血清LncRNA TapSAKI对肾结石患者术后并发症的预测价值

肾结石是指机体代谢异常、尿路病变或者药物因素等所致的聚集于肾脏的晶体物质，主要临床症状包括不同程度腰疼、排尿困难、血尿等，好发于男性

。肾结石严重时需外科手术治疗，经皮肾镜取石术是目前临床治疗肾结石的主要手段，具有结石清除率高，术后出血少，恢复快等优点

。但是，取石术后患者常出现不同程度感染、尿瘘、输尿管损伤等并发症，严重影响患者预后

。寻找有效手段提前预测术后并发症发生情况，并制定针对性护理干预措施，对改善患者预后具有重要意义。LncRNA TapSAKI属LncRNA家族成员，研究显示

，其表达上调通过加速肾组织的凋亡而致脓毒症，进而诱发急性肾损伤。我们推测，LncRNA TapSAKI可能参与了肾脏疾病的发生、发展，并与预后有关，但是目前鲜见相关报道，本研究通过测定其在肾结石患者中的表达水平，旨在探讨其在肾结石取石术后并发症发生过程中的作用。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2020年5月至2021年4月辽健集团铁煤总医院收治的行经皮肾镜取石术的肾结石患者103例为研究对象，所有患者均行经皮肾镜取石术，根据术后14 d内患者是否出现并发症将其分为并发症组和无并发症组。并于同期随机选取60例健康体检者为对照组。各组研究对象性别、年龄、BMI、FPG等基线资料比较，差异无统计学意义(

＞0.05)，具有可比性，见表1。本研究获得医院伦理委员会的批准，所有患者及家属均签署手术知情同意书。

称量100g钼精矿，分别加入助溶剂9g Co-NC，8g复合氟化物，200mL 30%HCl，反应温度 75℃，充分搅拌反应，分别考察 1、1.5、2、2.5、3、3.5h 反应时间对铁和硅的含量影响，结果见表2。

1.2 选取标准 纳入标准：患者符合《泌尿系统结石诊治指南》

中关于肾结石诊断标准；符合经皮肾镜取石术手术指征，且无手术禁忌证；所有患者均完成术后的定期随访，且随访资料齐全。排除标准：心功能障碍及肝功能不全的患者；肾积水、肾小管中毒、各类肾炎等肾脏疾病；患者曾接受过传统开放或者腔镜治疗者；急、慢性炎症反应性疾病以及自身免疫性疾病患者；甲状腺功能亢进、痛风等可能影响本研究结果的疾病；纳入研究前接受过抗凝药物、类固醇类药物治疗者；精神疾病患者及恶性肿瘤患者；孕产妇及哺乳期女性患者。

1.3 方法

习近平绿色发展理论考虑发展问题时，具有十分宽泛的视野。不仅注意到局部细节，而且考虑了战略大局；不仅正视现实问题，而且回溯过去，展望未来；不仅立足国内，而且综合考虑国际形势的变化发展。

1.3.2 血清炎症因子水平检测 抽取肾结石患者入院次日(术前)清晨空腹肘静脉血5 mL，健康体检者于入院当日清晨空腹抽取5 mL肘静脉血，血液标本置于含EDTA的抗凝试管中室温下静置1 h，以3 000 r/min的转速离心，离心半径10 cm，离心持续时间10 min，留取血清并将其分装到两个试管中，在－80 ℃冰箱中保存，留待检测。其中1管试管采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β，单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平，相关试剂盒购自于上海瑞番生物科技有限公司，检测仪器为铂金埃尔默企业管理(上海)有限公司提供的EnVision型多功能酶标仪，检测过程严格按照试剂盒上相关说明进行。

1.4 随访 对所有患者术后均进行随访，随访方式为住院复查、出院后的电话和门诊复查，随访时间至少14 d以上，随访终点为患者出现感染、出血、输尿管损伤、尿瘘等并发症。

