不同提取工艺对杏鲍菇多糖结构特征及免疫活性的影响

马高兴，王 晗，杨文建，苏安祥，裴 斐，马 宁，胡秋辉

（南京财经大学食品科学与工程学院，江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心，江苏 南京 210023）

食用菌多糖是近年来研究较多的一种活性高分子，在治疗代谢综合征和作为营养膳食补充剂方面疗效好且应用前景广阔。杏鲍菇是我国广泛栽培的一种食用真菌，具有多种活性物质（如多糖、多酚、蛋白质、矿物质和维生素），营养价值丰富。杏鲍菇多糖的营养活性已得到广泛研究，主要包括降压、抗菌、抗炎、抗病毒、抗糖尿病、降血脂、抗肿瘤、免疫调节和抗氧化等活性。然而，目前对不同提取方法获得的多糖结构和免疫活性进行比较并阐明其构效关系的研究较少。

研究表明，不同提取工艺对多糖的结构特征和营养活性有显著影响。目前，应用于不同来源天然多糖提取的工艺很多。由于蘑菇中的多糖大部分属于水溶性多糖，因此热水提取法被广泛应用。超声波辅助提取技术由于具有提取效率高、耗时短、操作简单等优点而被广泛应用。微波具有很强的穿透力，可以破坏真菌的细胞壁，从而能更有效地提取真菌中的有效成分，因此微波提取法也得到了广泛的应用。真菌的细胞壁可以被酶水解，此外，酶辅助提取具有条件温和、多糖得率高、能耗低的特点，有利于维持多糖生物活性。但酶的价格较高，因此酶辅助提取的应用受到了限制。近年来，亚临界液体萃取技术和脉冲电场辅助萃取技术等创新技术也被应用于从不同植物和动物中提取多糖组分，但由于成本和能耗的限制，这些技术还没有得到广泛应用。

由于不同提取纯化工艺分离的多糖结构特征不同，其生物活性也存在一定差异。综合考虑提取成本、提取率等因素，本研究采用热水法、超声波法和超声波辅助热水法提取杏鲍菇多糖。测定总糖、蛋白、糖醛酸和硫酸基质量分数等理化指标。采用高效液相色谱法、傅里叶变换红外光谱法和紫外光谱法分别对杏鲍菇多糖的单糖组成、分子质量、特征官能团进行分析。最后，探究杏鲍菇多糖对RAW264.7细胞的增殖作用和吞噬作用。本研究旨在比较不同提取方法得到的杏鲍菇多糖结构和活性差异，初步阐释杏鲍菇多糖的结构特征与活性之间的相关性，为制备具有特定营养活性的杏鲍菇多糖提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

杏鲍菇粉 南京华润苏果市场。

小鼠巨噬细胞RAW264.7 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所细胞库。

单糖标准品和T系列葡聚糖标准品（T-500、T-70、T-40和T-10） 瑞典乌普萨拉公司；三氯甲烷、正丁醇、95%（体积分数，下同）乙醇 上海源叶生物科技有限公司；杜氏改良Eagle（Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM）高糖培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素、pH 7.3、0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS） 美国赛默飞世尔科技公司；细胞计数盒-8（cell counting kit-8，CCK-8） 上海碧云天生物技术有限公司。

1.2 仪器与设备

1260高效液相色谱仪 美国Agilent公司；UV-9000紫外-可见分光光度计 上海Metash公司；数显恒温水浴锅常州国华电器有限公司；Allegra-64R型冷冻离心机美国贝克曼公司；KQ-500E型数控超声波清洗器 昆山超声仪器有限公司；Tensor27傅里叶变换红外光谱仪 德国Bruker公司；8000系列CO细胞恒温培养箱 美国赛默飞世尔科技公司。

