浏阳市规模羊场小反刍兽疫流行情况和抗体水平分析

赵琴，杨辉* ，席旭晴，张建超，李敏，王承义，陈功，聂厚湘，唐建如，陈涛

（1.湖南省浏阳市农业农村局 长沙 410300；2.河北省固安县农业农村局 河北廊坊 065500）

小反刍兽疫（peste des petis ruminants，PPR）是由副粘病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（peste des petis ruminants virus，PPRV）引起的，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征的急性接触性传染病，山羊和绵羊易感，但山羊发病率和病死率均较高，易感羊群发病率通常达60%以上，病死率可达50%以上，特急性、急性病死率高达100%，目前尚无有效的治疗方法。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。

2007 年，PPR 首次传入我国西藏阿里地区，自2013 年底起，全国多个省份均发生PPR。近期，以色列、蒙古国、阿尔及利亚、利比亚等境外国家陆续发现羊群感染小反刍兽疫，而我国西北方西藏自治区、新疆维吾尔自治区、青海省等地也陆续发现多起小反刍兽疫，虽然都及时按照有关预案和当地要求开展疫情处置工作，但仍给养殖户造成了不可挽回的损失。近年来，浏阳市通过强制免疫、监测、调运监管等综合措施使得该病得到有效控制。为评估2021 年的PPR 流行情况和抗体水平，浏阳市动物疫病预防控制中心对辖区内部分规模羊场进行抽检，对其采集的样品开展病原学和血清学的检测。现将检测结果分析如下。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2021 年8 月，浏阳市动物疫病预防控制中心随机选取了辖区内存栏50 只以上的规模羊场41 家，采样地点覆盖浏阳市4 个分区，采集样品共2,160 份，其中羊眼-鼻拭子样品1,352 份，血清样品808 份，所有样品采集至实验室后立即置于-20℃保存，备检。

1.2 实验器材

荧光定量PCR 仪，核酸提取仪，电热恒温培养箱，12 道移液器，单道移液器、离心机、酶标仪、纯水仪、冰箱、生物安全柜等。

1.3 检测试剂及方法

小反刍兽疫检测参照国标规定方法（GB/T 27987-2011）。小反刍兽疫病毒单重荧光PCR 检测试剂盒来源于北京亿森宝生物科技有限公司；小反刍兽疫竞争ELISA 抗体检测试剂盒来源于中国农业科学院兰州兽医研究所。检测步骤及判定标准均按照各项目试剂盒说明书执行。

2 结果与分析

2.1 总体情况

本次共检测存栏50 只以上的规模羊场41 家，涵盖浏阳市东西南北4 个片区，累计检测样品2,160 份次，其中眼-鼻拭子样品病原学检测1,352 份次，均未检出PPRV 核酸阳性，血清学检测808 份次，整体抗体水平为60.02%。

2.2 场点分布情况

从场点的统计结果来看，在10 个被抽检的乡镇中，有8 个乡镇的小反刍兽疫抗体水平高于农业农村部最低标准70%，其中西区和北区的羊场抗体水平均已达标，不达标的羊场分布在东区的小河乡和南区的中和镇。

表1 各乡镇小反刍兽疫抗体水平检测结果

3 小结与讨论

3.1 血清学检测结果分析

从本次小反刍兽疫的专项检测结果来看，各乡镇的小反刍兽疫免疫抗体水平参差不齐，整体水平低于农业农村部的最低标准70%，仅有60.02%，80%的乡镇抗体效价达标，2 个乡镇存在多家羊场抗体水平远低于70%的情况。根据浏阳市2021 年重大动物疫病免疫效果评估的检测结果，5 月PPR 的抗体检测评估结果为97.63%，11 月抗体检测评估结果为93.79%，本次检测时间为8月，介于两个时间节点之间，抗体水平整体呈现下降的情况，分析其原因，可能是由于7—8 月尚未开展小反刍兽疫的免疫接种工作，免疫期限已过或尚未进行补免，从而导致机体内的小反刍兽疫的抗体水平较低。

3.2 病原学检测结果分析

按照浏阳市小反刍兽疫监测计划要求，每年在春季和秋季各进行一次集中监测，常规监测根据各乡镇（街道）实际情况进行计划。目前，在湖南省、长沙市等上级部门的统一部署下，全省将逐步推行PPR 退出强制免疫的工作。2021 年2 月份在永安镇某养羊户从外市交易市场调入的羊群出现过小反刍兽疫可疑病例，已迅速按照当地动物疫情防控要求将病羊及同群羊18 只实施强制扑杀和无害化处理，全场内外进行全面大消毒和垫料、废弃物等的无害化处理，及时消除疫情扩散风险，同时组织对该养殖户周边3km范围内所有羊只进行小反刍兽疫紧急免疫。现从本次病原学的检测结果来看，尽管PPR 的整体抗体水平仅为60.02%，但并未检测出PPRV 核酸阳性，由此可见该市辖区内的小反刍兽疫疫病防控成效较好。

