GPR160 介导骨癌痛大鼠脊髓中枢敏化的机制研究*

骨癌痛 (bone cancer pain, BCP) 常发生在癌症晚期的骨转移病人中，如乳腺癌、肺癌和前列腺癌

，引起剧烈的疼痛反应。2020 年全世界约有1000 万人死于癌症

，约75%的癌症晚期病人经历中度或重度疼痛，至少一半的病人使用现有的药物无法有效的缓解

。阿片类药物作为癌痛三阶梯用药，发挥着重要的作用，但也存在明显的呼吸抑制、药物依赖等不良反应

，全世界超过1500 万人经历着阿片类药物使用障碍 (opioid use disorder, OUD)，急需寻找新的药物和作用靶点。目前BCP 发病机制不清，最新的研究专注于BCP 的细胞和分子机制，以开发新的靶向治疗

。

1.2 基于项目学习理论的复习 项目学习是一种通过完成一个项目(课题)来促进学习者学习的方式，它以建构主义为理论指导，以小组合作的方式进行规划和解决项目任务。项目学习强调以项目任务驱动学生学习，它以信息加工心理学和认知心理学为基础，强调学习的过程以学生的主动、合作学习为主，认为学习是学生自主构建知识的过程[2]。根据项目学习理论，新高考生物学复习尤其是“二考”复习从学生出发、以学生的问题为导向，指导学生对考试内容进行自主构建、合作交流完成复习任务，达到对知识的深度学习和熟练应用。

G 蛋白耦联受体 (G protein-coupled receptors,GPCRs) 是人类最大的膜蛋白受体家族，已经发现超过1000 个人类GPCRs

。GPCRs 作为药理学靶点一直备受关注，靶向GPCRs 的药物占全球治疗药物市场份额约27%

。GPCRs 广泛分布于外周和中枢神经系统，是疼痛治疗最重要的靶点之一，针对每一种GPCRs 亚型特异性的药物开发，都可能会提高镇痛药的疗效，并最大限度地减少不良反应

。

GPR160 (G protein-coupled receptors 160) 受体在物种间高度保守，广泛存在于人类和啮齿动物中枢神经系统中

。研究表明，GPR160 受体参与了神经病理性疼痛的产生和维持，鞘内注射GPR160-siRNA 能有效缓解痛觉过敏现象

。目前尚未发现GPR160 受体在BCP 中的相关报道，GPR160 受体是否参与BCP 的发病机制，以及如何影响BCP 的发生发展，将是本研究探讨的内容。本研究首次发现GPR160受体参与BCP大鼠脊髓中枢敏化的作用，为开发以GPR160 受体为靶点的药物提供实验依据。

方 法

1.主要试剂和仪器

主要试剂：GPR160 抗体（美国Invitrogen）、GPR160-siRNA（上海吉玛）、BCA 蛋白浓度试剂盒（碧云天）、逆转录酶和SYBR

Green (Thermo Scientific)、ELISA 试剂盒（联科生物）。

CatWalk 步态分析结果显示，与BCP 组大鼠相比，siGpr160 组大鼠在最大触地面积(

＜ 0.001)、最大触地面积时最大压强(

＜ 0.05)、平均压强(

＜0.001)显著增加（见图3D-F）。MWT 结果提示，鞘内给药后，siGpr160 组MWT 在BCP 术后第10 天(

＜ 0.05)、12 天(

＜ 0.001)显著升高（见图3G）。Western Blot 结果显示，与BCP + sieGfp 组相比，BCP + siGpr160组GPR160蛋白显著下降（

＜ 0.001，见图3H）。

在嫁接之后要对嫁接苗利用拱棚覆盖进行温度管理，头3天白天保持28-30℃，夜间18-20℃，土温25℃左右。3天后逐渐降低温度，白天在25-27℃，夜间17-20℃。6天后可把小拱棚的薄膜掀开一部分，逐渐扩大，逐步降低空气相对湿度，8天后去掉小拱棚。

2.实验动物与分组

雌性SD 大鼠，体重180～200 g，由浙江省医学科学院实验中心提供（伦理审批号：2021-JUM 097），动物饲养于22±2℃室温下，维持大鼠12 h/12 h 昼夜节律，自由摄食摄水。本实验严格按照国际疼痛学会 (International Association for the Study of Pain,IASP) 关于应用动物进行疼痛研究的伦理纲要进行操作，整个过程尽量减少动物的不适和使用量。