1.3 方法

1.3.1 超声提取杏鲍菇多糖

杏鲍菇粉先用85%乙醇溶液浸泡12 h，去除色素、小分子脂类等物质。离心（4 000 r/min、20 min）除去乙醇，以固液比1∶36（/）向沉淀物中加入蒸馏水。然后在前期预实验所得最佳工艺条件（464 W、38 ℃、30 min、80 kHz）下进行超声处理。4 000 r/min、15 min离心后收集上清液。上清液60 ℃蒸发浓缩至原来体积的一半。然后用3 倍体积的95%乙醇溶液沉淀12 h。离心（8 000 r/min、20 min） 后用10 倍体积的蒸馏水重新溶解沉淀，并将提取液与Sevag试剂按照体积比5∶1混合除去蛋白。离心（10 000 r/min、15 min）后取上层悬浮液。将悬浮液加入透析袋（截留分子质量8 000～14 000 Da，后同），置于10 倍悬浮液体积的蒸馏水中透析24 h除去Sevag试剂，然后60 ℃蒸发浓缩，收集浓缩后的溶液并冻干，所得多糖粉末命名为U。计算多糖提取率（冻干多糖粉末质量与杏鲍菇粉末质量的比值×100%，后同）。

1.3.2 热水浸提杏鲍菇多糖

杏鲍菇粉先用85%乙醇溶液浸泡12 h。离心（4 000 r/min、20 min）除去乙醇，以固液比1∶20加入蒸馏水，在60 ℃下水浴加热2 h。随后，将混合物离心（4 000 r/min、15 min），收集上清液。上清液在旋转蒸发器中蒸发并浓缩到原体积的一半。然后用3 倍体积95%乙醇溶液醇沉12 h，离心（8 000 r/min、20 min）后得到沉淀。最后用10 倍体积的蒸馏水重新溶解沉淀，并将提取液与Sevag试剂按照体积比5∶1混合除去蛋白。离心（10 000 r/min、15 min）后取上层悬浮液。将悬浮液倒入透析袋，置于10 倍悬浮液体积的蒸馏水中透析24 h除去Sevag试剂，然后60 ℃蒸发浓缩，收集浓缩后的溶液并冻干，所得多糖粉末命名为H，计算多糖提取率。

1.3.3 超声辅助热水提取杏鲍菇多糖

杏鲍菇粉用85%乙醇溶液浸泡12 h。离心（4 000 r/min、20 min）除去乙醇，以固液比1∶36（/）向沉淀物中加入蒸馏水。然后在最佳工艺条件（464 W、38 ℃、30 min、80 kHz）下进行超声处理。然后60 ℃水浴加热2 h。随后，将混合物离心（4 000 r/min、15 min）并取上清液60 ℃蒸发浓缩至原来体积的一半。然后用3 倍体积95%乙醇溶液醇沉12 h。离心（8 000 r/min、20 min）后用10 倍体积的蒸馏水重新溶解沉淀，并将提取液与Sevag试剂按照体积比5∶1混合除去蛋白。离心（10 000 r/min、15 min）后取上层悬浮液。将悬浮液倒入透析袋，置于10 倍悬浮液体积的蒸馏水中透析24 h除去Sevag试剂，然后60 ℃蒸发浓缩收集浓缩后的溶液并冻干，所得多糖粉末命名为U+H，计算多糖提取率。

1.3.4 总糖、蛋白、糖醛酸和硫酸基质量分数的测定

分别采用苯酚硫酸法和考马斯亮蓝试剂盒测定杏鲍菇不同多糖组分的总糖和蛋白质量分数。

参考文献[11]的方法测定糖醛酸质量分数，在棕色瓶中配制质量浓度为1.25 mg/mL咔唑-乙醇溶液，于4 ℃冰箱保存备用。配制9.54 mg/mL四硼酸钠硫酸溶液，室温保存备用。取8 支试管，分别加入1.0 mL不同质量浓度（0、10、20、30、40、50、60、70 μg/mL）的葡萄糖醛酸标准溶液。然后分别加入5 mL 9.54 mg/mL四硼酸钠硫酸溶液，充分混匀后沸水浴10 min，待各管室温下冷却后再向其中加入0.2 mL 1.25 mg/mL咔唑乙醇溶液，混匀后沸水浴15 min，冷却后测定530 nm波长处吸光度。以葡萄糖醛酸质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖醛酸标准曲线。取1.0 mL适当质量浓度（约0.2 mg/mL）的多糖样品溶液，参考上述方法测定530 nm波长处的吸光度并代入葡萄糖醛酸标准曲线方程计算多糖样品溶液中糖醛酸质量浓度，按照式（1）计算糖醛酸质量分数。