一、准备好行装。早些拟出一个单子，写出要带的东西，可以避免出发前临时忙乱。如果到东南亚旅游，可别忘了，那里永远都是夏天。您的夏季衣服一定别忘了带。很多人在国内住过酒店，就以为国外的酒店也啥都有，不用准备，这就错了。许多国家的酒店，别管多高档次，牙具、拖鞋都不预备。如果忘记带，小事也能让你很尴尬。

1.3.3 血清LncRNA TapSAKI水平检测 检测另1试管中的血清LncRNA TapSAKI水平，检测方法如下。①提取总RNA：在无菌环境下冰上冻融血清，采用TRIzol试剂(焦作路非凡生物科技有限公司，生产批号：JMS12279)提取血清中的总RNA，操作过程参考说明书进行，利用紫外分光光度计测定提取得到的总RNA浓度及纯度，得到OD 260/280比值在1.9～2.1的RNA即纯度最高，留存。②逆转录合成cDNA：根据QuantiTect Reverse Transcription逆转录试剂盒(天津泰泽兴业生物科技有限公司，生产批号：205314)将RNA逆转录合成为cDNA。③检测LncRNA TapSAKI水平：参考Perfectstart Taqman qPCR master mix试剂盒(上海瑶韵生物科技有限公司，生产批号：TQ2301-01)说明，以cDNA为模板进行扩增，GAPDH为内参，其中LncRNA TapSAKI上游引物序列为5’-GCCTGGTCAAAGTCCATCC3’，下游引物序列为5’-TAACATA GGTCTCGTCTCTGCTC-3’，GAPDH 上 游 引 物 序 列 为 5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’，下游引物序列为5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’，上述引物序列均由上海生工合成。扩增后按照实时荧光定量PCR 法(qRT-PCR)构建20 μL反应体系：SYBRPremix Ex Tap Ⅱ共9 μL，cDNA共2 μL，正向引物0.8 μL，反向引物0.8 μL，并加入无酶蒸馏水7.4 μL。反应条件设置为95 ℃预变性60 s，循环1次，95 ℃变性，持续时间20 s，60 ℃退火，持续时间30 s，72 ℃延伸，持续时间20 s，上述程序循环36次。LncRNA TapSAKI 相 对 表 达 量 采 用2

表 示。

1.3.1 经皮肾镜取石术 所有患者均行经皮肾镜取石术治疗，患者全麻后取截石位于手术台上，经输尿管插管后将膀胱镜置入输尿管导管中，并及时调整体位为仰卧位，将腰腹垫高后在手术消毒皮肤表面L

间隙做长度≤1 cm的微小切口，穿刺定位到肾盏中心，同时结合B超进一步定位穿刺位置并扩张筋膜，经皮建立手术通道后在膀胱镜直视下确定结石位置及大小，大结石(直径＞8 mm)先使用钬激光将结石击碎，再将其使用钳夹夹出，小结石通过流水冲出或直接取出，最后查看有无残留结石，必要时行留肾造瘘管。

2 结果

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同治六年（公元1867年）4月，59岁的刘崐接替李瀚章任湖南巡抚。同治十年(1871年)，63岁的刘崐因巴扬阿的诬告而被朝廷撤职。经两广总督李瀚章查明系无中生有，朝廷谕令“前抚来京”。但刘崐宦海沉浮对做官一事早已心灰意冷,故“因病请假”，在湘就医调理,寓居长沙,沉湎于酒以自放,世以“刘伶第二”称之。

2.1 并发症组并发症发生情况 术后对所有患者进行随访，术后14 d内，共有28例患者出现不同程度并发症，其中感染11例，出血12例，输尿管损伤4例，尿瘘1例，术后并发症发病率为27.18%(23/103)。