“大搬快治”工作开展以来，各级党委政府领导高度重视，省、市主要领导、分管领导25次对“大搬快治”工作作出批示。层层落实工作责任，通过及时召开各类动员会、部署会、推进会，白天干完晚上干，密集开展实地调研、督查指导，发现一个问题，当场解决一个问题，真正做到问题不过夜、工作不停歇，有力推动工作落实。如景宁畲族自治县实行“督战令”制度，县委书记、县长亲自督导“大搬快治”工作；莲都区落实“后进约谈”机制，对工作不力的乡镇（街道）实行问责约谈，有效保障了“大搬快治”的工作进度。

雌性SD 大鼠92 只，第一部分分组：正常组（Naïve 组，

= 8）、假手术组（Sham 组，

= 8）和骨癌痛组（BCP 组，

= 8）进行

Frey 机械痛阈测定，其中Sham 组和BCP 组在第18 天取材用于CT (

= 3)、HE (

= 3)和免疫荧光(

= 2)。第二部分分组：Sham 组和BCP 组，Sham (

= 8)组和BCP 组(

= 8)用于RT-PCR 检测GPR160 的mRNA 表达；Sham 组、BCP 6 天、BCP 12 天和BCP 18 天用于Western Blot 检测GPR160 蛋白。第三部分分组：Sham 组(

= 8)、BCP 组(

= 8)、BCP +sieGfp 组(

= 8)和BCP + siGpr160 组(

= 8)用于

Frey 机械痛阈测定和步态分析，另Naïve 组 (

=4)作为正常组对比；其中Naïve 组(

= 4)、Sham 组(

= 4)、BCP 组(

= 4)和BCP + siGpr160 组(

= 4)用于TNF-α、IL-1β 和IL-6 的Western Blot 和ELISA检测。

3.实验流程

第一部分：实验动物适应环境3 天后，于BCP造模前、造模后6 天、12 天和18 天进行

Frey机械痛阈测定，其中于造模后12 天取材进行免疫荧光实验，第18 天取材进行HE 和CT 检测。第二部分：实验动物适应环境3 天后，进行BCP 造模（Sham 组注射灭活癌细胞），于造模后6 天、12天和18 天取材Western Blot 实验；于造模后第12天取材（Sham 组和BCP 组，

= 8）进行RT-PCR实验。第三部分：实验动物适应环境3 天后，进行

Frey 机械痛阈测定，然后BCP 造模（Sham 组注射灭活癌细胞），于造模后第3 天进行鞘内置管并验证成功后，于造模后第7 天、8 天、9 天、10天、11 天和12 天鞘内给药，并于造模后第6 天、7 天、8 天、9 天、10 天、11 天和12 天鞘内给药1 h后进行

Frey 机械痛阈测定，第12 天鞘内给药1 h 后进行步态分析，然后取材进行Western Blot 和ELISA 实验。

4. BCP 模型的建立

参照我们之前的方法

建立大鼠BCP 模型。将保存于液氮中的Walker 256 乳腺癌细胞株取出，37℃水浴复苏，取0.5 ml (2 ×10

) Walker 256 细胞种植于SD 大鼠腹腔，3～4 天后出现腹水。抽出腹水，用Hank's 液洗涤3 次，细胞计数。采用戊巴比妥钠麻醉(50 mg/kg)，在左胫骨中下1/3 处纵向切开皮肤暴露胫骨，用微量注射器抽取10 μl Walker 256 乳腺癌细胞(1×10

)，从骨面向干骺端穿刺缓慢注入骨髓腔，Sham 组注入10 μl 灭活癌细胞，停留1 min 后拔出，立即用医用胶封堵针孔。

5.鞘内置管给药

ELISA检测结果显示，与Naïve或Sham组相比，BCP 组TNF-α (

＜ 0.001)、IL-1β (

＜ 0.001)和IL-6(

＜ 0.001)显著增高；与BCP 组相比，siGpr160 组TNF-α (

＜ 0.01)、IL-1β (

＜ 0.01)、IL-6 (

＜ 0.001)显著下降（见图4A-C）。Western Blot 结果显示，与Naïve 或Sham 组相比，BCP 组TNF-α (

＜ 0.001)、IL-1β (

＜ 0.001)和IL-6 (

＜ 0.001)显著增高；与BCP 组 相 比，siGpr160 组TNF-α (

＜ 0.01)、IL-1β(

＜ 0.05)、IL-6 (

＜ 0.05)显著下降（见图4D-G）。

6.机械痛阈的测定

采用

Frey 检测BCP 大鼠机械刺激缩足反射阈值 (mechanical withdrawal threshold, MWT)