式中：为多糖样品溶液中糖醛酸质量浓度/（mg/mL）；为所取多糖样品溶液中多糖的质量浓度/（mg/mL）。

采用氯化钡-明胶法测定硫酸基质量分数。称取1.0 g明胶，加入200 mL 60～70 ℃去离子水，待冷却后置于4 ℃冰箱静置12 h，得5 g/L明胶溶液。称取0.5 g氯化钡溶于100 mL 5 g/L明胶溶液中，得到5 g/L氯化钡-明胶溶液，4 ℃冰箱保存备用。配制不同质量浓度（0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL）硫酸钾标准溶液，分别取1.0 mL加入6 支试管中，依次向各管加入0.7 mL 8%（质量分数）三氯乙酸溶液、0.5 mL 5 g/L氯化钡明胶溶液，混匀后静置15～20 min，测定360 nm波长处吸光度。以硫酸钾质量浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制硫酸钾标准曲线。称取各多糖样品约10 mg，加至1 mL的1 mol/L盐酸溶液中，100 ℃水解6 h，60 ℃旋转蒸干，向残渣加入1 mL去离子水使之完全溶解。取0.2 mL水解液于试管中，添加去离子水定容至1.0 mL，再依次加入0.7 mL 8%（质量分数）三氯乙酸溶液、0.5 mL 5 g/L氯化钡-明胶溶液，混匀后静置15～20 min，测定360 nm波长处的吸光度。另取0.2 mL水解液，添加去离子水至溶液体积为1.0 mL，再依次加入0.7 mL 8%（质量分数）三氯乙酸溶液、0.5 mL 5 g/L明胶溶液，测定360 nm波长处的吸光度。将两次反应体系的吸光度之差代入硫酸钾标准曲线方程可得多糖样品硫酸钾的质量浓度，最后按式（2）计算多糖样品中硫酸基质量分数（以硫酸钾计）。

式中：为多糖样品中硫酸钾质量浓度/（mg/mL）；为所取多糖样品溶液的体积/mL；为所取多糖的质量/mg。

1.3.5 紫外光谱分析

配制0.5 mg/mL多糖溶液，采用UV-9000紫外-可见分光光度计在200～400 nm范围内扫描。分析260 nm和280 nm波长处是否有吸收峰，确定样品中是否含有核酸和蛋白质。

1.3.6 傅里叶变换红外光谱分析

多糖样品采用傅里叶变换红外光谱仪在4 000～500 cm扫描32 次，分辨率为2 cm。

1.3.7 单糖组成分析

单糖组成的测定参考文献[13-14]的方法并稍作修改。用去离子水制备不同单糖标准溶液（2.5 mg/mL）。分别取100 μL不同单糖标准溶液加入试管中，加入100 μL 0.3 mol/L NaOH溶液和100 μL 0.5 mol/L 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮-甲醇溶液，在70 ℃鼓风干燥箱内反应2 h。冷却后，加入100 μL HCl（0.3 mol/L）溶液中和，加入1 mL去离子水。加入1.5 mL氯仿萃取5 min，离心（4 000 r/min、15 min）后弃去氯仿层，按上述步骤重复萃取3 次。处理后的单糖溶液经0.45 μm滤膜过滤后备用。

将5 mg的冻干多糖样品溶于5 mL 4 mol/L三氟乙酸溶液中，在密封玻璃管中110 ℃水解2 h。水解后蒸发浓缩干燥，加入5 mL甲醇洗涤5 次，去除多余的三氟乙酸，旋转蒸发去除有机溶剂后，加入1 mL去离子水，得到水解样品溶液。将100 μL的溶液转移到密封玻璃试管中，按照单糖标准品1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化的方法进行多糖样品衍生化，用0.45 μm微孔膜过滤后，采用1260高效液相色谱仪（配备C色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）和紫外检测器）进行分析。流动相为磷酸盐-乙腈（体积比83∶17）；流速1 mL/min；柱温25 ℃；进样量20 μL。

1.3.8 杏鲍菇多糖分子质量测定

参考文献[15]采用高效液相色谱法对杏鲍菇多糖的分子质量进行了分析。用去离子水配制质量浓度为2 mg/mL的不同分子质量（12.6、49.6、70.8、126、498 kDa）的葡聚糖标准品溶液，以及3 种多糖溶液（2 mg/mL）。色谱柱：TSK-GEL G4000 SWXL（7.8 mm×300 mm）；蒸发光检测器；柱温25 ℃；流动相：去离子水；流速0.6 mL/min；以各标准葡聚糖分子质量的对数（lg）为纵坐标，保留时间为横坐标，绘制分子质量拟合葡聚糖标准曲线。分别以不同色谱峰的峰面积百分比表征其分子质量分布比例。

