各脏器（脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫），显示各脏器色泽良好，形态及位置关系正常，脏器间无粘连，脏器表面及内膜无瘀血、充血、出血点、水肿、糜烂、溃疡等情况；胸腔、心包无积液等病理改变。脏器称重结果表明，通脉降脂合剂各剂量对大鼠的脏器重量无明显影响，停药后也未见迟发性影响。说明通脉降脂合剂对大鼠的脏器重量无显著影响。

3.4 通脉降脂合剂对大鼠脏器系数的影响

脏器系数检查结果表明，通脉降脂合剂的高、中、低剂量组大鼠脏器系数与空白对照组大鼠均无显著性差异，停药2 周后检查也无显著性差异，说明通脉降脂合剂各剂量组给药后对脏器系数无明显影响，也未发现迟发性影响。结果见表1、表2。

表1 各剂量组Wistar 大鼠给药结束期的脏器系数（± s ，n=5）

表1 各剂量组Wistar 大鼠给药结束期的脏器系数（± s ，n=5）

脏器 性别 空白对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组脑（g） ♀ 0.92±0.06 0.93±0.05 0.95±0.05 0.90±0.03♂0.75±0.09 0.79±0.09 0.83±0.06 0.68±0.08心脏（g） ♀ 0.43±0.09 0.37±0.03 0.41±0.02 0.37±0.01♂0.33±0.05 0.32±0.05 0.32±0.04 0.30±0.03肝脏（g） ♀ 3.70±0.41 3.65±0.25 3.92±0.26 3.58±0.22♂2.96±0.61 2.89±0.24 3.03±0.17 2.65±0.42肾脏（g） ♀ 0.92±0.05 0.90±0.07 0.97±0.03 0.91±0.03♂0.78±0.13 0.74±0.08 0.79±0.04 0.66±0.08肾上腺（mg） ♀ 31.51±2.99 30.90±3.71 34.19±2.13 32.59±1.65♂26.01±4.59 24.89±3.65 26.53±4.67 26.53±2.59胸腺（mg） ♀ 115.62±18.23 117.48±13.49 122.35±18.82 121.68±7.32♂100.36±31.34 91.88±23.36 108.88±5.32 101.19±7.04脾脏（g） ♀ 0.24±0.02 0.25±0.01 0.27±0.02 0.25±0.01♂0.21±0.04 0.20±0.04 0.21±0.01 0.20±0.01肺脏（g） ♀ 0.51±0.03 0.51±0.04 0.53±0.03 0.49±0.03♂0.49±0.04 0.49±0.02 0.50±0.05 0.46±0.05睾丸（g） ♂ 0.99±0.14 0.94±0.11 0.98±0.05 0.90±0.03附睾（g） ♂ 0.16±0.02 0.06±0.02 0.16±0.01 0.15±0.00卵巢（g） ♀ 0.04±0.00 0.04±0.00 0.04±0.00 0.04±0.00子宫（g） ♀ 0.25±0.04 0.26±0.05 0.27±0.03 0.26±0.02

表2 各剂量组Wistar 大鼠给药恢复期的脏器系数（± s，n=5）

表2 各剂量组Wistar 大鼠给药恢复期的脏器系数（± s，n=5）

脏器 性别 空白对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组脑（g） ♀ 0.89±0.05 0.88±0.04 0.85±0.03 0.90±0.04♂0.63±0.06 0.64±0.02 0.56±0.03 0.60±0.09心脏（g） ♀ 0.38±0.08 0.37±0.04 0.40±0.03 0.39±0.04♂0.28±0.01 0.26±0.03 0.27±0.01 0.27±0.03肝脏（g） ♀ 3.66±0.45 3.90±0.35 3.94±0.25 3.95±0.24♂2.75±0.10 2.61±0.29 2.63±0.04 2.64±0.27肾脏（g） ♀ 0.92±0.04 0.90±0.07 0.91±0.05 0.91±0.06♂0.54±0.01 0.60±0.07 0.61±0.01 0.61±0.07肾上腺（mg） ♀ 33.05±2.98 32.56±3.75 33.38±2.23 33.90±1.75♂23.82±0.57 22.64±1.34 21.91±0.34 22.39±3.14胸腺（mg） ♀ 117.15±17.23 115.48±12.49 117.02±19.82 116.68±7.22♂82.73±1.64 82.34±0.48 78.41±2.75 79.42±7.03脾脏（g） ♀ 0.25±0.03 0.26±0.02 0.27±0.01 0.25±0.02♂0.17±0.01 0.17±0.02 0.17±0.00 0.17±0.02肺脏（g） ♀ 0.47±0.03 0.46±0.05 0.48±0.02 0.79±0.05♂0.34±0.01 0.26±0.12 0.31±0.01 0.32±0.02睾丸（g） ♂ 0.81±0.02 0.76±0.07 0.77±0.03 0.77±0.06附睾（g） ♂ 0.13±0.01 0.12±0.01 0.12±0.00 0.12±0.01卵巢（g） ♀ 0.04±0.01 0.04±0.02 0.04±0.01 0.04±0.01子宫（g） ♀ 0.28±0.03 0.24±0.04 0.27±0.02 0.27±0.02

3.5 通脉降脂合剂对大鼠血常规检查结果的影响

血常规检查结果表明，通脉降脂合剂长期用药对大鼠的血常规无明显影响，停药后2 周检查也未发现迟发性影响。说明通脉降脂合剂长期大量用药对血常规无影响。

3.6 通脉降脂合剂对大鼠血清生化学检查结果的影响

血清生化学检查结果显示，试验结束期和恢复期各试验组与空白对照组大鼠各血清生化学指标比较均无显著性差异（P＞0.05）。

3.7 病理检查结果

通脉降脂合剂给药5 周及恢复2 周活杀各组大鼠，取脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫，用10% 甲醛固定，检查各期高剂量组和空白对照组大鼠，行石蜡切片，HE 染色，光镜观察。观察的结果显示，两组大鼠各期主要脏器组织细胞形态正常，均未见药物引起的特异性毒性反应，组间无明显异常。可以断定，中剂量组和低剂量组大鼠各期主要脏器亦无特异性毒性反应。

4 讨论

本次实验中，对通脉降脂合剂进行了2 个阶段的毒性试验。在第1 阶段急性经口毒性试验中，50 只小鼠安全剂量均为288 g/kg，是临床拟用剂量的288 倍。说明该样品属于无毒性物质。在第2 阶段试验中，本药长期给药不影响大鼠活动、行为及外观，对大鼠生长发育无明显影响，大鼠的血常规及血清生化学指标无明显变化，大鼠脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫等组织无明显异常。由上述试验结果可以初步判断，通脉降脂合剂安全无毒，临床应用的安全性高。