不明原因习惯性流产患者淋巴细胞主动免疫治疗的效果分析

庞金雪

（德州市陵城区妇幼保健院妇产科，山东 德州， 253500）

习惯性流产又有“复发性流产”之称，临床将妊娠不足28周、自然流产次数超过2次以及胎儿体质量不足1 000 g的妊娠者称为习惯性流产。遗传因素、内分泌失调等均都参与了该病的发生过程，但其中发病原因不明的患者，占60%，因此临床就将其纳入“不明原因复发性流产”。临床研究发现，在维持正常妊娠过程中，母体免疫耐受、其他免疫调节具有至关重要的作用，同时封闭抗体还可以阻止免疫系统造成的损害。可见，实施淋巴细胞主动免疫治疗效果显著，可避免流产，提高妊娠率。

习惯性流产原因较为复杂，该病的发生与母体内分泌、免疫、染色体等多方面因素密切相关，已有研究明确指出，造成习惯性流产的最主要因素是免疫因素，习惯性流产患者的免疫因素以封闭抗体缺乏最为典型和关键。因此现阶段临床对习惯性流产患者的封闭抗体缺乏情况，多采取淋巴细胞主动免疫疗法，具体是指将淋巴细胞注入患者体内，促使淋巴细胞反复刺激患者的免疫系统，促使人类抗白细胞抗原的生成，继而合成滋养细胞交叉抗原封闭抗体，确保患者再次妊娠时封闭抗体可有效识别患者抗原并与之结合，有效阻断母体免疫系统对胚胎的攻击，保护其顺利生长并发育。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月～2020年11月德州市陵城区妇幼保健院收治的60例不明原因习惯性流产患者为研究对象，通过随机数表法分为对照组和观察组，每组30例。对照组患者年龄20～39岁，平均年龄（29.14±3.85）岁；流产次数2～5次，平均流产次数（3.56±0.78）次；孕周6～20周，平均孕周（12.47±2.33）周。观察组患者年龄20～38岁，平均年龄（29.56±3.56）岁；流产次数2～4次，平均流产次数（3.44±0.69）次；孕周5～20周，平均孕周（12.56±2.41）周。两组患者一般资料经比较，差异无统计学意义（＞0.05），具有可比性。所有患者和家属对本研究内容均知情，并签署知情同意书，本研究经过德州市陵城区妇幼保健院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①无感染征象、中毒症状者；②符合习惯性流产的诊断标准；③精神状态良好；④语言功能良好无交流障碍；⑤生命体征稳定。

排除标准：①沟通、认知障碍；②合并其他免疫系统疾病；③伴有急慢性感染者；④生命体征不平稳者；⑤呼吸衰竭；⑥合并呼吸系统疾病；⑦合并恶性肿瘤；⑧肝肾功能不全；⑨合并严重肺源性心脏病者；⑩合并代谢疾病或骨肿瘤者。

1.3 方法

对照组运用常规治疗。治疗前完善超声、尿常规以及人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测，严格以检查结果为准，取2 000 IU的HCG注射，1次/2周，直至患者妊娠12周后停止。同时肌肉注射20 mg黄体酮（生产企业：浙江仙琚制药，国药准字H33020828，规格：1 mL：20 mg×10支），1次/d，直至妊娠12周后停止。

观察组运用联合淋巴细胞主动免疫治疗。抽取患者丈夫20 mL上肘静脉血并加入抗凝剂，借助0.9%氯化钠溶液（生产企业：安徽双鹤药业，国药准字H20054037，规格：500 mL）冲洗淋巴细胞悬液，连续3次加入2 mL 0.9%氯化钠溶液稀释淋巴细胞（2.5×10/mL）。在其前臀内侧行放射状注射，每3周注射1次，连续注射5次为1个疗程。1个疗程结束后展开封闭抗体检测，若检测为阴性者，继续接受免疫治疗，但是治疗切勿超过2个疗程，同时加用黄体酮治疗，方式同对照组。

1.4 观察指标

妊娠结局。主要观察未受孕、流产以及妊娠成功率。妊娠成功率越高，表示患者妊娠结局越好。

血清因子及调节蛋白因子。主要对比重组干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL-8）以及细胞表达分泌因子（RANTES）；治疗前后患者空腹状态下采集5 mL静脉血给予离心处理（转速2 500 r/min，离心10 min），取上清液后待检，IL-8借助酶联免疫吸附法测定，IFN-γ通过抗体夹心免疫PCR检测，RANTES通过ELISA试剂盒（生产企业：上海通蔚生物，批号：TW15997）检测。

自然杀伤（NK）细胞含量及T细胞亚群表达水平。T细胞亚群主要观察CD3以及CD8。NK细胞含量检测注意事项：靶细胞必须新鲜，且细胞存活率＞95%。比色时保持恒定环境温度。LDH基质液应临用前配制。治疗前后患者空腹状态下采集3 mL静脉血，借助流式细胞仪对T细胞分化群展开检测。