，安静环境下，将大鼠置于底部为0.5 cm×0.5 cm 铁丝网格有机玻璃箱(20 cm×20 cm×25 cm)中，适应环境30 min。采用

Frey 电子式机械测痛仪测定MWT，对准大鼠左侧足底中间部位，逐渐加压，当大鼠出现缩足、舔足、甩足时记录压力值，测定3 次，每次间隔10 s，取其平均值为MWT (g)。在BCP 术前、术后第6 天、12 天、18 天测定大鼠左足MWT (g)。BCP + siGpr160 组大鼠在BCP 术后7～12 天连续鞘内注入GPR160-siRNA，对照组鞘内注入GPR160-sieGfp，于BCP 术前、术后6 天、8 天、10 天、12 天鞘内给药1 h 后进行测痛。

7.步态分析

使用CatWalk 步态分析系统对运动中的大鼠进行步态分析，步态分析已被证明是测量疼痛相关行为的有效方法。光线从通道底部荧光管中发出，穿过玻璃板，大鼠脚印与玻璃板接触时，光线向下反射，下方的高速摄像机捕捉到大鼠的脚印图像，全程采集大鼠脚印的参数。采集前进行训练，以匀速、无停顿地通过通道为准。CatWalk 系统常采用脚印的接触面积和强度作为衡量指标

，因此，本研究采用以下三个指标来评估骨癌痛前后的相关行为：①最大触地面积 (max contact area)：足部接触最多时的面积；②最大触地面积时最大强度 (max contact max intensity)：足部接触玻璃板时最大压强；③平均强度 (mean intensity)：足部触地面积最大时的平均强度。为了减小差异，本研究采用左后肢/右后肢比值来消除其他因素影响，数据采用左后肢/右后肢百分比形式。

8. CT 三维重建

建立骨癌痛模型后18 天，腹腔注射戊巴比妥钠(100 mg/kg)深麻醉后取材（造模侧下肢），对大鼠胫骨进行CT 三维重建，观察骨质破坏情况，根据之前的研究

，CT 扫描参数如下：螺旋扫描，管电压为120 kVp，层厚1 mm，层间距1 mm，核：U30u 中等光滑，SD 大鼠胫骨的CT 成像为高分辨率（视野为100 mm）。所有图像通过西门子PACS系统软件处理和分析。

9. HE 染色

建立骨癌痛模型后18 天，腹腔注射戊巴比妥钠(100 mg/kg)取材，大鼠左侧胫骨经4%多聚甲醛固定、脱钙、石蜡包埋、切片后进行HE 染色。使用显微镜（日本Olympus）采集分析图像，观察肿瘤生长及骨质破坏情况。

10. Western Blot

11. Real-time PCR

大鼠脊髓背角取材（同Western Blot 步骤），Trizol 法提取总RNA，测定浓度后使用逆转录试剂盒(Thermoscientific RevertAid cDNA synthesis Kit, USA) 将1000 ng RNA 逆转录为cDNA，使用PowerUp SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems)在实时荧光定量PCR 仪中进行Real-time PCR 反应，引物由上海生工设计合成。GPR160 Forward:5'-TTCCTTCGCTTACGGCTTCTTGC-3', Reverse: 5'-GCTTGGCTCTGGACAGATTAC-3'; β-actin Forward:5'-ATCACTATCGGCAATGAGCGGTTC-3', Reverse;5'- TGTTGGCATAGAGGTCTTTACGGATG-3'。PCR扩增条件为：(50℃, 120 s; 95℃, 120 s)；扩增循环 40次(95 ℃, 15 s; 60 ℃, 60 s)；溶解(95 ℃, 15 s; 60 ℃,60 s; 95 ℃, 15 s)。荧光实时定量PCR 采用2

