TPPA结合RPR方法对图木舒克市手术患者进行梅毒确诊及疗效观察的研究

林壮，魏秋姣，严玉婷，杨芳

1.珠海市中西结合医院 检验科(广东 珠海 519020)；2.珠海市慢性病防治中心 检验科(广东 珠海 519000)；3.新疆维吾尔自治区图木舒克市人民医院(新疆维吾尔自治区 图木舒克市 843901)

梅毒是一种慢性全身性性传播疾病，主要致病原因是梅毒螺旋体感染。近几年，梅毒开始逐年升高发病率，且发展趋势逐渐蔓延。梅毒早期会有复杂的临床表现，呈多样性，再加上部分患者并未真实陈述自身病史及没有科学地实行抗生素治疗，会困扰医生的诊断结果，进而增加误诊及漏诊的可能性[1]。术前给予患者梅毒筛查和确诊已经成为必备的实验室工作。因此，血清学检查已经成为梅毒诊断的关键依据。患者机体在受到梅毒螺旋体感染后，体内会产生不同类型的抗体，一类是依据梅毒螺旋体产生的特异性抗体-IgM和IgG，另外一类是非特异性抗体-反应素，该抗体是感染梅毒螺旋体后宿主细胞释放的螺旋体表面脂质和类脂质的抗体[2]。基于此，本研究采用梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集实验(treponemapallidumparti-cleassay，TPPA)结合金标法对手术患者进行梅毒确诊及疗效观察，可以有效地对梅毒进行防治与干预，若两种检测方法出现不相符的结果，则存留血清，通过免疫印迹法(Westernbiotting，WB)进行最后确诊，既填补了图市医院不能确诊梅毒的空白，又能对图市的梅毒发病率进行监控，具有深远的社会效益，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

回顾性分析新疆图木舒克市人民医院收治的3000例术前患者血清，研究时段在2016年8月—2019年10月，收治的受检者是梅毒患者1300例，非梅毒患者1000例，健康体检者700例；梅毒患者男性652例，女性648例，年龄24～69岁，平均(46.86±2.51)岁；非梅毒患者男性531例，女性469例，年龄25～70岁，平均(47.13±2.48)岁；健康体检者男性353例，女性347例，年龄24～69岁，平均(46.86±2.51)岁。各组患者一般资料比对，无显著统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

严格按照厂家试剂说明书开展实验：①TPPA试验：于室温条件下，用稀释液在U形板上倍比稀释每份血清样本，分别形成4种稀释度,类型包括1∶5、1∶10、1∶20、1∶40，再将未致敏明胶颗粒试剂加入1∶20的稀释血清中与致敏明胶颗粒试剂加入1∶40的稀释血清中，震荡混匀30秒，行2h静置后观察结果，阳性标准是未致敏粒子孔不凝集，加致敏粒子孔凝集。②金标法试验：于冰箱中取出试剂盒，放置于15～30℃室温环境下30min再做试验，取出20μL全血或10μL血浆或血清放置于金标版检测窗，之后加入稀释液3～4滴，于5～20min内进行结果判读，若在30min以上则表示结果无效。③WB法：在反应槽中放入梅毒特异性抗体检测条，每槽加入含5%脱脂奶粉的1mL PBS缓冲液，再将患者血清样本50μL加入，摇床振荡反应3h。洗5次PBS-T洗涤液，1次保持在3分钟左右。将1mL羊抗人IgG加入反应槽中，摇床振荡反应3h，洗涤反应槽5次。将1mL显色底物加入至反应槽中，反应5～10min进行结果观察。

1.3 观察指标

(1)TPPA和金标法检测结果：针对梅毒、非梅毒及正常体检者TPPA和金标法阳性数，评估阳性率。

(2)疑似梅毒患者实行不同方法的检测结果：①灵敏度=真阳性人数/(真阳性人数+假阴性人数)×100%；②特异度=真阴性人数/(真阴性人数+假阳性人数)100%；正确指数主要评估临床符合率。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 各组TPPA和金标法检测结果比较

1300名梅毒患者中，共检测出1300名TPPA阳性人数，阳性率为100.00%，1250名金标法阳性人数，阳性率为96.15%；1000名非梅毒患者中，未检测出TPPA阳性人数，阳性率为0.00%，15名金标法阳性人数，阳性率为1.50%；70名健康体检者中，均为阴性的金标法和TPPA结果。梅毒患者与非梅毒、健康体检者检测结果相比，组间差异明显(P<0.05)，具体结果见表1。

表1 各组TPPA和金标法检测结果比较 [n(%)]

2.2 疑似梅毒患者实行不同方法的检测结果比较

TPPA检查方法的灵敏度、特异度及正确指数均高于金标法检测结果，差异有统计学意义(P<0.05)，具体结果见表2。

表2 疑似梅毒患者实行不同方法的检测结果比较 [n(%)]

3 讨论

梅毒是常见性病，传播路径包括血液传播、胎传播及性传播。很多不正确的性交行为会将早期梅毒患者的梅毒向同伴传播[3]。人体在受到梅毒感染后，梅毒螺旋体会以较快的速度使全身各器官被侵犯，导致损伤器官，可经胎盘传给子代，有着较大的危害性，且梅毒患者发病时间较长，存在着复杂的临床症状，因此很多医生在诊治期间会有误诊情况出现，实验室诊断是以血清学方法为依据。

