牛口蹄疫新型疫苗与传统疫苗免疫效果比较

樊丽，韦雪华，李星，常静，徐吉荣，张敏，刘德娟

（1.山东省泰安市动物疫病预防控制中心，山东 泰安 271000；2.山东省威海市动物疫病预防与控制中心，山东 威海 264300；3.山东省动物疫病预防与控制中心，山东 济南 250010；4.山东省肥城市畜牧兽医事业发展服务中心，山东 泰安 271600；5.山东省肥城市孙伯镇畜牧兽医站，山东 泰安 271600）

0 引言

口蹄疫（FootandMouthDisease，FMD）是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病，主要危害猪、牛、羊等的烈性疫病，是《中华人民共和国动物防疫法》规定的一类传染病，同时被列为《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020）》优先防治的第一位病种。该病目前尚无特效的药物治疗，安全有效的疫苗是预防控制FMD的先决条件[1]。

目前使用传统的灭活疫苗，免疫效力最优，但因纯化不完全，免疫后，以检测病毒非结构蛋白抗体为金标准的鉴别技术，难以精准区别免疫和野毒感染动物，即使应用改进的纯化技术，也不能完全清除与灭活病毒大小相同的非结构蛋白复合物，多次免疫后，仍能检测到病毒非结构蛋白抗体。口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失标记灭活疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株）属此类疫苗。该疫苗是利用基因缺失和病毒拯救等反向遗传技术，分别缺失FMDVO型和A型毒株的3B基因的优势表位，并重新拯救3B蛋白表位缺失病毒O/rV-1株和A/rV-2株，既保持了O型和A型毒株各自原有的良好免疫原性和增殖能力，又具备缺失3B基因的分子标记，属于国际上首创的口蹄疫O、A型双价基因标记疫苗。该双价3B标记疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株）对当前O／Mya-98、O／Cathay、O／PanAsia和O／Ind-2001毒株4个O型谱系毒株及A型Sea-97G1和G2分支毒株均能提供良好的免疫保护。本研究通过使用口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗和传统口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗进行首免、二免、三免，选用疫苗免疫后，拟定首免后28 d采血，以后每14 d采集血样，检测疫苗免疫抗体水平和口蹄疫病毒非结构蛋白抗体[2-3]。

1 材料与方法

1.1 疫苗及试剂盒

口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株），生产企业：内蒙古必威安泰生物科技有限公司，批号：20200606。口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（OHM/02株+AKT—III株），生产企业：内蒙古必威安泰生物科技有限公司，批号：20200508。口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒，生产企业：中国农业科学院兰州兽医研究所，批号：20201116129。口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，生产企业：中国农业科学院兰州兽医研究所，批号：20201111101-5；口蹄疫O型抗原，批号：101/32。口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，生产企业：中国农业科学院兰州兽医研究所，批号：20201127103-1；口蹄疫A型抗原，批号：103/27。

1.2 试验方案

用LB-ELISA方法检测口蹄疫O型、A型免疫抗体效价。诊断试剂由兰州兽医研究所提供，口蹄疫O型试剂盒批号2013090201，口蹄疫A型试剂盒批号2013091103。具体检测按照试剂盒使用说明书进行。口蹄疫O型、A型免疫抗体效价≥1∶64判定为合格。

2 试验方案与步骤

（1）试验动物。选取37头3月龄以上的健康及非结构蛋白阴性牛，其中口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失标记灭活疫苗试验组25头，口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗对照组7头，空白对照组5头。

（2）试验步骤。①安全检验：注射后观察10 d，10 d内免疫动物无异常，判定实验产品安全。②免疫方案：肌肉注射2 mL/头，首免后28 d进行二免，二免后14 d进行三免。③免疫后定期检测。选用疫苗免疫后，拟定首免后28 d采血，以后每14 d采集血样，用口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒，同时测定病毒非结构蛋白抗体。用口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测试剂盒检测免疫抗体。

3 结果与讨论

（1）不同疫苗牛口蹄疫免疫抗体O型检测结果见表1。

表1 不同疫苗牛口蹄疫免疫抗体O型检测结果

（2）不同疫苗牛口蹄疫免疫抗体A型检测结果见表2。

表2 不同疫苗牛口蹄疫免疫抗体A型检测结果

（3）不同疫苗牛口蹄疫感染抗体3ABC检测结果见表3。

表3 不同疫苗牛口蹄疫感染抗体3ABC检测结果

4 结束语

自20世纪70年代，随着分子生物学、免疫化学、生物工程学的良好发展，使牛口蹄疫疫苗的研发工作得到了更多的技术支持。如今，新型疫苗研究工作已经取得了较大的进步，但是大部分仍然处于实验室阶段。想要使新型疫苗顺利的进行规模化生产，需要继续保持严谨的研究态度，优化新型疫苗的研发成果，使其在牛口蹄疫防治工作中发挥出更大的作用。