法分析，相对表达量采用与β-actin 的比值；

ct、

ct 计算公式：

ct = 目的基因CT 值-内参基因CT 值；

ct =

ct（处理组）-

ct（对照组）。

12.免疫荧光

CatWalk 步态分析系统作为研究机械性疼痛的方法

，本研究采用触地面积和压强作为参考指标，数据分析结果显示，与Sham 组相比，BCP 组大鼠在最大触地面积(

＜ 0.001)、最大触地面积时最大压强(

＜ 0.05)、平均压强(

＜ 0.01)均显著降低（见图3 A-F）。

13. ELISA

大鼠BCP 造模后12 天取材（同Western Blot步骤），裂解液提取组织蛋白，10 倍稀释蛋白上清，参照文献

方法，并依据试剂盒说明书进行操作，加样、富集孵育、洗板、加酶标抗体、再次洗板、底物显色和终止反应，然后酶标仪读取450 nm 下样本的OD 值。拟合标准曲线，将样本OD 值代入方程，计算样品浓度。

14. 统计学分析

大鼠腹腔注射戊巴比妥钠(100 mg/Kg)深麻醉后，在冰上快速取出大鼠脊髓腰段膨大处(L

-L

)脊髓背角，液氮储存。组织40 mg 加入RIPA 裂解液（含PMSF和磷酸酶抑制剂）300 μl，超声破碎匀浆，冰上裂解30 min，4℃ 14,000 r/min 离心20 min，吸取上清。BCA 法测定蛋白浓度，上样缓冲液1:4配比，每孔加入40 μg 蛋白样SDS-PAGE 胶电泳，湿法转膜，5% BSA 室温封闭2 h，一抗4℃孵育过夜，二抗室温2 h，ECL 显影。使用Image J 软件对图片进行灰度分析，GPR160 蛋白相对表达量以GPR160 蛋白条带灰度值与GAPDH 条带灰度值比值表示。

(4)螺栓的标高控制。在螺栓高度的控制环节，其关键是安装时入柱螺杆与柱箍筋的焊接质量和定位标高控制，而对过程的跟踪复查仅是纠偏。

结 果

1.骨癌痛模型的建立

痛阈结果显示，与Naïve 组或Sham 组相比，BCP 组大鼠在6 天(

＜ 0.05)、12 天(

＜ 0.001)、18天(

＜ 0.001)的MWT 显著降低（见图1A）。CT成像显示，与Sham 组相比，BCP 组大鼠在术后18天左侧胫骨出现明显的骨质破坏（见图1B）。胫骨组织病理学结果显示，Sham 组骨髓腔可见正常的骨小梁结构（见图1C），而BCP 组骨髓腔内可见被侵蚀的骨小梁结构，骨髓腔充满核大深染的肿瘤细胞（见图1D）。

2. GPR160 在BCP 大鼠脊髓中的表达

免疫荧光结果显示，与Sham 组相比，BCP术后12 天GPR160 的表达增强（见图2A 和图2C）；在BCP 术后12 天脊髓背角上，与对侧(Contra)相比，造模侧(Ipsi)的GPR160 表达增强（见图2B）。Western Blot 结果显示，与Sham 组相比，GPR160 蛋 白 在BCP 术 后6 天(

＜ 0.05)、12 天(

＜ 0.01)、18 天(

＜ 0.001)明显增高（见图2D）。Real-time PCR 结果显示，与Sham 组相比，BCP 组GPR160 mRNA 表达显著增加（

＜ 0.001，见图2E）。

3.鞘内注射GPR160-siRNA 对BCP 大鼠MWT及GPR160 蛋白的影响

大鼠BCP 造模后12 天，戊巴比妥钠(50 mg/kg)深度麻醉，经心尖穿入静脉针至升主动脉，快速灌注PBS 500 ml 后，再用4%多聚甲醛250 ml 灌注固定，将脊髓取出放入4%多聚甲醛固定6 h，然后在15 %和30%蔗糖溶液中梯度脱水48 h，擦干水分后使用OCT (Sakura)在-20℃包埋，切成16 μm厚的切片置于载玻片上，放入-80℃保存。切片使用PBS 洗涤，5% BSA 封闭室温1 h，然后在4℃冰箱孵育一抗GPR160 (orb215127, Biorbyt, Cambridge,UK) 过夜，第2 天室温复温30 min, PBS 洗涤后，在室温下二抗[Abcam, donkey anti-rabbit IgG H&L(Alexa Fluor

488), ab150073]孵育50 min, PBS 洗涤后滴加DAPI (Vectashield-DAPI mounting medium)封片，使用荧光共聚焦显微镜 (Zeiss, Germany) 采集图像。

