高效液相色谱法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的不确定度评定

许倩，汪海宣，刘静，陈扣宝，汪梦美

(合肥市食品药品检验中心，合肥 230001)

缺血性心肌病是发生率高的一种心脏病，病情发展速度快，死亡率高[1]。有资料显示[2]，患者容易转变为难治性心力衰竭，死亡率达5%。盐酸多巴酚丁胺注射液是一种拟交感神经药物，激动心脏β受体[3-4]，提高血管活性[5-6]，它的主要作用就是治疗各种原因导致的心力衰竭。小剂量盐酸多巴酚丁胺注射液在治疗婴幼儿重症肺炎临床效果明显[7]，能够直接刺激心脏，增强心肌的收缩力，可以使心排血量增加，还可以降低外周血管的阻力，使心肌耗氧量降低，从而使心脏负担减轻，形成良好的循环。

在实验室检验含量的过程中，多种因素会对测量结果造成一定的影响[8-9]，测量不确定度评定已成为实验室质量控制的一项重要参数，普遍用于各类分析中[10-11]。关于高效液相色谱法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺含量的不确定度尚未见报道。笔者依据GB/T 27418—2017 《测量不确定度评定和表示》[12]，结合基础实验室的环境和条件，分析了盐酸多巴酚丁胺含量不确定度的主要原因，对测定结果进行不确定评定[13-15]，降低检验中可能引入的误差，以此获得更真实准确的数据。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

电子天平：XP205 型，感量为0.01 mg，瑞士梅特勒-托特利多有限公司。

高效液相色谱仪：U3000 型，配有DAD 检测器，美国赛默飞世尔科技有限公司。

移液管：5 mL，A 级，美国默克公司。

容量瓶：20、100 mL，A 级，美国默克公司。

盐酸多巴酚丁胺对照品：含量（质量分数）为99.8%，批号为101185-201202，中国食品药品检定研究院。

甲醇、乙腈：色谱纯，美国赛默飞世尔科技公司。

盐酸多巴酚丁胺注射液样品：2 mL/支，山东方明药业集团股份有限公司。

辛烷磺酸钠：含量（质量分数）为99.0%，天津益仁达试剂厂。实验所用其它试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。

1.2 实验环境

环境温度：22.3 ℃；相对湿度：55%。

1.3 色谱条件

色谱柱：Agilent zorbax C18柱(250 mm×5 mm，美国安捷伦科技有限公司)；流动相：A 相为辛烷磺酸钠（称取辛烷磺酸钠2.6 g，加入1 000 mL 水溶解，再加入3 mL 三乙胺，摇匀，用磷酸调节pH 值至2.5）；B 相为乙腈-甲醇(体积比为18∶82)，A 相与B 相体积比为55∶45，流量为1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；进样体积：20 μL[16]。

1.4 溶液制备

盐酸多巴酚丁胺对照品溶液：分别精密称取盐酸多巴酚丁胺对照品0.010 10、0.010 74 g，再分别置于两只20 mL 溶量瓶中，加流动相稀释至标线，摇匀，滤过，分别作为对照品溶液1 (0.505 mg/mL)和对照品溶液2 (0.537 mg/mL)。

盐酸多巴酚丁胺注射液样品溶液：取盐酸多巴酚丁胺注射液样品40 支，混合，用5 mL A 级移液管精密量取溶液5 mL，置于100 mL 容量瓶中，用流动相稀释至标线，摇匀，滤过，平行制备10 份。

2 数学模型

盐酸多巴酚丁胺注射液样品中盐酸多巴酚丁胺的质量m由式(1)计算：

3 不确定度来源

根据数学模型，影响高效液相色谱法测定盐酸多巴酚丁胺含量不确定度的因素，主要来源于两个方面。

(1) A 类不确定度。盐酸多巴酚丁胺重复性测量引入的不确定度；

(2) B 类不确定度。盐酸多巴酚丁胺对照品称量、纯度引入的不确定度，盐酸多巴酚丁胺注射液样品、盐酸多巴酚丁胺对照品溶液制备、稀释及定容引入的不确定度。

4 不确定度评定

4.1 盐酸多巴酚丁胺对照品质量引入的相对标准不确定度分量urel(ms)

为使重复性测定引入的不确定度可信，平行称取对照品两份，称量结果见表1。

表1 平行2 份对照品称量数据 mg

4.1.1 盐酸多巴酚丁胺对照品纯度引入的不确定度u1(ms)

根据标准物质证书，实验所用的盐酸多巴酚丁胺对照品纯度为99.8%，其相对扩展不确定度为2%，k=2，则盐酸多巴酚丁胺对照品纯度[17]引入的不确定度：

4.1.2 天平称量的准确性引入的不确定度u2(ms)

由仪器校准证书提供，天平称量允许的最大误差为0.02 mg，利用差减法称量2 次，根据JJF 1059.1—2012 《测量不确定度评定与表示》，采用B类评定，按照均匀分布考虑，k= 3，故天平称量的准确性引入的标准不确定度：

4.2 溶液定容及移液引入的不确定度u(V )

4.2.1 溶液定容

上述各不确定度分量互不相关，溶液定容所引入的相对标准不确定度：

4.2.2 移液

4.3 重复性测量引入的不确定度

平行取样10 份，进行重复测定，盐酸多巴酚丁胺质量分数测定结果见表2。

表2 重复性测量盐酸多巴酚丁胺质量分数测定结果

重复性测量引入的标准不确定度：

5 合成相对标准不确定度

将各不确定分量汇总于表3。

表3 不确定度汇总表

上述各不确定度分量的来源彼此独立且不相关，采用相对标准不确定度合成，合成得相对标准不确定度：

6 扩展不确定度

在95%的置信概率情况下，取包含因子k=2，则扩展不确定度：

7 测量结果不确定度的报告与表示

在95%的置信概率情况下，包含因子k=2，测量结果：

8 结语

依据药典标准测定盐酸多巴酚丁胺注射液的含量，经过分析计算和对照各因素引入的不确定度大小进行综合考量。结果得出，不确定度主要来源于人员因素，包括天平称量和定容体积，其它因素引入的不确定度相对较小。因此在测定过程中，样品制备过程中应选择校准过的仪器和容量瓶，定期维护，使其保持良好的工作状态；提高人员操作技能，定期对检验人员进行实操培训和加强实验室内部人员比对试验，减少人为误差，提高实验室检验结果的准确性。