1.3.9 杏鲍菇多糖的免疫调节活性测定

1.3.9.1 小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞培养

从液氮罐中取出小鼠巨噬细胞冻存管在37 ℃水浴15 min，加入1 mL完全培养基（含89%（体积分数）DMEM高糖培养基、10%（体积分数）胎牛血清和1%（体积分数）青霉素-链霉素，下同），然后将冻存管中培养液转移至无菌离心管，1 000 r/min离心3 min，弃去上清液，加入2 mL完全培养基后转移至T25培养瓶中，在37 ℃、5%（体积分数，下同）二氧化碳培养箱培养24 h后，弃去完全培养基，加4 mL PBS洗去未贴壁细胞后弃去PBS，加入2 mL完全培养基后轻柔地将贴壁细胞吹打下来，800 r/min离心3 min后弃去完全培养基，加入4 mL完全培养液将细胞轻柔吹散，移至T25细胞培养瓶中，在37 ℃、5%二氧化碳培养箱培养至细胞处于对数生长期，然后以1.5×10个/T25瓶的接种量进行传代，约活化2 次后取对数生长期细胞进行下一步实验。

1.3.9.2 3 种杏鲍菇多糖的细胞增殖实验

用DMEM高糖培养基配制不同质量浓度（0、5、10、25、50、100、200 μg/mL）的3 种多糖溶液，用0.22 μm微孔膜过滤后得到不同质量浓度的多糖培养基。待细胞生长至对数生长期，将T25瓶中的培养液弃去，加入4 mL PBS洗去未贴壁细胞后弃去PBS，加入2 mL新鲜完全培养基将贴壁巨噬细胞轻柔吹散，将巨噬细胞悬液接种于96 孔板，每孔加入100 μL细胞悬液（约2×10个/mL），37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养24 h后移去培养液。组每孔加入200 μL不同质量浓度多糖培养基；组每孔加入200 μL DMEM高糖培养基；组每孔不含细胞，仅加入200 μL DMEM高糖培养基；每组设置8 个平行。在37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养24 h后移去培养液，每孔加入10 μL CCK-8溶液，在37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养2 h后测定450 nm波长处吸光度，按照式（3）计算细胞增殖率。

式中：为不添加多糖样品的组吸光度；为只含有培养基的组吸光度；为添加样品的组吸光度。

1.3.9.3 3 种杏鲍菇多糖的吞噬能力测定

将巨噬细胞密度调整为5×10个/mL，以100 μL/孔接种于96 孔板上，在37 ℃、5% CO培养箱中培养24 h后移去培养基，参照1.3.9.2节实验进行分组。每孔加入200 μL不同质量浓度多糖培养基或DMEM高糖培养基，每组浓度设置8 个平行，培养24 h后，每孔加入中性红染色液20 μL，培养箱内孵育2 h。去除含有中性红染色液的细胞培养液，用PBS洗涤3 次。加入200 μL细胞裂解液，室温下摇床裂解10 min，测定样品540 nm波长处吸光度。按照公式（4）计算每孔的细胞吞噬率，以细胞吞噬率表征巨噬细胞吞噬能力。

式中：为不加样品的组吸光度；为只含有培养基的组吸光度；为添加样品的组吸光度。

1.4 数据统计与分析

实验设置3 个平行，结果以平均值±标准差表示。采用SPSS 26.0软件处理数据并进行单因素方差分析，采用Duncan检验进行显著性分析，＜0.05表示差异显著。采用Origin 2017软件作图。

2 结果与分析

2.1 3 种杏鲍菇多糖基本理化指标分析结果

如表1所示，3 种杏鲍菇多糖的提取率分别为3.13%、3.65%和4.57%。结果表明，3 种提取方法提取率无显著性差异。在提取率无显著差异的情况下，与热水提取法相比，超声波提取时间短、提取温度低，这是因为超声波能破坏真菌细胞壁，促进多糖的溶解。U+H的蛋白和总糖质量分数分别为4.44%和46.79%，高于U和H。超声波具有机械作用，从而促进了蛋白质的溶解，超声处理后再用热水提取，进一步促进了杏鲍菇中多糖和蛋白质的溶解。3 种多糖中均存在糖醛酸，表明多糖中存在酸性多糖。此外，U、H和U+H的硫酸基含量无明显差异。