雌孕激素水平。主要观察雌二醇、β-HCG以及孕酮。分别在治疗前后采集患者空腹状态下的血液标本给予离心处理（转速2 500 r/min，离心10 min），取血清后通过放射免疫法进行测定。

血液流变学指标。主要观察红细胞压积（HCT）、血浆黏度（PV）以及红细胞沉降率（ESR）和红细胞电泳时间（EEP）。分别在治疗前后采用粘度计、流式细胞仪以及电泳仪展开以上各指标的检测工作。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 两组患者妊娠结局比较

观察组妊娠成功率高达96.66%，对照组仅为76.66%，观察组妊娠结局较好，差异有统计学意义（＜0.05）。见表1。

2.2 两组患者血清因子及调节蛋白因子水平比较

治疗后，观察组患者IFN-γ表达较低，IL-8、RANTES表达较高，与对照组比较，差异有统计学意义（＜0.05）。见表2 。

2.3 两组患者NK细胞含量及T细胞亚群表达水平比较

治疗后，观察组患者NK细胞含量较低，CD3、CD8水平较高，与对照组比较，差异有统计学意义（＜0.05）。见表3。

2.4 两组患者雌孕激素指标比较

治疗后，观察组患者雌二醇、β-HCG以及孕酮水平明显提高，与对照组比较，差异有统计学意义（＜0.05）。见表4。

2.5 两组患者治疗前后血液流变学指标比较

治疗后，观察组患者HCT、PV、ESR、EEP等改善幅度较大，与对照组比较，差异有统计学意义（＜0.05）。见表5。

3 讨论

习惯性流产发病机制较为复杂，而女性在出现习惯性流产后，对于抗原识别能力大幅较低，而机体在受精卵种植和着床过程中也会出现免疫排斥现象。经研究证实，母体若无法分泌充足的封闭抗体，会直接影响胎儿的抗体调节能力，导致其降低促使妊娠失败。临床根据病因和发病机制，将习惯性流产分为免疫型、自身免疫型。其中免疫型为不明原因习惯性流产，而父母双方白细胞抗原的相容性较高，父方抗原无法准确刺激母体，会造成封闭抗体缺乏，因此不明原因习惯性流产也成为了现阶段临床研究的重点方向。

现阶段临床治疗习惯性流产，补充黄体酮是常用治疗方法，使用黄体酮后会直接刺激卵巢黄体，促使其分泌孕激素，确保受精卵正常着床，继而发挥自身免疫抑制作用，降低免疫介质水平、降低母体免疫反应。但随着临床研究的深入，发现黄体酮常规治疗效果欠佳，远期治疗效果较低，且长期、大量用药会造成患者出现不同程度的不良反应。

淋巴细胞主动免疫治疗是指提取父系外周血淋巴细胞并将其注入母体，诱导封闭型抗体产生继而提高母体免疫耐受程度，促使胚胎发育的同时纠正免疫紊乱现象，改善妊娠结局的同时提高妊娠成功率。此研究中的观察组，妊娠成功率高达96.67%，对照组仅76.67%，两组数据对比，差异有统计学意义（＜0.05）。分析原因：淋巴细胞主动免疫治疗后女性妊娠会恢复正常，继而阻断混合淋巴细胞的反应过程，确保并维持正常妊娠。临床研究发现，对此类患者进行淋巴细胞主动免疫治疗，患者封闭抗体阳性率高达70.0%，同时还可明显增加患者免疫耐受反应。IFN-γ若呈高反应表达，会加强巨噬细胞的抗原提效应，促使胚囊滋养细胞凋亡。T 淋巴细胞免疫紊乱，会强化细胞免疫耐受反应，而RANTES会加强淋巴细胞免疫平衡，继而缓解排斥反应。观察组患者经治疗后IFN-γ表达、NK细胞含量较低，IL-8、RANTES 表达以及CD3、CD8水平较高，和对照组对比，差异有统计学意义（＜0.05）。证实了淋巴细胞主动免疫治疗不明原因习惯性流产患者的效果和价值。

随着临床研究的深入，发现并证实了复发性流产的发生与机体雌孕激素水平偏低之间的密切关系，因此诸多学者对习惯性流产患者实施外源性雌孕激素补充方案+淋巴细胞主动免疫治疗。黄体酮注射液、β-HCG注射液等均为现阶段临床常见的治疗药物，以上药物与淋巴细胞主动免疫的联合治疗，可补充患者体内雌激素和孕激素，刺激体内雌激素分泌，并促使子宫内膜组织细胞吸收雌激素，有效提高机体内雌激素水平，促使其子宫内膜孕激素分泌，为子宫内膜发育提供保障，减少习惯性流产事件的发生概率。此研究结果示：观察组患者治疗后雌孕激素水平较高，血液流变学指标改善幅度较大，和对照组对比，差异有统计学意义（＜0.05）。以上各指标的变化，充分说明了淋巴细胞主动免疫治疗不明原因习惯性流产的效果和价值。