实验所用主要仪器：实时荧光定量PCR 仪(Applied Biosystems)、电泳仪(Bio-Rad)、多功能酶标仪(Bio Tek)、超微量分光光度计(Thermo Scientific)、超声波细胞粉碎机（新芝）、共聚焦显微镜(Zeiss,Germany)、动物步态分析系统(CatWalkXT)、化学发光成像系统(GeneGnome)、

Frey 电子式机械测痛仪(BME-404)。

新兴媒体的发展则打破了时空的局限，让图书馆信息服务成为一个不受时空限制的交互平台。读者即可以随时随地通过各种智能终端实现对图书馆资源的访问和数据下载，同时还可以利用即时通信工具或网络论坛方式进行问题的咨询和发布，馆员也可以实现随时随地的回复相应的咨询问题，使得馆员为读者服务的手段更加便捷化。

4.鞘内注射GPR160-siRNA 对骨癌痛大鼠脊髓TNF-α、IL-1β 及IL-6 蛋白表达的影响

将大鼠戊巴比妥钠(50 mg/kg)麻醉后，在L

棘突处做一纵向切口，分离L

棘突旁肌肉和椎板，切除L

棘突，暴露L

椎间隙，用26 G 针刺破黄韧带和硬脊膜，经破口处置入PE-10 导管2 cm，18 G 硬膜外穿刺针在皮下穿一条隧道至颈背部，外露2 cm 固定，外口封闭，防止脑脊液外漏。术后第2 天经PE-10 管注入2%利多卡因15 μl 测试，30 s内出现下肢麻痹，30 min 左右恢复，表明置管成功。置管后单笼饲养，观察2 天，出现肢体感觉或运动障碍、导管脱出的剔除，于BCP 造模后第7 天、8 天、9 天、10 天、11 天、12 天开始鞘内注射GPR160-siRNA 或者对照药物 (GPR160-sieGfp)，在BCP 造模后第12 天取材进行实验。

实验需测取同种激励不同电场条件下经减振器减振后的加速度衰减的数据。实验采用型号为JZ-5激振器给减振器提供正弦力F，采用DH5299动态信号采集器和GF-20型号的功率放大器对激振器的振幅A和频率ω进行控制以及采集各传感器的数据，加速度传感器型号是YJ9A的压电传感器；压电力传感器的型号为YFF-1。按照上述的实验器材以及实验想法设计出实验系统示意图3，其中虚线框中的直流稳压电源和高压放大器组成了直流稳压高压电源，为后续对比实验提供1000V的稳定高压。

讨 论

骨癌痛 (BCP) 是一种复杂的慢性疼痛，国际上有多种研究骨癌痛的动物模型

，这些模型在一定程度上可以产生与临床骨癌痛病人相似的疼痛状态，以便观察骨癌痛的发生发展、骨质破坏、中枢及外周组织中的分子生物学改变。

本研究采用姚明等

建立的骨癌痛模型，在造模后第6 天左足开始出现明显的痛阈下降，且疼痛的程度和时间与行为学表现一致；HE 染色可见骨髓腔内大量癌细胞和遭到破坏的骨小梁，CT 三维重建再次验证了BCP 组存在明显的骨质破坏；行为学CatWalk 步态分析结果显示，BCP 组大鼠左足在最大触地面积、最大触地面积时最大压强、平均压强出现显著下降，这与相关的研究结果一致

，验证模型成功。

随着GPR160 受体的配体CARTp 的确定

，CARTp/GPR160 信号通路也被认为与奖赏、成瘾、厌食和抑郁等有关

，其在疼痛中的作用也受到重视。Yosten 等

在坐骨神经慢性压迫模型 (chronic constriction injury, CCI)上发现GPR160 受体参与痛觉过敏的发生。

4.3 词汇密度与“个性风格词汇”之计算。词汇密度计算方中，实词是指名词、动词、形容词和副词四类。根据Biber(2000：62),计算公式是：词汇密度=实词数÷总词数×100%。Ure指出，词汇密度可以作为区别语体正式程度的一个指标，某文本的词汇密度越高，则该文本的语体越接近正式端；反之，若该文本词汇密度低，则可以说明，该文本越靠近非正式端，越接近自然口语。据Ure(1971：443-452)的研究，口语的词汇密度大概通常低于40%，而在书面语里，词汇密度通常要超过40%。