表1 3 种杏鲍菇多糖的理化指标Table 1 Physicochemical properties of three polysaccharides from P. eryngii

2.2 3 种杏鲍菇多糖紫外光谱分析结果

核酸和蛋白质分别在260 nm和280 nm波长处有特征吸收峰。U、H和U+H的紫外吸收光谱如图1所示。3 种多糖在280 nm波长处有吸收峰，表明多糖中存在蛋白质，与蛋白质量分数分析结果相印证。

图1 3 种杏鲍菇多糖紫外光谱图Fig. 1 UV spectra of three polysaccharides from P. eryngii

2.3 3 种杏鲍菇多糖傅里叶变换红外光谱分析结果

傅里叶变换红外光谱可以显示多糖各基团的特征吸收峰。U、H和U+H的红外光谱范围为4 000～500 cm，如图2所示。所得峰均为多糖的典型吸收峰。多糖的红外光谱在3 400 cm附近有1 个宽而强的峰，表明多糖中存在羟基。在3 500 cm附近较宽的吸收峰为羟基的O—H伸缩振动所引起，因此，红外光谱在该区域存在吸收说明U、H和U+H含有羟基，表明这些物质是多糖。2 930 cm和2 360 cm附近的特征峰是由C-H伸缩振动引起的。在1 650 cm处的强吸收对应羰基的伸缩振动。然而，1 405 cm处宽而强的吸收峰可以归因于蛋白质—CH和—CH的对称变形。1 260 cm处的吸收峰可能由C—O—C拉伸振动所引起。此外，在1 150 cm和950 cm之间的吸收峰可归因于磷酸盐的拉伸振动。3 种多糖在1 100～1 010 cm处有强吸收峰，表明存在吡喃糖环结构。

图2 3 种杏鲍菇多糖傅里叶变换红外光谱Fig. 2 Fourier transform infrared spectra of three polysaccharides of P. eryngii prepared by different methods

2.4 3 种杏鲍菇多糖单糖组成分析结果

3 种杏鲍菇多糖样品单糖组成如图3所示。当保留时间为29 min时，3 种多糖均有较大的吸收峰，与标准品进行比较，证实该物质为葡萄糖，说明U、H和U+H主要由葡萄糖组成。保留时间为13 min时的吸收峰为甘露糖，保留时间为34.18 min时的吸收峰为半乳糖，保留时间为37.80 min时的吸收峰为木糖，保留时间为42.16 min时的吸收峰为岩藻糖。根据单糖组成分析，3 种多糖均由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成，但物质的量比不同。如图3所示，U中甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖的物质的量比为8.60∶80.90∶7.41∶2.68∶0.57。而另外两种多糖H和U+H的甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖物质的量比分别为9.36∶79.72∶8.18∶2.60∶0.42和6.75∶82.66∶7.14∶2.30∶1.12。其差异可能与提取方法不同有关。

图3 混合标准品（A）和3 种杏鲍菇多糖样品（B）单糖组成高效液相色谱图Fig. 3 High performance liquid chromatogram of mixed monosaccharde standard (A) and monosaccharide composition of three polysaccharides (B)from P. eryngii prepared by different extraction methods

2.5 3 种杏鲍菇多糖的分子质量分析结果

利用高效液相色谱仪测定U、H和U+H的分子质量分布，结果如图4所示。U、H和U+H的洗脱峰均为多重峰，但都不是单一的对称峰，说明3 种多糖都不是均匀多糖。根据标准分子质量拟合葡聚糖的线性回归方程为lg＝-3.392 5+29.413（＝0.993 3）。U在5.26、10.90 min和13.21 min处出现色谱峰，分子质量分别为13 152、281、53 kDa，分子质量分布比例分别为83.61%、3.02%、13.37%。H在5.62、10.89 min和13.16 min处出现色谱峰，分子质量分别为10 232、281、61 kDa，分子质量分布比例分别为93.15%、1.94%、4.90%。U+H在5.59 min和13.17 min处出现色谱峰，分子质量分别为10 471 kDa和60 kDa，分子质量分布比例分别为98.59%、1.40%。

图4 3 种杏鲍菇多糖高效液相色谱图Fig. 4 High performance liquid chromatograms of three polysaccharides from P. eryngii prepared by different extraction methods