患者机体在受到梅毒螺旋体感染后，最早产生特异性抗体IgM，大约出现在感染后的第2周，伴随疾病发展，会缓慢升高lgG抗体，经有效治疗后会消失IgM抗体，而持续存在IgG抗体，情况严重下终身不消失，持续呈阳性血清反应。相比特异性抗体，非特异性抗体会晚出现2～3周[4]。TPPA的抗原是在明胶粒子上包被梅毒螺旋体Nichols株精细制作菌体成分，可同时对IgM型和IgG型抗体进行检测，有着较高的敏感性，可经吸收试验后复检排除其发生的非特异性凝集，有着良好的特异性，2～4周的感染期可检测出，是现阶段获得大众认可的梅毒血清确认试验[5]。快速梅毒螺旋体抗体胶体金实验作为梅毒确诊的金标准，是将15500、17000、47000相对分子质量重组抗原的梅毒螺旋体结合至检测板上，依据胶体金免疫层析技术原理对血清中的梅毒特异性抗体进行检测。快速血浆反应素环状卡片试验(rapidplas-mareagincirclecardtest，RPR)试验所用时间短，便于操作，伴随病情变化会随之改变抗体效价，会直接关系到患者的临床症状与梅毒的活动性，在给予梅毒患者临床治疗或基本处于非梅毒活动期时，会快速下降或消失，很容易引发假阴性反应，增加漏诊率[6]。在伴有类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病时，RPR还可能出现假阳性反应。因此，RPR不适用于筛选试验梅毒。若TPPA法与金标法的对比出现不相符结果，则应将血清保留，采用WB方法进行最后确诊。阳性标本(两种方法均可)行RPR滴度检测，备案并记录结果，以此作为比对标准，以便对确诊患者的疗效作出评价。

因本院地处新疆塔克拉玛干沙漠边缘、自然条件恶劣、气候干燥，医院正处在起步阶段，临床对于梅毒螺旋体致病的认识还不够充分，实验室对梅毒的检测手段也较为单一，不能给临床提供准确的实验室诊断依据，经常造成疑似病例转院确诊且无法进行治疗随访，让患者产生疑惑与质疑，有时甚或加大医患矛盾[7]。针对现有情况，本院建立了完整而有效的实验室检测系统，对术前患者进行规范的梅毒筛查。不仅能够确诊阳性患者，而且能够进行疗效观察。并在梅毒这一传染病方面，做到防治结合，配合疾控部门对当地的梅毒的发病率进行监测。本次试验结果显示，1300名梅毒患者中，TPPA和金标法分别呈100.00%和96.15%的阳性率；1000名非梅毒患者中，TPPA和金标法分别呈0.00%和1.50%的阳性率；70名健康体检者中，均为阴性的金标法和TPPA结果。TPPA检查方法比金标法检测的灵敏度、特异度及正确指数更高，差异有统计学意义(P<0.05)。可见，采用TPPA方法诊断，可提升诊断准确率，保持较高的可信度。采取TPPA检测法确认检测，需花费较高成本，且需较长的步骤周期，不适用于大规模检测，且不能判定梅毒的疗效，需结合RPR做滴度检测观察疗效切实可行，保证诊断效果，提升特异性与敏感性。

相关研究[8]表明，梅毒患者血清中的特异性抗体检测使用ELISA方法与TPPA法均可获得良好结果，且无需花费较高的实际成本，便于操作，可采用全自动酶标仪实行自动化操作，适用于筛选大批量标本梅毒患者，但ELISA方法会出现假阴性反应。TPPA法由于需要花费较高成本，操作程序较多，需消耗较长时间，不适用于筛选大量标本，更多地应用于确诊试验[9]。正是因为TPPA经检查可获取良好的特异性和较高的敏感度，能够稳定试剂，无需专门仪器，主要以肉眼判定结果，适用于直接确认和筛查梅毒患者。TPPA检测出的阳性患者更多的是梅毒现症感染者，是实行临床治疗的主要指标，本研究临床资料也证实了这一点。但还需要依据临床体征、症状及不洁性行为史确定诊断结果。特别是老年患者，伴有基础性疾病的可能性较大，会引诱机体产生抗梅毒螺旋体的非特异性或特异性抗体，导致金标法和TPPA试验引发现假阳性反应。因此，若老年患者否定疾病接触史和发病史，梅毒抗体试验阳性不可解释为曾经或正在感染梅毒者，患者感染梅毒螺旋体判断结果不可将阳性结果作为绝对依据，应与临床结果相结合进行综合分析。梅毒患者治疗期间需患者的性伴侣共同检测，实行足疗程、足剂量治疗，进而促进患者治愈。

综上所述，TPPA方法对图木舒克市手术患者进行梅毒确诊，可保证诊断效果，且TPPA法比金标法假阳性更少，可采用TPPA法确诊梅毒并结合RPR做滴度检测观察疗效切实可行，有效填补了图市实验室确诊梅毒的空白，将会产生良好的社会效益。