2.2 各组研究对象血清LncRNA TapSAK及炎症因子水平比较 各组研究对象血清LncRNA TapSAK及炎症因子水平比较，差异有统计学意义(

＝24.835、57.133、79.472、63.328、67.038，

＜0.05)，两两比较，并发症组、无并发症组血清LncRNA TapSAK及炎症因子水平高于对照组，且并发症组高于无并发症组，差异有统计学意义(

＜0.05)，见表2。

2.3 血清LncRNA TapSAK与炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1的相关性 经Pearson积矩相关分析，肾结石患者血清LncRNA TapSAK与炎症因 子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1 均 呈 正 相 关 性(

＝0.537、0.622、0.596、0.608，

＜0.05)，见图1。

2.4 血清LncRNA TapSAK对肾结石患者术后并发症的预测价值 绘制ROC曲线评价血清LncRNA TapSAK对肾结石患者术后并发症的预测价值，结果显示，血清LncRNA TapSAK预测术后并发症的AUC为0.835 (95%

：0.819，0.852，SEAUC＝0.029，

＜0.001)，约登指数0.69，临界值为1.92，敏感度、特异度分别为0.87、0.82，见图2。

3 讨论

LncRNA位于细胞质或核内的长度超过200 nt的无蛋白质编码功能的RNA转录本，通过多层次调控染色体转录及转录后蛋白质编码基因的表达而介导细胞的分化、增殖、凋亡，以及器官形成，物质代谢等生理过程，异常表达与感染、免疫反应等密切相关

。LncRNA在肾脏病发病过程中的作用尚处在研究初期，研究显示

，LncRNA TCF7通过激活miR-200c表达，可引发内质网应激反应而参与糖尿病肾病的发生、发展过程。Jiang等

发现，LncRNA HOTAIR表达上调与miR-34c相互作用共同促进肾组织凋亡，进而介导脓毒症所致的急性肾损伤。Zhang等

证实，LncRNA CHCHD4P4在肾结石患者中表达上调，其主要机制与促进草酸钙结晶沉积有关。基于上述研究，LncRNA功能的异常改变可能与肾脏疾病密切相关。

LncRNA TapSAKI位于人第22号染色体上，研究发现，其在缺氧损伤的肾小管上皮细胞以及内皮细胞中表达丰富，通过转染TapSAKI siRNA后可抑制TapSAKI表达，进而促进肾小管上皮细胞的增殖并抑制其凋亡

。本研究结果显示，肾结石患者血清LncRNA TapSAK水平高于健康体检者，并且经皮肾镜取石术后出现并发症的患者血清LncRNA TapSAK水平高于无并发症患者，提示该指标参与了肾结石发病过程，并与术后并发症有一定关系。研究还发现肾结石患者TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平显著升高，尤其是取石术后出现并发症的患者。相关性分析结果显示，肾结石患者血清LncRNA TapSAK与炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1均呈正相关性，上述结果提示，LncRNA TapSAK可能通过介导机体炎症反应而参与调控肾结石发病过程，并进一步与术后并发症有关。其机制可能是：尿液中LncRNA TapSAK表达上调导致草酸钙晶体大量沉积，诱发炎症反应，炎症反应又协助晶体通过细胞外基质进入肾间质，加重肾间质炎症反应而促使结石形成，两者协同作用不断加重肾结石病情

；与此同时，加重的炎症反应导致血管腔狭窄，血压升高，并进一步导致血管破裂出血，肾实质脆性增大，而手术过程中容易造成肾实质撕裂，最终引发感染、出血、输尿管损伤等术后并发症

。绘制ROC曲线表明血清LncRNA TapSAK能有效预测术后并发症发生风险，AUC为0.835，敏感度、特异度分别为0.87、0.82，提示术前通过检测血清LncRNA TapSAK水平，并以1.92为异常界值，有助于早期预测术后并发症发生风险，从而指导临床制定针对性干预措施，改善患者预后。

综上所述，血清LncRNA TapSAK表达上调通过介导机体炎症反应而参与肾结石患者经皮肾镜取石术后并发症的发生过程，早期检测该指标有望辅助临床早期预测术后并发症，从而指导临床治疗。

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