3.3 小反刍兽疫诊断技术分析

目前，除采用GB/T 27982-2011《小反刍兽疫诊断技术》规定的临床症状和病理变化进行诊断外，还包括很多其他的病原学和血清学的诊断方法，其中病原鉴定主要有以下几种：①电镜观察法。根据病毒粒子的形态特征和大小等特点使用电镜技术进行观察而进行的诊断，此方法对仪器设备和技术人员的要求都较高，临床上较为少用；②病毒培养法。通过采集发病羊只的病料，选择急性期或具有明显临床症状的眼-口鼻试子、淋巴结组织或血液等样品，使用羔羊原代肾细胞或VERO 细胞、绵阳上皮细胞等进行分离培养，此方法所需时间较长，适用于对小反刍兽疫病毒进行更加深入的研究；③琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）和对流免疫电泳（CIEP）法。通过分离样品中的病毒上清与标准抗血清之间的抗原抗体特异性反应检测病毒抗原的一种方法，CIEP 的灵敏度高于AGID；④间接免疫荧光抗体试验（IFAT）法。该方法要具有病毒特异性单抗的条件才可开展检测，可对羊只发病初期和后期的病料进行检测并作出快速的鉴别诊断；⑤夹心酶联免疫吸附试验（sELISA）。1994 年Jeremiah 等利用病料组织中含有PPRV 粒子，通过捕获抗体和特异性检测抗体建立的一种夹心ELISA 方法；⑥核酸识别法（PCR）。基于病毒的核酸序列进行检测，针对病毒特异性的N、F、P 基因建立的PCR 和qPCR 检测方法，能快速、灵敏并特异的对病毒的存在进行检测，而qPCR 不仅可以判断样品中是否存在病原污染，还能通过荧光探针和模板特异性结合由仪器采集荧光信号达到定量的目的，对病毒的丰度进行研究。而血清学鉴定的方法主要包括中和实验和竞争酶联免疫测定法（cELISA）。中和试验的敏感性和特异性较好，但耗时较长、操作较为复杂，不适合大规模的样品检测。cELISA 的使用较为广泛，主要是利用PPRV核蛋白（N）单克隆抗体来构建的一种酶联免疫吸附法，用来检测血清中是否含有PPR 的抗体，若存在，则会与单抗竞争性结合病毒蛋白表位，快速的检测样品中是否存在PPR 抗体。

3.4 关于小反刍兽疫疫病防控的几点建议

①多管齐下抓实疫情风险排查和监测预警。进一步加强对规模养殖场、农贸市场和大型超市销售摊位等重点场所的监测范围和力度，同时督导落实消毒灭原、生物安全体系建设、应急处置等综合防控措施，严防病毒在各环节交叉污染，尤其要截断病毒从其他环节向养殖场户的传播途径；②多方联动抓强动物卫生监督和执法监管。建议市、镇两级农业执法机构切实加强与公安、市场监督等执法单位的协同互动，建立联合打击违规调运、私屠滥宰、随意丢弃病死动物等不法行为的常态化机制，完善相关有奖举报制度，强化体制机制保障；③多措并举抓细防控技术培训和督查指导。各乡镇（街道）要切实加强动物疫病防控相关政策、生物安全知识、消毒灭原技术规范等方面的宣传普及，在养殖密集区、农贸市场销售区等实行“小区域单元格式”防控，严格落实“风险排查+重点监控”“隔离防护+消毒灭原”等措施。

3.5 小结

浏阳市位于湘东山地丘陵地区，牧草资源较为丰富，全市年出栏二十余万只，养殖规模化不高，大部分为散养养殖，圈牧混合为主，管理粗放，养殖环境一般，养殖户疫病防控意识较差，缺乏良好的生物安全条件。虽然小反刍兽疫检测阳性情况较为罕见，但该病的防控意识不可松懈，各级动物疫病防控人员要进一步提高认识，做好各级生物安全防控，根据实际情况合理制定免疫计划，免疫后定期做好抗体水平监测，实时观察动物的临床饲养情况，有效降低疫情发生风险，提高养殖效率。