为了探究GPR160 受体在骨癌痛中的表达，本研究发现，与Naïve 或Sham 组相比，BCP 组大鼠脊髓中GPR160 蛋白和mRNA 表达量均显著增加，提示BCP 上调脊髓中GPR160 受体的蛋白和mRNA的表达，这与之前在神经病理性疼痛中的研究结果一致

。为了进一步明确GPR160 受体在BCP 中的作用，本研究鞘内注射了GPR160-siRNA，结果显示，与BCP + sieGfp 组 相 比，BCP + siGpr160 组 大 鼠MWT 显著降低，GPR160 蛋白也显著下降，提示抑制GPR160 受体有助于减轻骨癌痛；CatWalk 步态分析结果提示，与BCP 组相比，BCP + siGpr160 组大鼠在最大触地面积、最大触地面积时最大压强、平均压强出现显著的上升，提示疼痛程度减轻。但同时也观察到，鞘内注射GPR160-siRNA 并没有完全逆转BCP 模型大鼠的痛阈下降程度（MWT 曲线并未达到基线水平），提示GPR160 受体途径可能是参与大鼠骨癌痛发生和维持的重要机制之一。

炎症因子（TNF-α、IL-1β 和IL-6）在疼痛信号转导过程中起着重要的作用

。本研究采用ELISA和Western Blot 检测了骨癌痛大鼠脊髓中的炎症因子，结果发现，与Naïve 或Sham 组相比，BCP组大鼠脊髓中的炎症因子显著升高，而在鞘内注射GPR160-siRNA 后，炎症因子水平出现显著下降；与BCP + sieGfp 组相比，BCP + siGpr160 组的MWT 明显的上升，提示抑制GPR160 受体后，减少了炎症因子的释放，减轻痛觉过敏反应。

1.3 观察指标 对两组患儿治疗前后不同时段心率(HR)、呼吸频率(R)、平均压、血氧饱和度(SpO2)、新生儿行为神经评分(NBNA)以及治疗后不良反应发生情况进行综合评价[6]。NBNA神经功能评分主要包括行为能力、主动肌张力及原始反射等5个方面，总分>35分表示正常，<35分表示异常[7]。

虽然BCP 的发病机制不清，但目前的普遍观点归纳为：①周围神经损伤和炎症介质引起的伤害感受器的外周敏化

；②脊髓中广泛的神经化学变化导致的中枢敏化

；③下行抑制系统的丧失和异化系统的激活

。神经元和胶质细胞在BCP 发生发展过程中起着重要的作用，在肿瘤细胞置入大鼠骨髓腔后，小胶质细胞和星形胶质细胞活化，释放大量的炎症因子（如TNF-α、IL-1β 和IL-6），上调细胞表面的受体（如P2X3R、TLR4 和CX3CR1），并激活胞内信号通路（如PI3K/Akt、NF-kB 和ERK通路）

。研究发现抑制TNFR1 和IL-6R 可减轻BCP 大鼠机械痛和热痛过敏

；同样，IL-1β 也可通过增加NMDA 受体NR1 亚基的磷酸化促进BCP

。GPR160 受体在脊髓中的神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞上表达

，参与神经元和胶质细胞的信号传递。在鞘内注射GPR160-siRNA 后，炎症因子水平下降、MWT 上升，提示BCP 大鼠胶质细胞的活化和/或神经元-胶质细胞的交互作用可能受到了抑制。关于GPR160 受体在神经元-胶质细胞中如何影响BCP 的发展，我们将进一步深入研究。

本研究未进行GPR160 的过表达处理，没有进一步探究GPR160 在兴奋性神经元或抑制性神经元中的分布，接下来还将继续GPR160 参与疼痛调节直接机制的研究。综上所述，在本研究条件下，首次证明了GPR160 受体参与了脊髓水平大鼠骨癌痛的发生和维持，其机制可能与促进炎症因子释放有关，这为临床治疗提供了新的思路。

首次登记时，应严格按照规划审批图件准确客观的划分被登记建筑的基本单元情况，不仅无需仅依靠第三方测绘成果，反而可以发现其不当之处，有效杜绝一些测绘问题，例如重庆市于2010年就要求开发建设项目竣工后测绘的，必须结合规划审批图纸和房屋现场进行测量，房屋测绘结果应还原到规划审批的设计内容中去[8]。

利益冲突声明：作者声明本文无利益冲突。

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