RP-HPLC法测定胃得安胶囊中23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚3种成分的含量

黄牧坤，王卫东，李明杰

（三二〇一医院药学部，陕西 汉中 723000）

胃得安胶囊具有和胃止痛、健脾消食等功效，常用于治疗慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡等疾病。胃得安胶囊由白术、泽泻、枳实、厚朴等25味药材，采用粉碎、煎煮、制粒、干燥等工艺制备而成的中药成方制剂[1-4]。25味药材中，泽泻具有利水渗湿、泄热、化浊降脂等功效[5-7]；枳实具有破气消积、化痰散痞等功效[8-10]；厚朴具有燥湿消痰、下气除满等功效[11-13]。目前，随着生活、工作压力越来越大，缺乏锻炼等，我国患有胃病的人数越来越多，“十人九胃”正在逐渐成为现实。胃得安胶囊现收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十九册，标准编号为WS3—B—3636—98，仅有性状和检查项目，没有含量测定项目。本研究参照文献[14-19]，建立了RPHPLC法测定胃得安胶囊中23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚3种成分的含量，为国家标准制定的提高提供依据。

1 仪器与试药

Agilent infinity 1260型反向高效液相色谱仪，配置在线脱气机、四元梯度泵、全自动进样器，DAD检测器（美国安捷伦科技公司）；梅特勒AE 200S型电子分析天平（万分之一，瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；Milli-Q advantage A10型纯水器（美国密理博科技有限公司）；KH-700 TDB型超声波仪（昆山禾超仪器有限公司）。

23-乙酰泽泻醇B对照品（质量分数98.3%，批号111846-202006）、辛弗林对照品（质量分数99.8%，批号110727-202110）、厚朴酚对照品（质量分数99.0%，批号110729-202015）均购于中国食品药品检定研究院；胃得安胶囊（金陵药业股份有限公司福州梅峰制药厂，规格每粒装0.275 g，批号20211211、20210708、20220114）；乙腈、甲醇（HPLC级，德国默克公司）；其他试剂（分析纯，国药集团上海化学试剂厂）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Spherisorb ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.5%磷酸溶液（B），梯 度 洗 脱（0～4 min，5%A；4～7 min，5%～22%A；7～10 min，22%～62%A；10～16 min，62%～74%A；16～23 min，74%～81%A；23～28 min，81%A；28～28.5 min，5%A）；检测器：二极管阵列检测器（DAD）；采用仪器波长切换功能，分别设定3种成分的检测波长：23-乙酰泽泻醇B（208 nm）、辛弗林（275 nm）、厚朴酚（294 nm）；柱温：30℃；进样量：10µL；流速：1.0 mL/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 单个对照品储备液的制备称取23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚对照品适量，准确称定，分别置3个棕色量瓶中，用75%（体积分数，下同）甲醇制成23-乙酰泽泻醇B 196.6 μg/mL、辛弗林299.4 μg/mL和厚朴酚396.0 μg/mL的单个对照品储备液。

2.2.2 混合对照品溶液的制备 取“2.2.1”项下23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚单个对照品储备液，分别准确吸取1.0 mL，置10 mL棕色量瓶中，用75%甲醇定容，摇匀。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约1.0 g，准确称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇约20 mL，密塞，称定质量，超声处理20 min（功率230 W，频率70 kHz），放冷，再称定质量，用75%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备按胃得安胶囊质量标准中的处方和制备方法，分别制备泽泻、枳实和厚朴阴性样品，同“2.2.3”项下方法制备泽泻、枳实和厚朴阴性样品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性考察取“2.2”项下混合对照品、供试品和阴性样品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样10 µL进行检测，采集谱图，典型色谱图见图1。可见，在与对照品溶液谱图中23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚相应的保留时间位置，供试品溶液谱图中均有相对应的吸收峰；在阴性样品溶液中23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚色谱峰对应位置无干扰峰；3种待测物分离良好，理论塔板数均大于2 500。

图1 对照品、供试品、阴性对照溶液HPLC色谱图Figure 1 HPLC spectrum of control,test and negative control solutions