2.6 3 种杏鲍菇多糖对RAW264.7细胞的增殖作用

采用CCK-8试剂盒测定3 种杏鲍菇多糖干预后巨噬细胞的增殖率以分析杏鲍菇多糖的毒性作用。由图5可知，U在低质量浓度（5、10 μg/mL）条件下对巨噬细胞有毒性作用，可能因为在超声作用下，不断有较大分子质量的多糖被提取出来，而随着超声时间的延长，部分大分子质量多糖会被降解为小分子质量多糖。不同分子质量多糖对巨噬细胞表现出不同的受体亲和力，而大分子质量多糖通常表现出较强的刺激活性。U在50～200 μg/mL范围内对巨噬细胞增殖有促进作用。H在实验质量浓度范围内对巨噬细胞均无毒性作用，H在高质量浓度（50～200 μg/mL）范围内对巨噬细胞增殖有显著促进效果（＜0.05）。U+H在测试质量浓度范围内均能显著促进巨噬细胞增殖，且在0～25 μg/mL范围内呈剂量-效应关系，在25 μg/mL时达到最大值，在50～200 μg/mL范围内有增殖效果但不呈浓度依赖性。本研究中3 种多糖对RAW264.7细胞的影响均表明U、H和U+H可以激活免疫细胞。

图5 3 种杏鲍菇多糖对巨噬细胞增殖作用影响Fig. 5 Effects of three polysaccharides from P. eryngii prepared by different extraction methods on the proliferation of macrophages

2.7 3 种杏鲍菇多糖对RAW264.7细胞吞噬能力的影响

吞噬作用可作为巨噬细胞活化的指标。巨噬细胞被激活后会增强增殖、吞噬作用，促进一氧化氮和细胞因子的产生以及细胞形态的改变，并抑制多种肿瘤细胞和微生物的生长。用中性红试剂盒测定3 种多糖对巨噬细胞吞噬能力的影响。由图6可知，与培养基中未添加多糖的巨噬细胞相比，3 种多糖对巨噬细胞吞噬能力均有显著的促进效果（＜0.05）。U在25、200 μg/mL条件下吞噬率分别为173.87%、193.45%，吞噬效果最佳。H在低质量浓度（5～50 μg/mL）条件下吞噬率最大为127.27%，在高质量浓度（100、200 μg/mL）下吞噬率分别为151.34%、163.64%。即H在低质量浓度条件下对吞噬率的影响显著低于高质量浓度（＜0.05）。U+H在低质量浓度（5～25 μg/mL）下吞噬效果最佳，最高可达到187.62%，在50、100、200 μg/mL条件下，吞噬效果显著下降（＜0.05）。相同质量浓度的3 种杏鲍菇多糖对巨噬细胞吞噬率的影响有明显差异，推测吞噬率的差异与多糖的结构差异相关。

图6 3 种杏鲍菇多糖对巨噬细胞吞噬作用的影响Fig. 6 Effects of three polysaccharides of P. eryngii prepared by different extraction methods on phagocytosis of macrophages

3 结 论

本实验采用不同方法制备杏鲍菇多糖，并对多糖的结构进行了初步表征，最后通过杏鲍菇多糖对增殖和吞噬作用的影响评价了杏鲍菇多糖的免疫活性。研究表明，不同提取工艺对多糖的结构特征和营养活性有显著影响。本实验结果表明3 种方法提取的多糖理化特性无明显差异，但单糖组成的物质的量比和分子质量有明显差异。在超声作用下，杏鲍菇中大分子质量多糖会被提取出来，随着超声时间的延长，部分大分子质量多糖会被降解为小分子质量多糖，所以超声提取多糖与水煮提取、超声辅助水煮提取多糖分子质量与分布比例有明显差异。而不同分子质量的多糖对巨噬细胞的刺激活性也有差异，大分子质量多糖通常表现出较强的刺激活性，所以超声提取多糖在低质量浓度下会表现出轻微毒性，水煮提取多糖和超声辅助水煮提取多糖在所有实验质量浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用，并能激活细胞吞噬活性。综上，3 种杏鲍菇多糖均具有一定的免疫活性，可以激活巨噬细胞并增强其吞噬活性，但作用效果差异明显。免疫活性的差异可能与多糖的单糖组成和分子质量有关。未来关于3 种杏鲍菇多糖增强免疫活性的机理有待进一步研究。