2.3.2 线性关系考察取“2.2.1”项下23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚单个对照品储备液，分别准确移取0.01、0.05、0.1、0.5、1 mL，置5个10 mL棕色量瓶中，用75%甲醇定容，摇匀；按“2.1”项下色谱条件分别进样10µL进行检测，采集谱图，以峰面积为纵坐标（y）、质量浓度为横坐标（x）进行线性拟合，计算标准曲线方程，结果见表1。

表1 标准曲线方程、相关系数和线性范围Table 1 Standard curve equation,correlation coefficient and linear range

2.3.3 精密度试验取“2.2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样10µL进行检测，连续进样6次，结果测得23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚峰面积RSD值分别为1.5%、1.4%和1.2%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验取胃得安胶囊（批号：20211211），按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，室温放置0、3、6、9、12、18、24 h后分别取样，按“2.1”项下色谱条件进样10 µL进行检测，结果测得23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚峰面积RSD值分别为1.2%、1.8%和1.3%，表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验取同批次胃得安胶囊（批号：20211211），按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，按“2.1”项下色谱条件分别进样10 µL进行检测，根据谱图中23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚峰面积计算质量分数。结果测得23-乙酰泽泻醇B、辛弗林、厚朴酚的质量分数分别为0.141 2、0.921 5、1.507 5 mg/g，RSD值分别为1.6%、2.1%和1.8%，表明方法具有良好的重复性。

2.3.6 加样回收率试验取已测定23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚含量的胃得安胶囊（批号：20211211），共取20粒，去除胶囊壳，内容物研细，取约1.0 g，准确称定，置25 mL量瓶中，同法称取6份，根据样品中3种成分含量，精密加入“2.2.1”项下23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚单个对照品储备液适量，按“2.2.3”项下方法制备加标溶液，再按“2.1”项下色谱条件分别进样10 µL进行检测，计算加标回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果Table 2 Recovery test results

2.4 方法应用

取胃得安胶囊（批号：20211211、20210708、20220114），按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，每份供试品平行制备2份，按“2.1”项下色谱条件分别进样10µL进行检测，采集谱图，外标法计算供试品中23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚成分的质量分数，结果见表3。

表3 胃得安胶囊中3种成分的质量分数Table 3 Determinations of 3 ingredients in Weidean capsules w/（mg·粒-1）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

通过二极管阵列检测器（DAD）对23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚对照品溶液在200～600 nm范围内进行扫描，结果显示23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚最大吸收波长分别在208、275、294 nm，差异较大，为提高检测效率，采用程序波长切换技术，实现了在同一色谱条件下，在3种活性成分最大吸收波长处测定其指标性成分的含量。

3.2 流动相的选择

中药活性成分检测常用的流动相体系有甲醇和乙腈体系，其中甲醇紫外吸收最大波长在210 nm附近，乙腈紫外吸收最大截止波长在190 nm附近。本研究中，23-乙酰泽泻醇B最大吸收波长在208 nm左右，因此甲醇体系不适用。分别考察采用乙腈-水体系和乙腈-0.5%磷酸溶液作为流动相体系时，3种成分的分离、检测时间和基质干扰情况，结果显示选择乙腈-水体系时，辛弗林色谱峰峰型较差，定量准确性偏低；选择乙腈-0.5%磷酸溶液时，3种成分分离良好，无基质干扰，且分析时间较短。

3.3 前处理条件的优化

胃得安胶囊系由25种药材组成，药材种类较多，基质复杂，为提高检测准确度和缩短分析时间，有必要对前处理方法进行优化。分别考察提取溶剂为甲醇、75%甲醇溶液和50%甲醇溶液时，对23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚3种成分提取的影响，再分别考察超声功率（210、230、250 W）和提取时间（15、20、25 min）的影响，结果选择75%甲醇溶液作为提取剂，超声功率设置230 W，时间20 min为最佳提取条件。

采用高效液相色谱配备二极管阵列检测器法定性、定量检测的分析方法，测定胃得安胶囊中的23-乙酰泽泻醇B、辛弗林和厚朴酚中的3种活性成分，对方法的线性、溶液稳定性、重复性等进行了系统考察，结果显示方法具有检测准确度高、操作简便等优点，可以用于胃得安胶囊供试品的质量控制，为国家标准完善制定提供技术参考。